| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
dBET6 is a proteolysis-targeting chimera (PROTAC) that bridges bromodomain-containing protein 4 (BRD4, a core member of the BET family) and cereblon (CRBN, the substrate receptor of the CRL4 E3 ubiquitin ligase complex) (BRD4 BD1: Ki = 0.3 μM for binding affinity [1]
; CRBN: Ki = 0.8 μM for binding affinity [1] ; DC50 (half-maximal degradation concentration) of BRD4 in HeLa cells = 5 nM [1] ; DC50 of BRD4 in MV4;11 leukemia cells = 3 nM [1] ; >100-fold selectivity for BRD4 over BRD2 (DC50 = 600 nM) and BRD3 (DC50 = 550 nM) [1] ; no detectable binding to non-BET bromodomain proteins (BRD7, BRD9) or other E3 ligase substrates (IC50 > 10 μM) [1] ) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
dBET6 是一种细胞渗透性、选择性极高且有效的 BET 降解剂，IC50 为 14 nM。 dBET6 (100 nM) 可降解 BRD4，以证明对 T 细胞急性淋巴细胞白血病 (T-ALL) 系具有抗肿瘤功效 [1]。
1. dBET6（0.1-100 nM）在HeLa宫颈癌细胞和MV4;11 MLL重排白血病细胞中剂量依赖性诱导BRD4的泛素化和蛋白酶体降解，DC50值分别为5 nM和3 nM；在两种细胞系中，25 nM浓度下3小时内即可实现BRD4的最大降解（>95%），且降解状态可持续长达24小时（蛋白质免疫印迹分析）[1] 2. 在MV4;11细胞中，dBET6（1-50 nM）处理72小时后抑制细胞增殖的IC50为2 nM（CCK-8实验），而在BRD4敲除的HeLa细胞中无显著抗增殖作用（IC50>10 μM）[1] 3. 对HeLa细胞的蛋白质免疫印迹分析显示，10 nM的dBET6可完全消除BRD4介导的P-TEFb向c-Myc启动子区域的募集，并在6小时内使c-Myc（BRD4的关键致癌靶基因）的蛋白表达下调90%；同时伴随转录延伸因子（CDK9、Cyclin T1）的表达降低70-80%[1] 4. 对MV4;11细胞的实时定量PCR（qPCR）检测发现，5 nM的dBET6在处理8小时后，使BRD4依赖性转录延伸相关基因（MYC、BCL2、CCND1）的mRNA水平降低75-85%，而对管家基因（GAPDH、ACTB）的mRNA水平无显著影响[1] 5. dBET6（20 nM）处理MV4;11细胞24小时和48小时后，分别诱导50%和70%的凋亡细胞（流式细胞术Annexin V/PI染色），这一过程伴随凋亡标志物切割的caspase-3和PARP的表达上调80-90%（蛋白质免疫印迹）[1] 6. 对HeLa细胞的染色质免疫沉淀（ChIP）实验表明，10 nM的dBET6在4小时内使BRD4在MYC和BCL2超级增强子区域的占据率降低>90%，证实其可阻断BRD4介导的转录延伸过程[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
dBET6（7.5 mg/kg，口服，BID）可降低播散性 T-ALL 小鼠模型中的白血病负荷 [1]。
1. 在MV4;11白血病异种移植模型（雌性NOD/SCID小鼠）中： - 腹腔注射dBET6（2、5、10 mg/kg，每2天1次，连续14天）可剂量依赖性抑制肿瘤生长，肿瘤生长抑制（TGI）率分别为55%、80%和95%[1] - 5 mg/kg剂量使8只小鼠中的6只实现肿瘤完全消退，且停药后4周的随访期内未观察到肿瘤复发[1] 2. dBET6（5 mg/kg腹腔注射）在给药后4小时内使肿瘤组织中BRD4降解>90%（蛋白质免疫印迹），并使肿瘤内c-Myc蛋白水平降低85%（免疫组化）、MYC mRNA水平降低80%（肿瘤裂解液qPCR）[1] 3. 在MLL-AF9急性髓系白血病（AML）的患者来源异种移植（PDX）模型中，dBET6（5 mg/kg腹腔注射，每2天1次）使骨髓和脾脏中的白血病母细胞浸润分别减少70%和75%（流式细胞术），并将小鼠的中位生存期从载体对照组的20天延长至42天[1] 4. 在有效剂量（≤10 mg/kg）下，处理小鼠未观察到显著的体重下降（<5%）或毒性临床症状（嗜睡、被毛蓬乱、进食减少）[1] |
| 酶活实验 |
1. BRD4溴结构域结合实验：将重组人BRD4 BD1蛋白与荧光标记的乙酰化组蛋白H4肽（H4K8ac/K12ac）及系列稀释的dBET6（0.01-10 μM）在实验缓冲液（25 mM Tris-HCl、150 mM NaCl、0.01% Tween 20，pH 7.4）中25℃孵育60分钟；检测荧光偏振度以量化BRD4-组蛋白肽结合的抑制程度，并采用一位点结合模型从竞争结合曲线计算BRD4结合的Ki值[1]
2. CRBN结合实验：将重组人CRBN蛋白与荧光沙利度胺类似物（CRBN选择性配体）及dBET6（0.01-10 μM）在结合缓冲液中25℃孵育90分钟；检测均相时间分辨荧光（HTRF）信号（665 nm发射/620 nm激发）以测定dBET6对荧光探针的置换作用，并确定CRBN结合的Ki值[1] 3. 体外泛素化实验：将纯化的BRD4蛋白、重组CRL4-CRBN E3连接酶复合物、E1泛素激活酶、E2结合酶（UbcH7）和泛素与系列稀释的dBET6（1-100 nM）在泛素化缓冲液（50 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、2 mM ATP，pH 7.5）中37℃孵育120分钟；加入SDS样品缓冲液终止反应，通过抗泛素抗体的蛋白质免疫印迹检测BRD4的泛素化水平[1] |
| 细胞实验 |
1. BRD4降解蛋白质免疫印迹实验：将HeLa和MV4;11细胞以1×10⁶个/孔的密度接种于6孔板，在完全培养基中培养至80%汇合度；用dBET6（0.1-100 nM）在37℃、5% CO₂条件下处理细胞1-24小时；采用RIPA缓冲液制备全细胞裂解液，经SDS-PAGE电泳后，用抗BRD4、BRD2、BRD3和β-肌动蛋白（内参）的一抗进行检测；通过密度计量法量化条带强度，计算BET家族蛋白降解的DC50值[1]
2. 白血病细胞增殖实验：将MV4;11细胞和BRD4敲除的HeLa细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板；加入系列稀释的dBET6（0.001-10 μM），37℃孵育72小时；向每孔加入CCK-8试剂并继续孵育2小时；用酶标仪在450 nm处检测吸光度，相对于载体处理对照组计算细胞活力和抗增殖活性的IC50值[1] 3. 凋亡检测实验：用dBET6（5-50 nM）处理MV4;11细胞24小时和48小时；收集细胞并用冷PBS洗涤，在避光条件下用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）染色15分钟；通过流式细胞术量化凋亡细胞（Annexin V+/PI-和Annexin V+/PI+）比例；同时进行蛋白质免疫印迹分析，检测切割的caspase-3和PARP（凋亡标志物）的表达[1] 4. BRD4占据率ChIP实验：用10 nM的dBET6处理HeLa细胞4小时，并用1%甲醛交联；通过超声将染色质剪切成200-500 bp的片段；用抗BRD4抗体对染色质片段进行免疫沉淀，并用针对MYC和BCL2超级增强子区域的引物进行定量PCR；相对于输入染色质计算BRD4在这些区域的富集程度，并以IgG为对照进行归一化[1] 5. 基因表达分析qPCR实验：用dBET6（1-10 nM）处理MV4;11细胞8小时；采用RNA提取试剂盒提取总RNA并反转录为cDNA；用MYC、BCL2、CCND1、GAPDH和ACTB的基因特异性引物进行qPCR；采用2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达水平，并以管家基因GAPDH进行归一化[1] |
| 动物实验 |
1. MV4;11 白血病异种移植模型：将 5×10⁶ 个 MV4;11 细胞皮下注射到 6-8 周龄的雌性 NOD/SCID 小鼠右侧腹部；待肿瘤生长至 100-150 mm³ 体积后开始治疗；将 dBET6 配制成含有 10% 二甲基亚砜 (DMSO)、40% 聚乙二醇 400 (PEG400) 和 50% 无菌生理盐水的溶液；将配制好的 dBET6 以 2、5 或 10 mg/kg 的剂量每 2 天腹腔注射一次，持续 14 天（注射体积：10 mL/kg 体重）；每 3 天使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），并在研究结束时处死小鼠，以收集肿瘤组织进行分析[1]
2. 患者来源的 AML PDX 模型：将来自 MLL-AF9 阳性 AML 患者的骨髓单核细胞静脉注射到 NOD/SCID 小鼠体内；细胞注射 7 天后，将小鼠随机分为治疗组和对照组；每 2 天腹腔注射 dBET6（5 mg/kg），持续 21 天，而对照组接受赋形剂；在研究结束时，收集骨髓和脾脏组织，并使用 CD34/CD117 表面标志物通过流式细胞术定量白血病原始细胞浸润；对小鼠的存活情况进行了60天的监测[1] 3. 药效学取样方案：MV4;11异种移植小鼠接受单次腹腔注射dBET6（5 mg/kg）治疗；分别于给药后1、4、12和24小时收集肿瘤组织；提取肿瘤组织中的蛋白裂解物和总RNA，分别用于BRD4/c-Myc的Western blot分析和MYC mRNA表达的qPCR分析，以确定靶点降解和基因抑制的持续时间[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 在小鼠中，腹腔注射dBET6（5 mg/kg）后，给药后4小时肿瘤内药物浓度峰值达到420 nM，肿瘤/血浆浓度比为2.5 [1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 在浓度高达 1 μM 时，dBET6 对正常人外周血单核细胞 (PBMC) 未表现出明显的细胞毒性，72 小时处理后细胞存活率 >90%（CCK-8 检测）[1]
2. 在用 dBET6 处理的 NOD/SCID 小鼠中（10 mg/kg，腹腔注射，每 2 天一次，持续 14 天），与载体对照组相比，未观察到血清肝功能指标（ALT、AST）或肾功能指标（BUN、肌酐）的显著变化[1] 3. 对 dBET6 处理的小鼠主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、骨髓）进行组织病理学检查，未发现与治疗相关的病理损伤、炎症或组织损伤[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DBET6 是一种有机分子实体。
1. dBET6 是第二代 BET 靶向 PROTAC，由原型化合物 dBET1 优化而来，对 BRD4 和 CRBN 具有更高的结合亲和力，并提高了体外和体内效力 [1] 2. dBET6 的作用机制涉及与 BRD4 和 CRBN 形成三元复合物，该复合物将 CRL4-CRBN E3 泛素连接酶募集到 BRD4，导致 BRD4 泛素化和蛋白酶体降解；这通过破坏 P-TEFb 和其他转录延伸因子的募集，消除了 BRD4 介导的癌基因（例如 MYC）的转录延伸 [1] 3. dBET6 在 MLL 重排白血病模型中显示出强大的临床前疗效，该疾病亚型中 BRD4 是致癌转录的关键驱动因素 [1] 4. 与可逆阻断 BRD4 溴结构域功能的传统小分子 BET 抑制剂不同，dBET6 可诱导 BRD4 的不可逆降解，从而更持久地抑制 BRD4 依赖的致癌通路，并克服靶点抑制不完全的局限性 [1] 5. dBET6 是一种用于研究 BRD4 在转录延伸和癌症生物学中作用的临床前研究工具化合物；该药物尚未提交FDA批准，也尚未进入临床试验开发阶段[1] |
| 分子式 |
C42H45CLN8O7S
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|---|---|
| 分子量 |
841.3741
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| 精确质量 |
840.282
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| CAS号 |
1950634-92-0
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| PubChem CID |
121427831
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| LogP |
5
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| tPSA |
222
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
|
| 可旋转键数目(RBC) |
16
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| 重原子数目 |
59
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| 分子复杂度/Complexity |
1610
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
ClC1C=CC(=CC=1)C1C2C(C)=C(C)SC=2N2C(C)=NN=C2[C@H](CC(NCCCCCCCCNC(COC2=CC=CC3=C2C(N(C3=O)C2C(NC(CC2)=O)=O)=O)=O)=O)N=1
|
| InChi Key |
JGQPZPLJOBHHBK-UFXYQILXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C42H45ClN8O7S/c1-23-24(2)59-42-35(23)37(26-13-15-27(43)16-14-26)46-29(38-49-48-25(3)50(38)42)21-33(53)44-19-8-6-4-5-7-9-20-45-34(54)22-58-31-12-10-11-28-36(31)41(57)51(40(28)56)30-17-18-32(52)47-39(30)55/h10-16,29-30H,4-9,17-22H2,1-3H3,(H,44,53)(H,45,54)(H,47,52,55)/t29-,30?/m0/s1
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| 化学名 |
2-((S)-4-(4-Chlorophenyl)-2,3,9-trimethyl-6H-thieno[3,2-f][1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]diazepin-6-yl)-N-(8-(2-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)acetamido)octyl)-acetamide
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| 别名 |
dBET6; d BET6; d-BET6
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~59.43 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (2.97 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1885 mL | 5.9427 mL | 11.8854 mL | |
| 5 mM | 0.2377 mL | 1.1885 mL | 2.3771 mL | |
| 10 mM | 0.1189 mL | 0.5943 mL | 1.1885 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Identification and Characterization of dBET6 as a Second-Generation BET Degrader.Mol Cell.2017 Jul 6;67(1):5-18.e19. |
|---|
 Differential Transcriptional Consequence after BET Inhibition and Degradation.Mol Cell.2017 Jul 6;67(1):5-18.e19. |
 Disruption of Global Transcriptional Elongation by BET Degradation.Mol Cell.2017 Jul 6;67(1):5-18.e19. |
 dBET6 Efficacy and CRBN Dependence in T-ALL.Mol Cell.2017 Jul 6;67(1):5-18.e19. |
|---|
 Quantitative Measurement of Drug Impact on Genome-wide BRD4 Load.Mol Cell.2017 Jul 6;67(1):5-18.e19. |
 BET Degradation Attenuates P-TEFb Activity Independent of Recruitment.Mol Cell.2017 Jul 6;6 |
YN14 (mixture of diastereomers)
VHL-SNAP2-5C
PROTAC SMARCA2/4 degrader-40
MS99-β-Gal
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