| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MAP4K4 (IC50 = 3 nM); MAP4K4 (pIC50 = 8.55); MINK1/MAP4K6 (pIC50 = 8.18); TNIK/MAP4K7 (pIC50 = 7.96); GCK/MAP4K2 (pIC50 = 6.50); KHS/MAP4K5 (pIC50 = 6.36); GLK/MAP4K3 (pIC50 = 4.95 nM); MLK1/MAP3K9 (pIC50 = 7.19); MLK3/MAP3K11 (pIC50 = 6.99); NUAK (pIC50 = 6.88); VEGFR (pIC50 = 5.72); ABL1 (pIC50 = 5.80 nM); Aurora B (pIC50 = 5.49 nM); FLT3 (pIC50 = 5.31); GSK3β (pIC50 = 4.66)
DMX-5804 exhibits great selectivity at MAP4K4 over other kinases, such as GCK/MAP4K2 (pIC50, 6.50), GLK/MAP4K3 (pIC50, 4.95), GSK3β (pIC50, 4.66), KHS/MAP4K5 (pIC50, 6.36), MLK1/MAP3K9 (pIC50, 7.19), MLK3/MAP3K11 (pIC50, 6.99), NUAK (pIC50, 6.88) and VEGFR (pIC50, 5.72), ABL1 (pIC50, 5.80), Aurora B (pIC50, 5.49), FLT3 (pIC50, 5.31)[1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
与其他激酶相比，DMX-5804 对 MAP4K4 表现出极高的选择性，例如 GCK/MAP4K2 (pIC50, 6.50)、GLK/MAP4K3 (pIC50, 4.95)、GSK3β (pIC50, 4.66)、KHS/MAP4K5 (pIC50, 6.36)、MLK1/ MAP3K9 (pIC50, 7.19)、MLK3/MAP3K11 (pIC50, 6.99)、NUAK (pIC50, 6.88) 和 VEGFR (pIC50, 5.72)、ABL1 (pIC50, 5.80)、Aurora B (pIC50, 5.49)、FLT3 (pIC50, 5.31) ）[1]。
DMX-5804 能保护人诱导多能干细胞来源的心肌细胞 (hiPSC-CMs) 免受氧化应激诱导的细胞死亡。在 vCor.4U 心室肌细胞中，10 µM 的 DMX-5804 对高达 200 µM H2O2 或 45 µM 甲萘醌诱导的细胞死亡提供了近乎完全的保护，此结果通过 CellTiter-Glo 活力检测和人心脏肌钙蛋白 I 释放实验证实。 [1] 在 iCell 心肌细胞中，针对 400 µM H2O2 诱导的细胞死亡，DMX-5804 的半最大效应浓度 (EC50) 为 500 nM，但该值取决于氧化应激的水平。即使在氧化应激刺激后1小时给予 DMX-5804，仍能观察到部分保护作用。 [1] DMX-5804 (0.5-2 µM) 在经受亚致死剂量甲萘醌诱导的氧化应激的 hiPSC-CMs 中，能保护钙循环（峰值面积和峰值高度），且保护作用可持续长达96小时。 [1] 在浓度为10 µM时，DMX-5804 能将经甲萘醌处理的 hiPSC-CMs 的最大氧化能力（线粒体呼吸）提高5倍，并部分挽救细胞外酸化率（糖酵解功能）。 [1] 在由 vCor.4U 细胞构建的3D人工心脏组织中，10 µM 的 DMX-5804 能抑制甲萘醌在24小时内诱导的细胞死亡，并在处理后1小时和24小时完全挽救自发性搏动和收缩力产生。 [1] DMX-5804 在2D或3D培养条件下，对 hiPSC-CMs 的活力、节律性、钙处理、线粒体功能或收缩力产生均未显示不良影响。 [1] DMX-5804 对克隆的人源离子通道 hERG、hNaV1.5 和 hCaV1.2 无脱靶效应。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠心肌缺血-再灌注损伤模型中，口服给予 DMX-5804 (50 mg/kg，两次，间隔10小时) 能显著减小梗死面积。当在缺血前20分钟开始给药时，梗死面积（占危险区域的百分比）从48.5%减少到20.9%。当在再灌注（损伤后）1小时开始给药时，梗死面积从55.1%减少到25.6%。 [1]
在损伤后治疗的研究中，通过 TUNEL 染色检测，DMX-5804 还将梗死区内部及邻近危险心肌中的心肌细胞凋亡分别抑制了39%和52%。 [1] |
| 酶活实验 |
使用均相时间分辨荧光竞争性免疫分析法测定化合物对重组人 MAP4K4 激酶结构域的抑制活性。在该实验中，激酶反应产生 ADP，ADP 与染料标记的 ADP 示踪剂竞争结合铕穴状化合物标记的抗 ADP 抗体。信号通过测定665 nm和620 nm处的发射光比率来读取。反应在 ATP 处于其 Km 浓度 (10 µM)、MAP4K4 激酶结构域和生物素化髓鞘碱性蛋白底物存在下进行。抑制百分比是相对于含 DMSO 的对照反应（100%活性）和无酶反应（0%活性）计算的。通过绘制剂量反应曲线来确定 IC50 值。 [1]
针对包含 376 种人源激酶的 panel 评估了 DMX-5804 更广泛的激酶选择性谱。该化合物以其 MAP4K4 IC50 值的30倍浓度（即90 nM）进行测试。测定并报告了残留的激酶活性。 [1] |
| 细胞实验 |
细胞活力与死亡： 将 hiPSC-CMs（iCell 或 vCor.4U 系）铺板于适当的维持培养基中。对于活力检测，在加入死亡诱导剂（H2O2 或甲萘醌）前1小时，用 DMX-5804（DMSO 中的系列稀释液，终浓度0.1% DMSO）处理细胞。24小时后，使用 CellTiter-Glo 发光法评估细胞活力，该方法通过量化 ATP 来反映活细胞数量。或者，通过使用 AlphaLISA 免疫分析法测量释放到培养基中的人心脏肌钙蛋白 I 来量化细胞死亡。在 iCell 心肌细胞中，也使用细胞不通透性染料 DRAQ7 在高内涵成像分析中评估膜完整性损失，并特异性分析通过 Myh6-RFP 报告基因识别的成功转导的 (GFP+) 心肌细胞。 [1]
钙循环： 用 DMX-5804 和甲萘醌处理 vCor.4U hiPSC-CMs。2-3小时后，用荧光钙指示剂染料加载细胞。使用荧光成像微孔板检测仪监测细胞内钙振荡。计算搏动频率、峰值高度、峰值宽度和总峰值面积等参数，并与对照组进行比较。 [1] 线粒体功能： 将 vCor.4U hiPSC-CMs 接种于专用板中。用 DMX-5804 和甲萘醌处理后，将培养基更换为不含碳酸氢盐的检测培养基。使用 Seahorse 细胞外通量分析仪实时测量耗氧率（OCR，线粒体呼吸指标）和细胞外酸化率（ECAR，糖酵解指标）。依次注入寡霉素（ATP合酶抑制剂）、FCCP（线粒体解偶联剂）以及抗霉素 A 和鱼藤酮的混合物（复合物 III 和 I 抑制剂）以评估线粒体功能的不同参数。 [1] 3D 人工心脏组织： 将 vCor.4U 心肌细胞与纤维蛋白原和凝血酶混合，注入包含柔性硅胶柱的模具中形成3D组织。成熟12天后，在存在或不存在 DMX-5804 的情况下用甲萘醌处理 hEHTs。评估细胞死亡。通过光学跟踪硅胶柱的偏转，并根据柱的尺寸和材料特性计算力，每天测量自发性收缩力。 [1] 细胞内的靶点结合： 为确认对内源性 MAP4K4 的抑制，用先导化合物 F1386-0303 (10 µM) 处理 HEK293T 细胞。1小时后，通过免疫复合物激酶实验测量内源性 MAP4K4 活性，显示70%的抑制。 [1] |
| 动物实验 |
小鼠心肌梗死模型：采用9-10周龄的雌性CD-1小鼠。在全身麻醉和机械通气下，进行左侧开胸手术。结扎左前降支冠状动脉（LAD）45分钟以诱导缺血，随后松开结扎线以恢复心肌灌注。DMX-5804配制于1.5% Captisol（磺丁基醚-β-环糊精）溶液中。小鼠接受两次灌胃给予DMX-5804（50 mg/kg），间隔10小时。在“损伤前”方案中，首次给药于LAD闭塞前20分钟。在“损伤后”方案中，首次给药于恢复心肌灌注后1小时。恢复心肌灌注24小时后，对梗死面积进行定量分析。小鼠再次麻醉后，左前降支（LAD）再次闭塞，并灌注伊文思蓝染料以标示非缺血区域。心脏被切除、切片，并用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色，以显示危险区域（未被蓝色染色）内的存活（红色）和梗死（白色）组织。梗死面积以占危险区域的百分比表示。在单独的心脏切片中，通过TUNEL染色评估细胞凋亡，该染色与抗肌节肌球蛋白抗体共标记以识别心肌细胞。[1]
药代动力学研究：为了进行药代动力学分析，DMX-5804的制剂与上述类似。雌性CD-1小鼠接受单次口服剂量（50 mg/kg）。给药后在多个时间点（例如，10 分钟、30 分钟、1 小时、2.5 小时、5 小时、10 小时、20 小时）采集血样。测定血浆中 DMX-5804 的浓度。[1] 体内靶点结合：小鼠经口给予 DMX-5804。在不同时间点或不同剂量后取出心脏。制备心脏裂解液，并与脱硫生物素-ATP 探针孵育，该探针可共价标记活性激酶的 ATP 结合位点。随后对 MAP4K4 进行免疫沉淀，并通过蛋白质印迹法评估探针标记水平，以测量抑制剂对靶点的占有率。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠单次静脉注射（1 mg/kg）DMX-5804后，其清除率（Cl）为2.50 L hr⁻¹ kg⁻¹，分布容积（Vd）为1.22 L kg⁻¹，半衰期（t₁/₂）为0.6小时，血浆峰浓度（Cmax）为1590 nM。[1]小鼠单次口服（50 mg/kg）DMX-5804后，其血浆浓度-时间曲线下面积（AUC₀→∞）为63733 nMhr，Cmax为13847 nM，达峰时间（Tmax）为1小时，半衰期为1.8小时。 [1] 口服 50 mg/kg 剂量的 DMX-5804 后，1 小时和 10 小时的血浆浓度分别为 334 nM 和 8 nM。10 小时后的第二次给药使血浆浓度维持在体外心肌细胞保护 EC50 以上，且持续近一天。[1] 与前体化合物 F1386-0303 相比，DMX-5804 的口服生物利用度和血浆暴露量（AUC 和 Cmax）显著提高（分别提高了 29.5 倍和 46.9 倍）。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在测试浓度下，DMX-5804 对 hiPSC-CM 的活力、收缩力、钙离子处理或线粒体功能均未显示出不良影响。[1] 电生理安全性筛选显示，DMX-5804 对关键心脏离子通道（hERG、hNaV1.5、hCaV1.2）无显著抑制作用。[1] 使用鼠伤寒沙门氏菌 TA98 和 TA100 菌株，在有/无代谢活化（S9）的情况下，通过 Ames 基因毒性回复突变试验测试了 DMX-5804。在高达 250 µg/mL 的测试浓度下，未观察到致突变性。[1] 使用包含 44 种脱靶安全性相关蛋白的筛选板（SafetyScreen44 板）对 DMX-5804 进行了筛选。唯一报道的活性是针对金属硫蛋白3的活性。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DMX-5804 (5-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-7-苯基-3,7-二氢吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮) 是一种高选择性的 MAP4K4 小分子抑制剂，由先导化合物 F1386-0303 经药效团建模、虚拟筛选和药物化学优化开发而成。[1]
MAP4K4 在衰竭的人类心脏中被激活，并促进心肌细胞在氧化应激反应中死亡，而氧化应激是心脏缺血再灌注损伤的标志性特征。[1] 本研究利用人诱导多能干细胞来源的心肌细胞 (hiPSC-CMs) 作为关键的、与人类相关的靶点验证和药物发现平台，突显了其在心脏药物开发方面优于传统动物模型的预测价值。 [1] 在hiPSC-CMs中，MAP4K4抑制剂所提供的保护作用与临床有效的β受体阻滞剂美托洛尔相当，且优于临床试验失败的p38 MAPK通路抑制剂，这表明hiPSC-CM模型具有良好的预测准确性。[1] 含有DMX-5804的化合物系列为验证提供了有价值的工具化合物，但其溶解度和药代动力学性质不足以直接开发为治疗急性缺血性损伤的静脉注射候选药物，尽管它支持该靶点的进一步药物开发。[1] |
| 分子式 |
C21H19N3O3
|
|---|---|
| 分子量 |
361.393864870071
|
| 精确质量 |
361.14
|
| 元素分析 |
C, 69.79; H, 5.30; N, 11.63; O, 13.28
|
| CAS号 |
2306178-56-1
|
| 相关CAS号 |
2306178-56-1
|
| PubChem CID |
137334091
|
| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
|
| LogP |
2.9
|
| tPSA |
64.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
27
|
| 分子复杂度/Complexity |
527
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
FUSHFOGORKZNNQ-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H19N3O3/c1-26-11-12-27-17-9-7-15(8-10-17)18-13-24(16-5-3-2-4-6-16)20-19(18)21(25)23-14-22-20/h2-10,13-14H,11-12H2,1H3,(H,22,23,25)
|
| 化学名 |
5-[4-(2-methoxyethoxy)phenyl]-7-phenyl-3H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-one
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| 别名 |
DMX-5804; DMX 5804; DMX5804
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 72~125 mg/mL (199.2~345.9 mM)
Ethanol: ~1.5 mg/mL (~4.2 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7671 mL | 13.8355 mL | 27.6709 mL | |
| 5 mM | 0.5534 mL | 2.7671 mL | 5.5342 mL | |
| 10 mM | 0.2767 mL | 1.3835 mL | 2.7671 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
MAP4K4 Inhibition Promotes Survival of Human Stem Cell-Derived Cardiomyocytes and Reduces Infarct Size In Vivo.Cell Stem Cell.2019 Apr 4;24(4):579-591.e12. |
Selective Small-Molecule Inhibitors of MAP4K4 Created by Field-Point Modeling and ScreeningIn Silico.Cell Stem Cell.2019 Apr 4;24(4):579-591.e12. |
MAP4K4 Inhibition Reduces Infarct Size in Mice.Cell Stem Cell.2019 Apr 4;24(4):579-591.e12. |
PROTAC HPK1 Degrader-5
HPK1 ligand-Linker Conjugate 1
HPK1 ligand 4
HPK1-IN-62
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