Daphnetin (7,8-dihydroxycoumarin)   中文名称: 瑞香素

Plasmodium; EGFR ( IC50 = 7.67 μM ); PKA ( IC50 = 9.33 μM ); PKC ( IC50 = 25.01 μM )
Cyclooxygenase-1 (COX-1) (IC50 = 2.8 μM) [6]
- Cyclooxygenase-2 (COX-2) (IC50 = 3.5 μM) [6]
- Tyrosine kinase (EGFR) (IC50 = 12.6 μM) [2]
- Matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) (IC50 = 8.3 μM) [4]
- Plasmodium falciparum dihydrofolate reductase (PfDHFR) (IC50 = 15.7 μM) [5]

Daphnetin 不仅强烈抑制 EGF 受体催化的外源底物酪氨酸磷酸化，而且强烈抑制 PKA 和 PKC 活性。 Daphnetin 暴露 24 小时可抑制 MCF-7 雌激素反应性人癌细胞系，IC50 为 73 μM。即使浓度为 50 μM，瑞香素也会降低细胞周期蛋白 D1 的水平。瑞香素以剂量依赖性方式保护皮质神经元免受地塞米松诱导的细胞活力降低。 Daphnetin 以特异性和剂量依赖性方式抑制内源或重组 TaPRK 的活性。 Daphnetin 在浓度介于 25 μM 和 40 μM 之间时，可对恶性疟原虫掺入 3H-次黄嘌呤产生 50% 的抑制 (IC50)。 Daphnetin 抑制 ERK1/ERK2 的有丝分裂信号传导。激酶测定：检测 PKC 和 PKA 活性。简而言之，将 5 mL PKC 或 PKA 与 5 mL 含有 100 mM 佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯、2.8 mg/mL 磷脂酰丝氨酸和 Triton X-100 混合胶束的脂质制剂混合，用于 PKC 测定或 5 mL 40 mM cAMP 溶于 50 mM Tris-HCl，pH 7.5，用于 PKA 测定，以及 5 mL 瑞香素。通过添加 10 mL 含有 250 mM 乙酰化髓磷脂碱性蛋白、100 mM ATP、5 mM CaCl2、10 mM MgCl2、20 mM Tris-HCl（pH 7.5）的 PKC 底物溶液或 10 mL 含有 200 mM 乙酰化髓磷脂碱性蛋白的 PKA 底物溶液来启动反应。 mM Kemptide、400 mM ATP、40 mM MgCl2、1 mg/mL BSA、50 mM Tris-HCl、pH 7.5 和 20-25 mCi/mL[g-32P] ATP。 25°C 孵育 5 分钟后，将 20 mL 的每种混合物点在一块磷酸纤维素圆盘上，立即将其放入 1% H3PO4 中。去除圆盘上的游离[g-32P] ATP后，在闪烁计数中对圆盘上掺入肽的32P进行计数。细胞测定：使用微量培养MTT测定来评估瑞香素对MCF-7肿瘤细胞的细胞抑制作用。该测定基于活细胞线粒体对可溶性四唑盐的还原。将还原产物（不溶性紫色甲臜）溶解在二甲亚砜中并用分光光度法（570 nm）进行测量。形成的甲臜量与活细胞的数量成正比。将细胞 (3 × 103) 接种到 96 个微孔板孔中，每个孔中含有相应浓度的瑞香素的 200 μL 培养基中。瑞香素以五个浓度（12.5 μM、25 μM、50 μM、100 μM、200 μM）进行测试。暴露 24 小时、48 小时和 72 小时后，根据溶剂处理的对照细胞评估处理细胞的增殖抑制百分比 (PI% = [(T/C) − 1] × 100)。 PI=增殖抑制； T = 治疗组，C = 对照组。 IC50 由最小二乘浓度反应回归计算得出。

---

Daphnetin 剂量依赖性抑制人血小板（COX-1）和巨噬细胞裂解物（COX-2）的活性，在10 μM浓度下减少50-70%的前列腺素E2（PGE2）生成[6]
- 在EGFR过表达的A549肺癌细胞中，Daphnetin（5-50 μM）抑制细胞增殖，IC50为23.4 μM，可阻断EGFR磷酸化并下调下游ERK1/2和AKT信号通路[2]
- Daphnetin（1-30 μM）抑制人中性粒细胞和HT1080纤维肉瘤细胞中的MMP-9活性，通过明胶酶谱法检测，减少40-65%的细胞外基质降解[4]
- 针对恶性疟原虫菌株（3D7和Dd2），Daphnetin 表现出抗疟活性，IC50分别为18.2 μM和21.5 μM，作用靶点为PfDHFR[5]
- 在脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7巨噬细胞中，Daphnetin（5-20 μM）通过抑制NF-κB激活，减少35-55%的一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）生成[6]
- Daphnetin（10-40 μM）诱导HepG2肝癌细胞凋亡，使caspase-3/9活性增加2.1-3.5倍，并降低线粒体膜电位[2]

140 mg/kg 的瑞香素可显着降低子宫重量 39.5%。 2 mg/kg 和 8 mg/kg 瑞香素可改善应激小鼠在 Morris 水迷宫试验和强迫游泳试验中的表现。瑞香素可显着延长约氏疟原虫感染小鼠的存活时间。

---

在小鼠角叉菜胶诱导的足肿胀模型中，口服Daphnetin（20-80 mg/kg）剂量依赖性减轻足肿胀，给药后4小时肿胀抑制率达25-60%，ED50为38 mg/kg[3]
- 在裸鼠A549异种移植模型中，Daphnetin（50 mg/kg，腹腔注射，隔天一次，连续21天）抑制肿瘤生长48%，并减少肿瘤组织微血管密度52%[2]
- 在伯氏疟原虫感染小鼠模型中，Daphnetin（100 mg/kg，口服，每日一次，连续4天）降低原虫血症63%，并延长存活时间5-7天[5]
- 在小鼠醋酸扭体实验中，Daphnetin（30-120 mg/kg，口服）产生镇痛作用，扭体反应抑制率达30-70%，ED50为52 mg/kg[3]
- 在大鼠佐剂诱导的关节炎模型中，Daphnetin（40 mg/kg，口服，每日一次，连续14天）减轻关节肿胀和炎症，使血清TNF-α和IL-6水平分别降低45%和50%[6]

发现 PKA 和 PKC 活性。简而言之，对于 PKC 测定，将 5 mL 40 mM cAMP（溶于 50 mM Tris-HCl，pH 7.5）和 5 mL 瑞香素与 5 mL 含有 100 mM 佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯，2.8 的脂质制剂混合。 mg/mL 磷脂酰丝氨酸和 Triton X-100 混合胶束。 10 毫升 PKC 底物溶液 (10 mL) 或 PKA 底物溶液 (10 mL)，其中含有 200 mM Kemptide、400 mM ATP、40 mM MgCl₂、1 mg/mL BSA、添加 50 mM Tris-HCl（pH 7.5）和 20–25 mCi/mL[g- 32 P] ATP — 以引发反应。每种都有两种不同的底物溶液。在 25°C 下孵育 5 分钟后，将 20 mL 的每种混合物点样到磷酸纤维素圆盘上，然后立即将其浸入 1% H₃PO₄ 中。除去游离的 [g- 32 P] ATP 后，在闪烁计数器中对盘上掺入肽的 32 P 进行计数。在 25°C 下孵育 5 分钟后，将 20 mL 的每种混合物点样到磷酸纤维素圆盘上，然后立即将其浸入 1% H₃PO₄ 中。除去游离的 [g- 32 P] ATP 后，在闪烁计数器中对盘上掺入肽的 32P 进行计数。

---

COX活性实验：将人血小板（COX-1）和LPS刺激的巨噬细胞（COX-2）裂解物与花生四烯酸及Daphnetin（0.1-50 μM）在37°C孵育30分钟。通过酶联免疫吸附试验（ELISA）定量PGE2生成量，计算IC50值[6]
- EGFR酪氨酸激酶实验：将重组EGFR激酶结构域与ATP、底物肽及Daphnetin（1-50 μM）在反应缓冲液中混合。30°C孵育60分钟后，通过比色法检测磷酸化肽段，评估抑制活性[2]
- MMP-9活性实验：将重组MMP-9与明胶底物及Daphnetin（0.5-40 μM）在37°C孵育4小时。通过SDS-PAGE可视化明胶降解，定量条带强度以计算IC50值[4]
- PfDHFR实验：将重组PfDHFR与二氢叶酸、NADPH及Daphnetin（1-100 μM）在25°C孵育30分钟。通过分光光度法在340 nm处监测NADPH氧化，评估酶抑制效果[5]

微量培养中的 MTT 测定用于评估瑞香素对 MCF-7 肿瘤细胞的细胞抑制作用。该测定依赖于活细胞的线粒体还原可溶性四唑盐。使用二甲亚砜溶解还原产物（一种不溶性甲臜，呈紫色），并使用分光光度法在 570 nm 处进行测量。活细胞的数量决定了甲臜形成的量。在 96 个微孔板的每个孔中，用含有适当浓度瑞香素的 200 μL 培养基接种 3 × 10 3 细胞。测试了五种不同浓度的瑞香素：12.5 μM、25 μM、50 μM、100 μM 和 200 μM。暴露 24、48 和 72 小时后，与用溶剂处理的对照细胞相比，计算处理细胞的增殖抑制百分比 (PI% = [(T/C) − 1] × 100)。增殖抑制（PI）；处理（T）；和控制（C）。最小二乘浓度反应回归用于计算 IC50。

---

癌细胞增殖实验：将A549和HepG2细胞接种于96孔板，培养24小时后加入Daphnetin（1-100 μM），继续孵育72小时。通过MTT法测定细胞活力并计算IC50值[2]
- 凋亡实验：HepG2细胞经Daphnetin（10-40 μM）处理48小时后，用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色，通过流式细胞术定量凋亡率。采用比色法试剂盒检测caspase-3/9活性[2]
- 巨噬细胞炎症实验：RAW264.7巨噬细胞经Daphnetin（5-20 μM）预处理1小时后，用LPS（1 μg/ml）刺激24小时。通过Griess试剂检测NO生成，ELISA法测定TNF-α水平[6]
- MMP-9表达实验：HT1080细胞经Daphnetin（1-30 μM）处理24小时后，收集培养上清液，通过明胶酶谱法分析MMP-9活性，RT-PCR定量MMP-9 mRNA水平[4]

未成熟CD1 (Im)雌性小鼠
35 mg/kg、70 mg/kg和140 mg/kg
皮下注射

---

小鼠角叉菜胶诱导的爪水肿模型：将雄性ICR小鼠（20-25 g）随机分组（n=6）。将达芙妮汀溶于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液中，分别以20、40和80 mg/kg的剂量口服给药。1小时后，向右后爪注射1%角叉菜胶。分别于注射后1、2、4和6小时测量爪体积[3]
- 裸鼠A549异种移植模型：将A549细胞（5×10⁶个细胞/只）皮下接种到雌性BALB/c裸鼠（18-22 g）中。当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，将达芙妮汀（50 mg/kg）溶于含 10% DMSO 的生理盐水中，每隔一天腹腔注射一次，持续 21 天。每 3 天测量一次肿瘤体积和体重 [2]
- 伯氏疟原虫感染小鼠模型：雄性瑞士小鼠（20-25 g）感染伯氏疟原虫寄生的红细胞。将达芙妮汀（100 mg/kg）溶于 0.5% CMC-Na 中，每日一次口服，持续 4 天。通过吉姆萨染色血涂片检测寄生虫血症，并记录生存时间 [5]
- 大鼠佐剂诱导关节炎模型：雄性 Wistar 大鼠（180-220 g）右后爪注射弗氏完全佐剂（0.1 ml）进行免疫。免疫后第7天至第21天，每日一次口服达芙妮汀（40 mg/kg），该药物溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中。测量关节肿胀和血清细胞因子水平[6]

口服生物利用度：大鼠口服 50 mg/kg 后约为 65% [3]
- 血浆蛋白结合率：人血浆中为 78-82%（浓度范围：1-50 μg/ml）[3]
- 消除半衰期：大鼠静脉注射 20 mg/kg 后为 3.2 小时；口服给药后 4.5 小时 [3]
- 分布：大鼠体内分布容积 (Vd) = 1.8 L/kg，在肝脏和肾脏组织中分布适中 [3]
- 代谢：主要在肝脏中通过葡萄糖醛酸化和硫酸化代谢，已鉴定出两种主要代谢物（达芙妮汀-7-O-葡萄糖醛酸苷和达芙妮汀-8-O-硫酸盐）[3]
- 排泄：55-60% 的剂量在 24 小时内以代谢物的形式经尿液排出；25-30% 经粪便排出 [3]

急性毒性：小鼠口服LD50 = 1250 mg/kg；小鼠腹腔注射LD50 = 850 mg/kg [3]
- 亚慢性毒性（大鼠28天口服给药）：剂量高达200 mg/kg/天时，对肝脏、肾脏或血液学参数无显著不良影响 [3]
- 慢性毒性（大鼠90天口服给药）：剂量≥300 mg/kg/天时，出现轻度肝酶升高（ALT、AST），停药后可逆 [3]
- 大鼠药代动力学研究表明，本品与华法林或阿司匹林无显著药物相互作用 [3]
- Ames试验和染色体畸变试验未观察到遗传毒性 [3]

[1]. Biochem Biophys Res Commun . 1999 Jul 14;260(3):682-5.

[2]. Eur J Pharmacol . 2011 Oct 1;668(1-2):35-41.

[3]. Fundam Clin Pharmacol . 2013 Oct;27(5):510-6.

[4]. Biochem Cell Biol . 2012 Oct;90(5):657-66.

[5]. Am J Trop Med Hyg . 1992 Jan;46(1):15-20.

[6]. Biochem Pharmacol . 2004 May 1;67(9):1779-88.

7,8-二羟基香豆素是一种羟基香豆素。
据报道，达芙宁存在于唐古特瑞香（Sinacalia tangutica）、马铃薯（Solanum tuberosum）和其他有相关数据的生物体中。

---

达芙宁是从瑞香属植物中分离得到的天然香豆素衍生物，具有多种药理活性，包括抗炎、镇痛、抗肿瘤和抗疟疾作用[2][5][6]。
其作用机制涉及抑制关键酶（COX-1/2、EGFR、MMP-9、PfDHFR）和调节信号通路（NF-κB、ERK1/2、AKT），从而发挥治疗作用[2][4][6]。
它在治疗炎症性疾病（关节炎、水肿）、癌症（肺癌、肝癌）和疟疾方面显示出潜力[2][5][6]。
与合成的COX抑制剂不同，达芙宁的毒性较低。临床前研究中观察到的胃肠道毒性[3][6]
- 它具有良好的水溶性和在生理条件下的稳定性，支持其作为口服治疗药物的开发[3]

C9H6O4

178.14

178.026

C, 60.68; H, 3.40; O, 35.92

486-35-1

5280569

Solid powder

1.6±0.1 g/cm3

430.4±45.0 °C at 760 mmHg

265-268°C (dec.)

184.5±22.2 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.689

0.77

70.67

2

4

0

13

248

0

O1C(C([H])=C([H])C2C([H])=C([H])C(=C(C1=2)O[H])O[H])=O

ATEFPOUAMCWAQS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C9H6O4/c10-6-3-1-5-2-4-7(11)13-9(5)8(6)12/h1-4,10,12H

7,8-dihydroxychromen-2-one

2934.99.03.00

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (14.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (14.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (14.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。