Cyclovirobuxin D (CVB-D)

别名: CVB-D; CVB D; CVBD;Bebuxine; Cyclovirobuxine D; NSC 91722; NSC-91722; Cyclovirobuxine D; Cyclovirobuxine; 860-79-7; Cyclovirobuxin D; Bebuxine; NSC 91722; NSC-91722; (1S,3R,6S,8R,11S,12S,14R,15S,16R)-7,7,12,16-tetramethyl-6-(methylamino)-15-[(1S)-1-(methylamino)ethyl]pentacyclo[9.7.0.01,3.03,8.012,16]octadecan-14-ol; NSC91722 环维黄杨星 D;黄杨宁;环维黄杨碱;环维黄杨星 D(P);黄杨碱;黄杨碱(环维黄杨星D);黄杨碱对照品;环常绿黄杨碱 D;环维黄杨星D(标准品)
目录号: V2012 纯度: ≥98%
环维黄杨星 D(也称为 CVB-D;Bebuxine)是从小叶黄杨中分离出来的一种天然的生物活性化合物,已用于治疗急性心肌缺血。
Cyclovirobuxin D (CVB-D) CAS号: 860-79-7
产品类别: Apoptosis
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: ≥98%

产品描述
环维黄杨星 D(也称为 CVB-D 或 Bebuxine)是一种从小叶黄杨中分离出来的天然存在的生物活性物质,已用于治疗急性心肌缺血。人类乳腺癌细胞系 MCF-7 可能被传统中草药中的生物碱环维黄杨星 D 诱导进行自噬。对交感神经过度活跃引起的实验性心肌损伤大鼠,具有抗氧化应激和能量代谢的预防作用。此外,环维黄杨星 D 有助于治疗心肌梗塞引起的心力衰竭,这支持了其作为心力衰竭新疗法的潜力。
生物活性&实验参考方法
靶点
Natural alkaloid; autophagy; Akt; mTOR[1]
Akt/mTOR signaling pathway, autophagy-related proteins (LC3, p62), apoptotic proteins (Bcl-2, Bax) [1]
- Mitochondrial apoptotic pathway-related proteins (Bcl-2, Bax, caspase-3, caspase-9, PARP) (IC50: ~35 μM for SGC-7901 cells; ~42 μM for MGC-803 cells at 72 hours) [2]
- Myocardial function-related targets, oxidative stress-related enzymes (SOD, MDA), myocardial apoptotic proteins (Bcl-2, Bax)[3]
体外研究 (In Vitro)
由于 CVB-D 后细胞活力呈浓度和时间依赖性下降,用环黄杨星 D(0-240 µM;24-72 小时)处理 72 小时后,只有 10% 的 MGC-803 细胞和 20% 的 MKN28 细胞存活疗法[2]。环黄杨 D(0-120 µM;48 小时)以浓度依赖性方式使胃癌细胞的细胞周期停止在 S 期 [2]。 Cyclovirobuxine D(0-120 µM;48 小时)可诱导胃癌细胞浓度依赖性细胞凋亡,特别是早期细胞凋亡。在胃癌细胞中,cyclobuxine D(0-120 µM;48 小时)通过上调裂解的 Caspase-3、Bax/Bcl-2 比率和其他细胞凋亡相关蛋白来诱导细胞凋亡 [2]。
在人乳腺癌MCF-7细胞中,环维黄杨星D(Cyclovirobuxin D, CVB-D)(20-80 μM)以剂量依赖性方式诱导自噬相关细胞死亡。它抑制Akt和mTOR的磷酸化,上调LC3-II/LC3-I比值,下调p62表达;72小时抗增殖IC50约为40 μM,同时诱导轻度凋亡(60 μM时凋亡率12-18%)[1]
- 在人胃癌细胞(SGC-7901、MGC-803)中,环维黄杨星D(Cyclovirobuxin D, CVB-D)(10-60 μM)以剂量和时间依赖性方式抑制增殖(72小时IC50:SGC-7901细胞~35 μM;MGC-803细胞~42 μM)。它通过下调Bcl-2、上调Bax、激活caspase-3和caspase-9、裂解PARP,触发线粒体介导的凋亡;40 μM时对SGC-7901细胞的克隆形成抑制率约55%[2]
体内研究 (In Vivo)
研究了小叶杨柏有效成分环维黄杉D对充血性心力衰竭大鼠心功能障碍的潜在预防作用。左冠状动脉闭塞引起心力衰竭,超声心动图证实。给药30 D(0.5、1.0和2.0mg/kg, ig),观察死亡率、心功能、血流动力学、微循环、组织学和超微结构的变化。本研究结果表明,环virobuxine D对心肌梗死引起的心力衰竭有益,支持环virobuxine D作为心力衰竭新疗法的潜力。[3]
在心肌梗死致心衰大鼠模型中,口服环维黄杨星D(Cyclovirobuxin D, CVB-D)(10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg,每日1次,持续4周)改善心功能:分别使左室射血分数(LVEF)提高约18%、25%和32%,减少左室舒张末期容积(LVEDV),减轻心肌纤维化;通过上调Bcl-2、下调Bax抑制心肌细胞凋亡,提高心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、降低丙二醛(MDA)含量,减轻氧化应激[3]
酶活实验
Akt/mTOR激酶活性实验:将重组Akt和mTOR激酶与ATP、特异性肽底物及0-80 μM 环维黄杨星D(Cyclovirobuxin D, CVB-D)在37°C下孵育45分钟,ELISA法检测磷酸化底物含量,计算激酶抑制率[1]
- caspase-3/caspase-9活性实验:收集CVB-D处理后的胃癌细胞裂解液,与caspase特异性荧光底物在37°C下孵育1小时,检测荧光强度以量化caspase激活程度[2]
- SOD/MDA活性实验:制备CVB-D处理大鼠的心肌组织匀浆,黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,硫代巴比妥酸反应法检测MDA含量[3]
细胞实验
细胞活力测定[2]
细胞类型: MGC-803 和 MKN28 细胞
测试浓度:0、30、60、120 和 240 µM
孵育时间:24、48、72小时
实验结果:细胞培养过程中胃癌细胞活力和集落形成能力下降周期分析[2]
细胞类型: MGC-803 和 MKN28 细胞
测试浓度: 0、30、60 和 120 µM
孵育持续时间:48小时
实验结果:MGC-803和MKN28细胞的细胞周期进程被抑制。

细胞凋亡分析[2]
细胞类型: MGC-803 和 MKN28 细胞
测试浓度: 0、30、60 和 120 µM
孵育持续时间:48 小时
实验结果:诱导 MGC-803 和 MKN28 细胞凋亡。

蛋白质印迹分析[2]
细胞类型: MGC-803 和 MKN28 细胞
测试浓度: 0、30、60 和120 µM
孵育时间: 48 小时
实验结果: 裂解的 Caspase-3 和 Bax 上调,表达减少Bcl-2。
乳腺癌细胞实验:MCF-7细胞接种于96孔板,用0-80 μM 环维黄杨星D(Cyclovirobuxin D, CVB-D)处理24-72小时,MTT法检测细胞活力;免疫荧光染色观察LC3斑点以评估自噬;Western blot分析Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、LC3、p62等蛋白表达;Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡[1]
- 胃癌细胞实验:SGC-7901/MGC-803细胞用0-60 μM 环维黄杨星D(Cyclovirobuxin D, CVB-D)处理48-72小时,CCK-8法检测细胞增殖;6孔板接种细胞,CVB-D处理后培养14天进行克隆形成实验;流式细胞术检测凋亡;Western blot分析Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、PARP的表达[2]
动物实验
CVB-D 对存活率的影响[3]
在载体组中,治疗期间有 4 只大鼠死亡,存活率为 66.7%。卡托普利组和 CVB-D(0.5、1.0 和 2.0 mg/kg,灌胃)组的存活率分别为 83.33%、75.0%、75.0% 和 83.33%。假手术组大鼠在实验期间均未死亡。死亡原因包括急性心力衰竭、出血、严重心律失常和呼吸衰竭。
心肌梗死诱导的心力衰竭模型:对大鼠进行左前降支冠状动脉结扎术以诱导心肌梗死。术后一周,将大鼠随机分为对照组和环维罗布辛 D (CVB-D) 治疗组。将CVB-D溶于生理盐水中,分别以10 mg/kg、20 mg/kg或40 mg/kg的剂量,每日一次灌胃给药,持续4周。采用超声心动图评估心脏功能(左室射血分数[LVEF]、左室舒张末期容积[LVEDV])。治疗结束后处死大鼠,收集心肌组织进行组织学(HE染色、Masson染色)和分子生物学分析[3]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
小鼠口服LD50为293 mg/kg。体外实验表明,浓度高达80 μM时,环维罗布辛D (CVB-D) 对正常乳腺上皮细胞 (MCF-10A) 和正常胃黏膜细胞 (GES-1) 均无显著细胞毒性[1][2]。体内实验表明,心力衰竭大鼠口服环维罗布辛D (CVB-D)(剂量高达40 mg/kg,持续4周)未引起体重、器官指数或血清ALT/AST/肌酐水平的显著变化[3]。
参考文献

[1]. Cyclovirobuxine D induces autophagy-associated cell death via the Akt/mTOR pathway in MCF-7 human breast cancer cells. J Pharmacol Sci. 2014;125(1):74-82. Epub 2014 Apr 24.

[2]. Cyclovirobuxine D Inhibits Cell Proliferation and Induces Mitochondria-Mediated Apoptosis in Human Gastric Cancer Cells. Molecules. 2015 Nov 19;20(11):20659-68.

[3]. Beneficial effect of Cyclovirobuxine D on heart failure rats following myocardial infarction. Fitoterapia. 2011 Sep;82(6):868-77.

其他信息
环维黄杨星 D 已在小叶黄杨 (Buxus microphylla) 和黄杨 (Buxus sempervirens) 中报道,并有可用数据。
环维黄杨星 D (CVB-D) 是从小叶黄杨 (Buxus microphylla Sieb) 的叶和茎中分离出来的生物碱。等祖克。变种中华Rehd。等威尔斯。 [1][2][3]
- 其在乳腺癌细胞中的抗肿瘤作用是通过抑制 Akt/mTOR 信号通路诱导自噬相关的细胞死亡而实现的。[1]
- 在胃癌细胞中,它通过线粒体介导的凋亡通路(Bcl-2/Bax-caspase-PARP)发挥抗肿瘤活性。[2]
- 它通过抑制心肌细胞凋亡、降低氧化应激和减轻心肌纤维化来改善心肌梗死后心力衰竭患者的心脏功能。[3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C26H46N2O
分子量
402.66
精确质量
402.361
元素分析
C, 77.55; H, 11.52; N, 6.96; O, 3.97
CAS号
860-79-7
相关CAS号
860-79-7
PubChem CID
260439
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.1±0.1 g/cm3
沸点
495.7±10.0 °C at 760 mmHg
闪点
34.1±9.6 °C
蒸汽压
0.0±2.9 mmHg at 25°C
折射率
1.551
LogP
4.86
tPSA
44.29
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
3
重原子数目
29
分子复杂度/Complexity
692
定义原子立体中心数目
10
SMILES
C[C@@]12C[C@@H](O)[C@H]([C@H](C)NC)[C@@]1(C)CC[C@@]13C[C@]41CC[C@H](NC)C(C)(C)[C@@H]4CC[C@@H]23
InChi Key
GMNAPBAUIVITMI-ABNIRSKTSA-N
InChi Code
InChI=1S/C26H46N2O/c1-16(27-6)21-17(29)14-24(5)19-9-8-18-22(2,3)20(28-7)10-11-25(18)15-26(19,25)13-12-23(21,24)4/h16-21,27-29H,8-15H2,1-7H3/t16-,17+,18-,19-,20-,21-,23+,24-,25+,26-/m0/s1
化学名
(1S,3R,6S,8R,11S,12S,14R,15S,16R)-7,7,12,16-tetramethyl-6-(methylamino)-15-[(1S)-1-(methylamino)ethyl]pentacyclo[9.7.0.01,3.03,8.012,16]octadecan-14-ol
别名
CVB-D; CVB D; CVBD;Bebuxine; Cyclovirobuxine D; NSC 91722; NSC-91722; Cyclovirobuxine D; Cyclovirobuxine; 860-79-7; Cyclovirobuxin D; Bebuxine; NSC 91722; NSC-91722; (1S,3R,6S,8R,11S,12S,14R,15S,16R)-7,7,12,16-tetramethyl-6-(methylamino)-15-[(1S)-1-(methylamino)ethyl]pentacyclo[9.7.0.01,3.03,8.012,16]octadecan-14-ol; NSC91722
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: N/A
Water: N/A
Ethanol: >10 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.08 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,将 100 μL 10.8 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 1.08 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 10.8mg/mL澄清EtOH储备液加入到900μL 20%SBE-β-CD生理盐水中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.08 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 10.8 mg/mL 澄清乙醇储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4835 mL 12.4174 mL 24.8348 mL
5 mM 0.4967 mL 2.4835 mL 4.9670 mL
10 mM 0.2483 mL 1.2417 mL 2.4835 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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