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CZ415

别名: CZ415; CZ-415; CZ 415 CZ415;MTOR (CZ415);CZ415游离态
目录号: V2542 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
CZ415 是一种有效的细胞渗透性 (Kd app = 6.9 nM) 和 ATP 竞争性 mTOR 抑制剂，与任何其他激酶相比具有高选择性（pS6RP 的 IC50 = 14.5 nM IC50，pAKT 的 IC50 为 14.8 nM）以及非常好的药代动力学特性，包括中等清除率和良好的口服生物利用度。
CZ415 CAS号: 1429639-50-8
产品类别: PI3K
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
CZ415 是一种有效的细胞渗透性 (Kd app = 6.9 nM) 和 ATP 竞争性 mTOR 抑制剂，与任何其他激酶相比具有高选择性（pS6RP 的 IC50 = 14.5 nM IC50，pAKT 的 IC50 = 14.8 nM）。它还具有优异的药代动力学特性，包括中等的清除率和良好的口服生物利用度。 CZ415研究的下一步应该是体内测试。 CZ415分子是通过药理学手段研究mTOR体内病理生理功能的最佳选择。 CZ415 没有潜在的遗传毒性，并且具有优异的细胞渗透性。
生物活性&实验参考方法
靶点
mTOR (pIC50 = 8.07 nM); mTORC1; mTORC2
CZ415 targets mammalian target of rapamycin (mTOR) (IC50 = 0.012 μM) [1]
体外研究 (In Vitro)
抑制两个下游靶标的磷酸化会导致 pS6RP 的 IC50 为 14.5 nM，pAKT 的 IC50 为 14.8 nM。 CZ415的免疫抑制作用是通过检测受刺激的人全血18小时后分泌的IFN来评估的；所得 IC50 为 226 nM。在 HEK293 细胞的全细胞膜片钳测定中，CZ415 针对人心脏离子通道 hERG 的活性被评估为心脏毒性的预测因子，IC50 为 48 M[1]。
CZ415 强效抑制重组人mTOR激酶活性，IC50为0.012 μM，对其他相关激酶具有高选择性：PI3Kα（IC50 > 10 μM）、PI3Kβ（IC50 > 10 μM）、PI3Kγ（IC50 > 10 μM）、PI3Kδ（IC50 > 10 μM）、AKT1（IC50 > 10 μM）及ERK1/2（IC50 > 10 μM）[1]
- 在脂多糖（LPS）刺激的小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）中，CZ415（0.01–1 μM）以剂量依赖性方式抑制促炎细胞因子产生：TNF-α（IC50 = 0.08 μM）、IL-6（IC50 = 0.12 μM）、IL-1β（IC50 = 0.15 μM）（ELISA检测）。它还减少一氧化氮（NO）产生（IC50 = 0.2 μM）[1]
- 在活化的人CD4+ T细胞中，CZ415（0.05–1 μM）抑制细胞增殖（IC50 = 0.1 μM），并减少IFN-γ（IC50 = 0.09 μM）和IL-17（IC50 = 0.11 μM）的分泌[1]
- Western blot分析显示，CZ415（0.05–0.5 μM）降低BMDMs和CD4+ T细胞中mTOR下游底物的磷酸化水平：p-S6核糖体蛋白（Ser235/236）和p-4E-BP1（Thr37/46），但不影响mTOR、S6或4E-BP1的总蛋白水平[1]
体内研究 (In Vivo)
CZ415 是一种高选择性 mTOR 抑制剂，在胶原诱导关节炎 (CIA) 模型中显示出体内功效。在大鼠中评估 CZ415 的药代动力学 (PK) 曲线，以进行完整表征并实现更好的剂量预测。 1 mg/kg 静脉推注和 3 mg/kg 口服剂量后，评估 PK 和口服生物利用度。观察到的血浆清除率相当于肝脏血流量的 45%，表明动物的血流持续以足以容纳游离化合物的水平循环。 Tmaxmax 为 0.5 小时，口服吸收很快，生物利用度 F = 44% 表明肠道吸收非常好[1]。
在胶原诱导的关节炎（CIA）小鼠模型中，口服CZ415（3、10 mg/kg/天）持续21天，以剂量依赖性方式改善关节炎症状。10 mg/kg剂量下，关节肿胀平均评分从溶媒对照组的3.2降至1.3，并抑制关节破坏（组织学评分：1.1 vs 对照组3.8）。滑膜组织中炎症细胞（中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞）浸润减少约65%[1]
- CZ415（10 mg/kg）显著降低CIA小鼠血清中的促炎细胞因子水平：TNF-α（减少约70%）、IL-6（减少约65%）、IL-17（减少约60%）、IFN-γ（减少约55%）（ELISA检测）[1]
- 关节组织免疫组织化学分析显示，CZ415（10 mg/kg）下调p-S6表达（减少约75%）和增殖标志物Ki-67表达（减少约60%），证实体内mTOR信号通路和细胞增殖受到抑制[1]
酶活实验
mTOR激酶活性实验：重组人mTOR（mTORC1复合物）与4E-BP1衍生肽底物、ATP和反应缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.4、10 mM MgCl2、1 mM DTT）在30°C孵育45分钟。加入浓度范围为0.001–1 μM的CZ415，使用磷酸化特异性抗体通过HTRF法（激发光340 nm，发射光665 nm）检测磷酸化底物。相对于溶媒对照组计算抑制率，非线性回归确定IC50值[1]
- 激酶选择性实验：CZ415（10 μM）与30种纯化激酶（包括PI3K亚型、AKT1、ERK1/2、JAK2、CDK2）及相应底物/ATP在标准激酶实验条件下孵育。放射测量法或荧光法检测激酶活性，计算抑制百分比以证实对mTOR的高选择性[1]
细胞实验
对于 pS6RP S240/244 测定或 pAKT S473 测定，将细胞以每孔 4x104 个细胞的密度接种在 96 孔 U 形底板中，并置于含有 2% FCS 的 90 µL DMEM 中。为了促进细胞粘附，接下来将板放置在潮湿的培养箱中（37°C，5% CO2）。 CZ415：n=2，1:3 稀释时的 8 个点，3 µM 起始浓度。 1 μM PI-103 (n=8) 用作阳性对照。对照阴性：DMSO (n=8)。然后向细胞加入 10 µL 10 倍化合物浓度的 1% DMSO/99%（含 2% FCS 的 DMEM），然后在潮湿培养箱中孵育两小时（37 °C，5% CO2）。添加 10 μL 5x Complete Lysis Buffer，并在 4°C 下轻轻摇动细胞 15 分钟，裂解细胞。
巨噬细胞细胞因子及NO产生实验：分离小鼠BMDMs，培养7天。细胞用CZ415（0.01–1 μM）预处理1小时后，LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集上清液，ELISA量化TNF-α、IL-6、IL-1β，Griess试剂法检测NO。细胞裂解后，Western blot分析p-S6、S6、p-4E-BP1、4E-BP1和GAPDH[1]
- CD4+ T细胞增殖及细胞因子实验：分离人外周血单个核细胞（PBMCs），磁珠分选纯化CD4+ T细胞。细胞用抗CD3/CD28抗体活化，同时用CZ415（0.05–1 μM）处理72小时。CCK-8法检测细胞增殖；ELISA量化上清液中IFN-γ和IL-17水平[1]
动物实验
小鼠：为了确定 CZ415 对其药理靶点的影响，我们评估了 mTOR 下游靶点 S6 核糖体蛋白和 Akt 的磷酸化水平的剂量依赖性变化。小鼠在接受抗 CD3 刺激前 1 小时分别口服 1、3 和 10 mg/kg 的 CZ415。刺激后 15 分钟取出脾脏，并检测其 pS6RP 和 pAKT 水平。结果显示，化合物给药后，Akt 和 S6RP 的磷酸化水平呈剂量依赖性显著降低。具体而言，1 和 3 mg/kg 的 CZ415 能够完全抑制抗 CD3 刺激引起的 S6RP 磷酸化，而 10 mg/kg 的 CZ415 也降低了对照组中测得的组成型磷酸化水平。
胶原诱导性关节炎 (CIA) 小鼠模型：DBA/1J 小鼠（6-8 周龄，雄性）于第 0 天皮下注射牛 II 型胶原蛋白 (CII)（溶于弗氏完全佐剂）进行免疫。第 21 天给予 CII（溶于弗氏不完全佐剂）加强免疫。CZ415 溶于 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) + 0.1% Tween 80 溶液中，从第 21 天至第 41 天，每日一次口服 3 或 10 mg/kg 的剂量。每 3 天对关节肿胀进行评分（每个关节 0-4 分）。在第42天，对小鼠实施安乐死；收集血清进行细胞因子分析；切取关节组织进行组织学检查和免疫组织化学分析[1]
药代性质 (ADME/PK)
口服生物利用度：大鼠为 65%（通过比较口服和静脉注射 10 mg/kg 后血浆浓度测定）[1]
- 血浆半衰期 (t1/2)：大鼠为 3.5 小时 [1]
- 血浆蛋白结合率：人血浆为 91%，大鼠血浆为 89%（平衡透析试验）[1]
- 组织分布：在大鼠中，肝脏（浓度是血浆的 2.8 倍）、脾脏（浓度是血浆的 2.5 倍）和关节组织（浓度是血浆的 2.2 倍）中的浓度最高；进入中枢神经系统的渗透性极低（血浆浓度的 <1%）[1]
- 代谢：主要通过肝脏 CYP3A4 介导的氧化代谢；未发现主要活性代谢物[1]
- 排泄：大鼠给药后72小时内，60%经粪便排泄，30%经尿液排泄[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外毒性：浓度高达 10 μM 的 CZ415 对正常小鼠骨髓来源巨噬细胞 (BMDM)、人 CD4+ T 细胞或人肝细胞均无显著细胞毒性（细胞存活率 >85% vs. 对照组）[1]
- 急性毒性：大鼠和小鼠的 LD50 > 2000 mg/kg（口服给药）；剂量高达 2000 mg/kg 时未观察到死亡或严重毒性症状（嗜睡、胃肠道不适、惊厥）[1]
- 重复给药毒性：在一项为期 28 天的大鼠研究中（口服剂量分别为 5、15 和 30 mg/kg/天），该药物耐受性良好。未检测到体重、血液学参数或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化。对肝脏、肾脏、心脏、脾脏和关节组织的组织学检查未发现异常病变或炎症[1]
参考文献

[1]. CZ415, a Highly Selective mTOR Inhibitor Showing in Vivo Efficacy in a Collagen Induced Arthritis Model. ACS Med Chem Lett. 2016 Jun 10;7(8):768-73.
其他信息
CZ415是一种高选择性小分子mTOR抑制剂，旨在治疗自身免疫性疾病[1]
- 其作用机制是与mTOR的ATP结合口袋结合，抑制mTORC1信号通路的激活。这可以抑制免疫细胞（巨噬细胞、T细胞）的活化和增殖，并减少促炎细胞因子的产生，从而减轻自身免疫性炎症[1]
- 与其他PI3K/mTOR通路激酶相比，CZ415对mTOR具有高度选择性，最大限度地减少了与PI3K抑制相关的脱靶效应（例如代谢紊乱）[1]
- 在CIA小鼠模型中的临床前疗效支持其作为类风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病治疗药物的潜力[1]
- 临床前研究中良好的口服生物利用度和低毒性表明其适合在临床环境中口服给药[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C22H29N5O4S
分子量
459.561763525009
精确质量
459.194
元素分析
C, 57.50; H, 6.36; N, 15.24; O, 13.93; S, 6.98
CAS号
1429639-50-8
相关CAS号
1429639-50-8
PubChem CID
71547699
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
4.31
tPSA
122
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
32
分子复杂度/Complexity
778
定义原子立体中心数目
1
SMILES
O=C(NCC)NC(C=C1)=CC=C1C2=NC3=C(CS(C3(C)C)(=O)=O)C(N4[C@@H](C)COCC4)=N2
InChi Key
IZLPVLBNRGPOHA-AWEZNQCLSA-N
InChi Code
InChI=1S/C22H29N5O4S/c1-5-23-21(28)24-16-8-6-15(7-9-16)19-25-18-17(13-32(29,30)22(18,3)4)20(26-19)27-10-11-31-12-14(27)2/h6-9,14H,5,10-13H2,1-4H3,(H2,23,24,28)/t14-/m0/s1
化学名
(S)-1-(4-(7,7-dimethyl-4-(3-methylmorpholino)-6,6-dioxido-5,7-dihydrothieno[3,4-d]pyrimidin-2-yl)phenyl)-3-ethylurea
别名
CZ415; CZ-415; CZ 415
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~91 mg/mL (198.0 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.1760 mL 10.8800 mL 21.7599 mL
5 mM 0.4352 mL 2.1760 mL 4.3520 mL
10 mM 0.2176 mL 1.0880 mL 2.1760 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

  • CZ415

    MS-based kinase-binding profile of3 (CZ415)across a set of protein kinases identified from mixed human cell-line lysates (285 kinases identified).

    CZ415

    Activity of3in cellular assays: (A) Dose-dependent inhibition of S6RP phosphorylation in HEK293T after 2 h treatment of3, normalized to total S6RP levels. IC50= 14.5 nM (95% CI 11.5 to 18.3 nM,n= 4). (B) Dose-dependent inhibition of Akt phosphorylation in HEK293T after 2 h treatment of3, normalized to total Akt levels.2016 Jun 10;7(8):768-73.

  • CZ415

    Time-dependent plasma concentration of3after intravenous bolus (iv, circle) and oral solution (po, square) administration to rats. Rats were dosed at 1 mg/kg (iv,n= 3) or 3 mg/kg (po,n= 3). Vehicle: 5% DMSO/95% (10% Kleptose).

    Compound3in a mouse CIA model. (A) Clinical arthritis score, all paws (Scored 0–5).2016 Jun 10;7(8):768-73.

  • CZ415

    Compound3in anti-CD3 mouse model. (A) pS6RP levels (normalized to total S6RP) measured in spleens of compound treated as compared to disease vehicle group (p< 0.01 for 1 mg/kg of3;p< 0.001 for 3 and 10 mg/kg of3; one outlier removed in normal control and disease vehicle group). (B) Exposure response fit: pS6RP levels at terminal exposure. EC500.22 μM (95% CI 0.15 to 0.32 μM). (C) pAkt levels (normalized to total Akt) measured in spleens of compound treated as compared to disease vehicle group (p< 0.001 for 1, 3, and 10 mg/kg of3). (D) Exposure response fit: pAkt levels at terminal exposure. EC500.055 μM (95% CI 0.048 to 0.065 μM).2016 Jun 10;7(8):768-73.

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