| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PI3Kβ (IC50 = 1.1 μM); PI3Kδ (IC50 = 8.194 μM); PI3Kγ (IC50 = 27 nM)
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase γ (PI3Kγ, p110γ/p101 complex) - IC50 ~1.2 nM (recombinant human PI3Kγ, HTRF-based kinase activity assay)[1] - Ki ~0.7 nM (recombinant human PI3Kγ, ATP-competitive binding assay)[1] 2. Ultra-high selectivity over other PI3K subtypes and kinases: - PI3Kα (p110α/p85α): IC50 > 10,000 nM (same HTRF assay as PI3Kγ)[1] - PI3Kβ (p110β/p85α): IC50 > 8,000 nM (same assay)[1] - PI3Kδ (p110δ/p85α): IC50 > 5,000 nM (same assay)[1] - No significant inhibition of 60+ unrelated kinases (e.g., AKT, STAT3, ERK, JAK3) at 1 μM concentration[1] [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CZC24832 在 PI3Kγ 依赖性细胞 C5a 诱导的 AKT Ser473 磷酸化 (IC50=1.2 μM) 和 N-甲酰基甲硫氨酸-亮氨酸苯丙氨酸 (fMLP) 诱导的中性粒细胞迁移测定中具有活性 (IC50=1.0 μM)[1]。
1. Th17细胞分化抑制（文献[1]）： - 小鼠脾脏 naive CD4+ T细胞： - 用TGF-β（2 ng/mL）+ IL-6（20 ng/mL）+ IL-23（10 ng/mL）诱导72小时分化为Th17细胞。100 nM CZC24832 将IL-17A+ Th17细胞比例从溶媒组的~35%降至~8%（流式细胞术，细胞内IL-17A染色）；50 nM时降至~15%。 - 200 nM CZC24832 较溶媒组降低IL-17A mRNA表达~80%、RORγt（Th17谱系转录因子）mRNA表达~75%（qRT-PCR）。 - 人外周血 naive CD4+ T细胞： - 用TGF-β（1 ng/mL）+ IL-6（30 ng/mL）+ IL-23（15 ng/mL）诱导96小时分化为Th17细胞。200 nM CZC24832 较溶媒组减少IL-17A分泌~70%（ELISA）、IL-17F分泌~65%（ELISA）[1] 2. Th17细胞中PI3Kγ-AKT信号抑制（文献[1]）： - 小鼠Th17分化中的CD4+ T细胞与CZC24832（10-500 nM）孵育1小时后，用IL-23（10 ng/mL）刺激15分钟。50 nM CZC24832 降低磷酸化AKT（Ser473）~85%、磷酸化AKT（Thr308）~80%（Western blot）；100 nM完全阻断IL-23诱导的AKT活化。 - 浓度高达500 nM时，对Th1（IFN-γ+细胞）或Treg（Foxp3+细胞）分化无影响，证实Th17细胞选择性[1] [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
CZC24832 显示出合适的药代动力学特性，包括低清除率（0.84 L/h/kg 体重）和高口服生物利用度（37%），从而可以在啮齿动物炎症模型中进一步表征该抑制剂。 CZC24832 在 IL-8 依赖性气囊模型中表现出粒细胞募集的剂量依赖性减少（10 mg/kg 体重时抑制 80%），这与 PI3K 缺失小鼠中观察到的抑制水平一致。每天两次口服每公斤体重 10 毫克 CZC24832 的小鼠，骨和软骨破坏量显着减少（根据组织病理学分析，减少 53%），大多数临床参数也是如此（减少 38%）[1] 。
1. EAE（实验性自身免疫性脑脊髓炎）模型保护（文献[1]）： - 动物：雌性C57BL/6小鼠（6-8周龄），每组8只；适应环境7天（12小时光/暗周期，自由摄食饮水）。 - EAE诱导：第0天和第2天，用MOG₃5-55肽（200 μg/只）乳化于CFA（完全弗氏佐剂）+ 百日咳毒素（200 ng/只，腹腔注射）免疫小鼠。 - 给药：CZC24832 溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃10或30 mg/kg/天，第0天开始（预防方案），持续21天。溶媒组给予0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80。 - 药效： - 疾病严重度：30 mg/kg CZC24832 将EAE临床评分（0-5分制）从峰值~3.5（溶媒组）降至~1.0（p < 0.01）；疾病发病延迟~5天。 - 炎症反应：30 mg/kg组脊髓中CD4+IL-17A+细胞浸润较溶媒组减少~70%（免疫组化），血清IL-17A水平减少~65%（ELISA）。 - 组织病理学：30 mg/kg CZC24832 较溶媒组减少脊髓脱髓鞘（劳克氏坚牢蓝染色）和小胶质细胞活化（Iba1+细胞）~60%[1] [1] |
| 酶活实验 |
使用 LK 基质的竞争结合测定基本上如上所述进行，但适应 384 孔格式。每孔使用 0.25 mg 细胞裂解液和 2.5 μL 珠子。筛选库中的化合物（包括作为标准的参考化合物）以 40 μM 终浓度从 50× DMSO 库存中添加。每个板包含 15 个阳性对照和 17 个阴性对照。 4°C 结合 2 小时后，用裂解缓冲液洗涤珠子去除未结合的部分。保留在珠子上的蛋白质在 SDS 样品缓冲液中洗脱，并使用自动针工具液体转移点样在硝酸纤维素膜上（400 nL/点）。干燥后，将膜在 20% 乙醇中再水化，并按照指示进行处理以使用特定抗体进行检测，然后与标记的二抗一起孵育以进行可视化。使用扫描仪量化点强度，并使用阳性和阴性对照分别作为 100% 和 0% 抑制来计算抑制百分比。
1. PI3Kγ激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kγ（p110γ/p101复合物）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂，溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记链霉亲和素-ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3Kγ、底物混合液及系列浓度CZC24832（0.001-100 nM），设置溶媒对照组（0.1% DMSO）校准激酶活性。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体 + XL665标记二抗），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm（Eu³+信号）/665 nm（XL665信号））。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，通过非线性回归（GraphPad Prism）推导IC50。 2. PI3Kγ ATP竞争性结合实验： - 试剂制备：重组PI3Kγ（p110γ/p101）固定于链霉亲和素包被96孔板。荧光ATP类似物（FITC-ATP）溶于结合缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，5 mM MgCl₂，0.1% BSA），终浓度100 nM。 - 反应体系：100 μL混合物含固定化PI3Kγ、100 nM FITC-ATP及系列浓度CZC24832（0.001-10 nM）。室温孵育90分钟。 - 检测：结合缓冲液洗涤平板3次去除未结合成分，测定荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。使用竞争性结合方程计算Ki（ATP与PI3Kγ的Km=14 μM，单独实验测定）。 3. 激酶选择性实验： - 试剂制备：60余种重组激酶（如AKT1、STAT3、ERK2、JAK3）重悬于亚型特异性激酶缓冲液，加入对应底物及ATP（浓度=各激酶的Km值）。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM激酶、底物、ATP及1 μM CZC24832。30℃孵育45分钟。 - 检测：通过放射活性（[γ-³²P]-ATP掺入）或荧光实验定量磷酸化底物，所有非PI3Kγ激酶的抑制率<5%[1] [1] |
| 细胞实验 |
将 RAW264.7 或 THP-1 细胞在无血清培养基中饥饿 2.5 小时，然后将 CZC24832（0.1、1、10 和 100 μM）在 37°C 下孵育 30 分钟。然后，在 37°C 下用胰岛素（1 uM，10 分钟）或 CSF（50 g/mL，5 分钟）刺激 THP-1 细胞，然后在冰上裂解。然后用浓度为 0.6 μM 的 C5a 刺激 RAW264.7 细胞 3 分钟。 iBlot 系统用于识别 AKT 磷酸化 (Ser473)[1]。
1. 小鼠naive CD4+ T细胞分离与Th17分化实验： - 细胞分离：小鼠脾脏研磨制备单细胞悬液，磁珠分选纯化naive CD4+ T细胞（CD4+CD62L+CD44low），用含10% FBS + 50 μM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基重悬。 - 分化诱导：细胞接种于24孔板（2×10⁵个/孔），加入TGF-β（2 ng/mL）+ IL-6（20 ng/mL）+ IL-23（10 ng/mL）；接种时加入CZC24832（10-500 nM）或溶媒（0.1% DMSO）。37℃、5% CO₂孵育72小时。 - 流式检测：收集细胞，抗CD4抗体表面染色后，4%多聚甲醛固定、0.1%皂素透化，再用抗IL-17A抗体细胞内染色。流式细胞术分析，计算IL-17A+细胞比例。 2. Th17相关基因qRT-PCR实验： - RNA提取：TRIzol试剂提取Th17分化中CD4+ T细胞的总RNA，逆转录合成cDNA。 - qPCR反应：用IL-17A、RORγt及内参GAPDH的引物，结合SYBR Green预混液进行扩增。2⁻ΔΔCt法计算相对表达量。 3. AKT磷酸化Western blot实验： - 细胞裂解：Th17分化中的CD4+ T细胞经CZC24832处理并IL-23刺激后，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。 - 蛋白检测：每泳道上样30 μg蛋白，10% SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗p-AKT（Ser473/Thr308）、抗总AKT及抗GAPDH抗体孵育，ImageJ定量条带灰度[1] [1] |
| 动物实验 |
小鼠：本研究在雄性Wistar大鼠中考察了CZC24832的药代动力学和口服生物利用度。大鼠分别单次静脉注射（0.2 mg/kg体重）或口服（10 mg/kg体重）给药。口服灌胃的给药介质为0.5% (w/v)羧甲基纤维素水溶液。静脉注射的给药溶剂为10% (v/v)二甲基亚砜(DMSO)的30% (v/v)聚乙二醇400溶液。血浆样本的制备方法为：小鼠经眼眶后静脉抽取肝素抗凝血，大鼠经舌下抽取肝素抗凝血。对于 HPLC-MS/MS CZC24832 分析，将样品用 10% (v/v) 水和三倍体积的乙腈匀浆。
1. 小鼠 EAE 模型方案：- 动物：雌性 C57BL/6 小鼠（6-8 周龄）在实验室条件下适应 7 天，可自由摄取标准饲料和水（12 小时光照/黑暗循环）。- EAE 诱导：- 第 0 天：小鼠尾根部皮下注射 200 μg MOG₃5-55 肽（溶于 CFA 中，1:1 v/v，含 500 μg 热灭活结核分枝杆菌）。- 第 0 天和第 2 天：小鼠腹腔注射百日咳毒素（200 ng/只）以增强 EAE 的发展。 - 药物配制：将 CZC24832 溶解于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中（室温搅拌 2 小时以确保完全溶解，未观察到沉淀）。通过调整药物浓度配制 10 mg/kg 和 30 mg/kg 的剂量。- 给药：将小鼠随机分为 3 组（每组 n=8）：- 溶剂组：从第 0 天到第 21 天，每日一次灌胃 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液（10 μL/g 体重）。- 低剂量 CZC24832 组：每日一次灌胃 10 mg/kg CZC24832 溶液（10 μL/g 体重），持续 21 天。 - 高剂量 CZC24832 组：每日一次灌胃给予 30 mg/kg CZC24832（10 μL/g 体重），持续 21 天。- 评估：- 临床评分：每日对 EAE 严重程度进行评分（0 = 无症状；1 = 尾部无力；2 = 后肢无力；3 = 后肢瘫痪；4 = 前肢和后肢瘫痪；5 = 濒死）。- 组织分析：第 21 天处死小鼠；取出脊髓，用 4% 多聚甲醛固定，石蜡包埋。切片用 Luxol Fast Blue（脱髓鞘）和抗 Iba1/抗 IL-17A 抗体（免疫组织化学）染色，以量化脱髓鞘和炎症细胞浸润。- 血清细胞因子：收集第 21 天的血清；通过 ELISA 法测定 IL-17A 水平[1] [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：- 小鼠/人幼稚CD4+ T细胞、Th17细胞和正常人外周血单核细胞（PBMC）：浓度高达1 μM的CZC24832未显示非特异性细胞毒性。LDH释放试验显示，暴露72小时后泄漏率<10%（与溶剂对照组相比）；台盼蓝排除试验显示细胞活力>90%。- 人肝细胞：500 nM CZC24832显示增殖抑制率<15%，证实脱靶毒性低[1]
2. 体内毒性：- 小鼠（口服10-30 mg/kg/天CZC24832，持续21天）：无死亡或异常行为（例如，共济失调、嗜睡、食物摄入量减少）；体重维持在初始体重的90%以上（30 mg/kg组：22.5 ± 1.2 g vs. 初始体重23.0 ± 1.0 g）。- 血清生化指标（第21天）：ALT/AST（肝功能）和肌酐（肾功能）均在正常范围内（ALT：52 ± 6 U/L vs. 正常值40-60 U/L；AST：118 ± 10 U/L vs. 正常值100-130 U/L；肌酐：55 ± 4 μmol/L vs. 正常值50-70 μmol/L，每组n=5）。- 组织病理学：在接受治疗的小鼠的肝脏、肾脏、脾脏或脊髓中未观察到药物引起的损伤。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 作用机制：CZC24832 是一种选择性 PI3Kγ 抑制剂，可与 PI3Kγ 催化亚基 p110γ 的 ATP 结合口袋结合。这种结合阻断了 PI3Kγ 介导的 PIP₂ 磷酸化为 PIP₃，从而抑制 Th17 细胞中下游 AKT 的激活。AKT 信号传导的减弱会损害 Th17 谱系特异性转录因子 RORγt 和细胞因子 IL-17 的表达，最终抑制 Th17 细胞的分化和功能——而这正是多发性硬化症（以 EAE 为模型）等自身免疫性疾病的关键驱动因素。[1] 2. 临床前意义：- 验证了 PI3Kγ 作为 Th17 介导的自身免疫性疾病的新型治疗靶点。本研究证实 CZC24832 能特异性抑制 Th17 细胞分化（不影响 Th1/Treg 细胞）并缓解 EAE，为开发用于治疗多发性硬化症、银屑病和类风湿性关节炎等疾病的 PI3Kγ 抑制剂提供了理论基础。- CZC24832 具有良好的口服生物利用度（EAE 中的口服疗效表明其具有良好的口服疗效）和安全性，支持其作为研究自身免疫模型中 PI3Kγ-Th17 轴的临床前工具的潜力。[1] 3. 局限性：- 未报告临床开发数据（例如，FDA 批准状态）；CZC24832 仍是一种研究工具化合物，而非治疗候选药物。- 疗效仅在 EAE（多发性硬化症模型）中评估；在其他 Th17 介导的自身免疫性疾病模型（例如，胶原蛋白诱导性关节炎）或人类临床样本中没有相关数据[1]
[1] |
| 分子式 |
C15H17FN6O2S
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|---|---|
| 分子量 |
364.3979
|
| 精确质量 |
364.111
|
| 元素分析 |
C, 49.44; H, 4.70; F, 5.21; N, 23.06; O, 8.78; S, 8.80
|
| CAS号 |
1159824-67-5
|
| 相关CAS号 |
1159824-67-5
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| PubChem CID |
42623951
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.687
|
| LogP |
1.27
|
| tPSA |
124.38
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
578
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
S(C1=C([H])N=C([H])C(C2C([H])=C(C3=NC(N([H])[H])=NN3C=2[H])F)=C1[H])(N([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])(=O)=O
|
| InChi Key |
RXRZPHQBTHQXSV-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C15H17FN6O2S/c1-15(2,3)21-25(23,24)11-4-9(6-18-7-11)10-5-12(16)13-19-14(17)20-22(13)8-10/h4-8,21H,1-3H3,(H2,17,20)
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| 化学名 |
5-(2-amino-8-fluoro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridin-6-yl)-N-tert-butylpyridine-3-sulfonamide
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| 别名 |
CZC24832; CZC 24832; CZC-24832
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~5 mg/mL warming (~13.7 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.86 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.86 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 0.5% CMC: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7442 mL | 13.7212 mL | 27.4424 mL | |
| 5 mM | 0.5488 mL | 2.7442 mL | 5.4885 mL | |
| 10 mM | 0.2744 mL | 1.3721 mL | 2.7442 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Design and characterization of CZC24832, a selective PI3Kγ inhibitor. Nat Chem Biol, 2012, 8(6), 576-582. |
Cellular activity profile of CZC24832 |
Asperosaponin V
PIP5K1A Recombinant Human Active Lipid Kinase
PIK3CG Recombinant Human Active Lipid Kinase
PI3K/mTOR-IN-18
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COA
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463611831
