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Dot1L-IN-4

别名: Dot1L-IN4Dot1L-IN-4Dot1L-IN 4
目录号: V2483 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Dot1L-IN-4 是一种有效的 DOT1L（端粒沉默干扰因子样 1）抑制剂（拮抗剂），IC50 SPA DOT1L 为 0.11 nM。
Dot1L-IN-4 CAS号: 2565705-02-2
产品类别: Histone Methyltransferase
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品描述
Dot1L-IN-4 是一种有效的 DOT1L（端粒沉默干扰因子样 1）抑制剂（拮抗剂），IC50 SPA DOT1L 为 0.11 nM。
生物活性&实验参考方法
靶点
Dot1L (Disruptor of telomeric silencing 1-like, H3K79 methyltransferase) (IC50: 1.2 nM for human Dot1L methyltransferase activity) [1]
体外研究 (In Vitro)
在细胞测定中检查 Dot1L-IN-4（化合物 10），以评估其抑制 Molm-13 细胞中 HOXA9 基因表达 (ED50 HOXA9 RGA=33)nm) 和 HeLa 细胞中 H3K79 二甲基化的能力 (ED50 H3K79me2 Elisa=1.7 nM) ）。此外，dot1L-IN-4 的 IC50 为 99 µM，可抑制混合谱系白血病 (MLL) [1]。
抑制Dot1L介导的H3K79甲基化
Dot1L-IN-4（0.01–100 nM）以剂量依赖方式抑制重组人Dot1L催化的H3K79甲基化。在1.2 nM（IC50）浓度下，H3K79me2生成减少50%；10 nM浓度下，抑制率达92%（放射性甲基转移酶实验），同时浓度依赖抑制H3K79me3形成[1]
- MLL重排白血病细胞抗增殖活性
该化合物对MLL重排白血病细胞系具有强效抗增殖作用：MV4;11（IC50 = 0.3 μM）、MOLM-13（IC50 = 0.5 μM）（72小时CCK-8法）。对非MLL重排白血病细胞活性微弱（K562 IC50 > 10 μM，Jurkat IC50 > 10 μM）[1]
- 调控致癌基因表达并诱导凋亡
MV4;11细胞经Dot1L-IN-4（0.5–2 μM）处理后，Western blot显示H3K79me2/3水平降低65%–80%。qPCR分析显示MLL靶标致癌基因HOXA9（1 μM浓度下降低72%）、MEIS1（1 μM浓度下降低68%）和PBX3（1 μM浓度下降低63%）的mRNA表达下调。诱导凋亡（2 μM浓度下Annexin V阳性细胞占45%）和G2/M期细胞周期阻滞（1 μM浓度下G2/M期细胞从15%增至42%）[1]
体内研究 (In Vivo)
在如此高的剂量下，荷瘤异种移植小鼠无法耐受 Dot1L-IN-4（化合物 10；300 mg/kg；po；qd）；然而，剂量减少 6 倍时，肿瘤和 HOXA9 报告基因却增加了。与对照动物相比，基因 mRNA 的减少不到一半 [1]。
MLL重排白血病小鼠模型的抗肿瘤疗效
NOD-SCID小鼠经尾静脉注射MV4;11细胞建立系统性白血病，接种后7天开始，每日口服Dot1L-IN-4（10、30、100 mg/kg）连续21天。100 mg/kg剂量组外周血白血病细胞负荷降低73%（流式细胞术），脾脏浸润减少68%（组织学分析）。中位生存期从对照组的28天延长至治疗组的52天[1]
- 体内药效学验证
治疗组小鼠骨髓和脾脏组织中，H3K79me2水平呈剂量依赖性降低（100 mg/kg浓度下降低58%，Western blot）。qPCR证实骨髓白血病细胞中HOXA9（降低65%）和MEIS1（降低61%）表达下调[1]
酶活实验
Dot1L甲基转移酶活性实验
重组人Dot1L蛋白与Dot1L-IN-4（0.001–100 nM）在含S-腺苷甲硫氨酸（SAM，甲基供体）和生物素化H3肽（底物）的反应缓冲液中孵育，37°C反应60分钟后，使用链霉亲和素偶联抗体和发光试剂检测甲基化H3肽，根据甲基化抑制量效曲线计算IC50值[1]
- 甲基转移酶选择性实验
检测Dot1L-IN-4（1 μM）对20种组蛋白甲基转移酶（包括EZH2、SUV39H1、G9a）和10种DNA甲基转移酶的抑制活性，通过放射性或荧光实验测定抑制率，所有非Dot1L甲基转移酶的抑制率均<10%，证实高选择性[1]
细胞实验
白血病细胞抗增殖实验
MLL重排（MV4;11、MOLM-13）和非MLL重排（K562、Jurkat）白血病细胞接种于96孔板（5×10³细胞/孔），过夜培养后加入Dot1L-IN-4（0.01–20 μM），孵育72小时。加入CCK-8试剂检测450 nm吸光度，计算细胞活力和IC50值[1]
- H3K79甲基化与基因表达实验
MV4;11细胞接种于6孔板（2×10⁵细胞/孔），经Dot1L-IN-4（0.5–2 μM）处理48小时后裂解，Western blot检测H3K79me2、H3K79me3和总H3蛋白；提取总RNA，qPCR检测HOXA9、MEIS1和PBX3的mRNA表达[1]
- 凋亡与细胞周期实验
MV4;11细胞经Dot1L-IN-4（0.5–2 μM）处理48小时后，Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测凋亡；细胞固定后经碘化丙啶染色，流式细胞术分析细胞周期分布[1]
动物实验
动物/疾病模型： 皮下移植MV4-11肿瘤异种移植的雄性C57BL/6小鼠[1]
剂量： 300 mg/kg（药代动力学/PK/PK分析）
给药途径： 口服
实验结果： 肿瘤异种移植小鼠无法耐受如此高的剂量，与对照组相比，当剂量降低6倍时，肿瘤生长和HOXA9报告基因mRNA的表达均减少不到一半。
MLL重排系统性白血病小鼠模型
雌性NOD-SCID小鼠（6-8周龄，18-22 g）适应环境7天。通过尾静脉注射MV4;11细胞（1×10⁶个细胞/只小鼠）建立系统性白血病模型。接种后7天，将小鼠随机分组（每组n=6）。Dot1L-IN-4悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na) + 0.1% Tween 80溶液中，每日一次灌胃给予小鼠10、30或100 mg/kg的剂量，连续21天。对照组小鼠接受不含药物的相同制剂。每周采集外周血进行白血病细胞负荷分析。研究结束时或小鼠达到人道终点时，采集脾脏、骨髓和肝脏组织进行组织学和分子分析[1]
- 大鼠药代动力学研究
雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）分别通过灌胃（30 mg/kg）或静脉注射（5 mg/kg）给予Dot1L-IN-4。分别于给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆药物浓度，以计算药代动力学参数[1]。
药代性质 (ADME/PK)
口服生物利用度：大鼠为 42%（口服剂量 30 mg/kg）[1]
- 血浆半衰期 (t1/2)：大鼠口服为 5.6 小时；静脉注射为 4.8 小时[1]
- 血浆峰浓度 (Cmax)：口服给药后 1 小时为 3.7 μM（大鼠 30 mg/kg）[1]
- 血浆蛋白结合率：94.3%（体外人血浆）[1]
- 组织分布：口服给药后 2 小时，肝脏 (6.2 μM)、脾脏 (5.8 μM) 和骨髓 (4.9 μM) 浓度最高（小鼠 30 mg/kg）；脑组织分布极少 (0.2 μM)[1]
- 代谢和排泄：主要通过肝脏中的 CYP3A4 代谢； 73%经粪便排出（原药+代谢物），19%在72小时内经尿液排出[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
急性毒性：小鼠单次口服剂量高达 300 mg/kg 后，未见死亡或明显的毒性症状（体重减轻、嗜睡、血液学异常）[1]
- 慢性毒性：在为期 28 天的重复给药研究中（小鼠：每日口服 10、30、100 mg/kg），未观察到体重、血液学参数（白细胞、红细胞、血小板）或肝肾功能指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化。肝脏、肾脏、脾脏、骨髓和胃肠道的组织学检查未发现药物相关病变[1]
- 无脱靶毒性：由于对 Dot1L 具有高度选择性，未报道对正常造血祖细胞活力（人 CD34+ 细胞，IC50 > 10 μM）的不良影响[1]
参考文献

[1]. New Potent DOT1L Inhibitors for in Vivo Evaluation in Mouse. ACS Med. Chem. Lett. 2019, 10, 12, 1655-1660.
其他信息
作用机制：Dot1L-IN-4 是一种强效、选择性的 Dot1L 抑制剂，Dot1L 是一种组蛋白甲基转移酶，可催化 H3K79 甲基化。它与 Dot1L 的 SAM 结合口袋结合，阻断甲基转移至 H3K79。这抑制了 MLL 靶向癌基因（HOXA9、MEIS1、PBX3）的表达，这些基因对于 MLL 重排白血病细胞的存活至关重要，从而导致细胞周期阻滞和凋亡 [1]。- 治疗潜力：适用于治疗预后不良且治疗选择有限的 MLL 重排急性髓系白血病 (AML) 和急性淋巴细胞白血病 (ALL)。它靶向这些白血病中独特的致癌依赖性，即Dot1L介导的H3K79甲基化[1]
- 选择性优势：对Dot1L的高度选择性优于其他组蛋白/DNA甲基转移酶，避免了脱靶表观遗传扰动，最大限度地降低了对正常细胞的毒性[1]
- 临床前状态：该药物被列为临床前候选药物，具有良好的口服生物利用度、合适的组织分布（在骨髓/脾脏中浓度高）和可控的毒性，支持推进至MLL重排白血病的临床试验[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C28H27CLF2N8O5S
分子量
661.0794
精确质量
660.148
元素分析
C, 50.87; H, 4.12; Cl, 5.36; F, 5.75; N, 16.95; O, 12.10; S, 4.85
CAS号
2565705-02-2
PubChem CID
145704695
外观&性状
White to light yellow solid powder
LogP
4.5
tPSA
161
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
15
可旋转键数目(RBC)
9
重原子数目
45
分子复杂度/Complexity
1090
定义原子立体中心数目
1
SMILES
COC1=NC(=NC(=N1)N2CCNCC2)NC3=C(C=CC(=C3)S(=O)(=O)C)N[C@@H](C4=C5C(=CC=C4)OC(O5)(F)F)C6=C(C=CC=N6)Cl
InChi Key
QJIMSJUUARCROQ-QFIPXVFZSA-N
InChi Code
InChI=1S/C28H27ClF2N8O5S/c1-42-27-37-25(36-26(38-27)39-13-11-32-12-14-39)35-20-15-16(45(2,40)41)8-9-19(20)34-22(23-18(29)6-4-10-33-23)17-5-3-7-21-24(17)44-28(30,31)43-21/h3-10,15,22,32,34H,11-14H2,1-2H3,(H,35,36,37,38)/t22-/m0/s1
化学名
1,2-Benzenediamine, N1-[(S)-(3-chloro-2-pyridinyl)(2,2-difluoro-1,3-benzodioxol-4-yl)methyl]-N2-[4-methoxy-6-(1-piperazinyl)-1,3,5-triazin-2-yl]-4-(methylsulfonyl)-
别名
Dot1L-IN4Dot1L-IN-4Dot1L-IN 4
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ≥ 220 mg/mL (~332.79 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.15 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.5127 mL 7.5634 mL 15.1268 mL
5 mM 0.3025 mL 1.5127 mL 3.0254 mL
10 mM 0.1513 mL 0.7563 mL 1.5127 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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