DPCPX

Adenosine receptor ( Ki = 0.46 nM; 3H-CHA binding to A1 receptors in rat whole brain membranes); A2 receptors (Ki = 340 nM; 3H-NECA binding to A2 receptors in rat striatal membranes)

(R)- n -(1-甲基-2-苯乙基)腺苷(R- pia)是一种腺苷受体激动剂，具有负变时活性和冠状动脉舒张活性。R-PIA的这些作用被认为是由腺苷受体A1和A2亚型介导的。DPCPX (PD 116948)是黄嘌呤衍生物，是一种高选择性的A1腺苷受体配体。在本研究中，PD 116,948选择性拮抗离体大鼠心脏R-PIA负性变时活性。这些结果与腺苷受体激动剂通过A1受体介导负变时活性和通过A2受体介导血管舒张活性的假设一致，并进一步支持了这一假设[1]。

DPCPX (PD-116948)（0.1、0.3 和 1.0 mg/kg iv）会导致尿量以及尿钠、钾和氯排泄量显着增加（P<0.05），且与剂量相关。

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为了检查拮抗剂的效力，腺苷以5 10−5 M的标准浓度给药，在没有任何拮抗剂的情况下重复给药，可以保持良好的反应。与不存在PPADS时给予腺苷5 10−5 M(1 10−4 M)相比，在PPADS存在时给予腺苷5 10−5 M引起的松弛反应略有增加(−15±0.8% vs−19±1%;P < 0.05)。DPCPX(1 10−5 M)的存在显著降低了弛豫反应(至−5±1%;p < 0.001)并延长潜伏期(104±4 s)，此外，两种拮抗剂存在时腺苷给药与仅存在DPCPX时的反应相似。然而，PPADS(1 10−4 M)和DPCPX(1 10−5 M)均未影响炎症膀胱条状制剂的松弛反应[4]。

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然而，P1A1拮抗剂DPCPX消除了生理盐水和cypp处理大鼠之间甲基苯丙胺诱发的收缩的差异。在dcpx预处理后，对照组中atp引起的收缩减少，但膀胱炎患者没有。DPCPX的功能观察得到了其抑制cypp诱导的粘膜下增厚、毒蕈碱M5受体表达以及可能抑制逼尿肌肥大细胞浸润和尿路上皮MIF发生的扩散的支持。[5]

8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤(DPCPX; PD 116,948)是一种非常有效的A1选择性腺苷拮抗剂，3H-CHA结合大鼠全脑膜A1受体的Ki值为0.46 nM, 3H-NECA结合大鼠纹状体膜A2受体的Ki值为340 nM。其740倍a1选择性是腺苷拮抗剂中报道的最高的。通过还原双烯丙基类似物制备3H-PD 116,948 (117 Ci/mmol)。3H-PD 116,948在大鼠全脑膜单位点结合，Bmax为46 pmol/g湿重，Kd为0.42 nM。非特异性结合极低，在标准条件下约占总结合的3%，当使用较高的组织浓度时不到1%。抑制3H-PD 116,948结合的化合物的亲和力与A1腺苷受体高度一致。拮抗剂在3H-PD 116,948结合和3H-CHA结合中具有相同的效力，而激动剂在3H-CHA结合中始终具有约12倍的效力。拮抗剂的希尔系数为1.0，激动剂的希尔系数约为0.65。3H-PD 116,948应该是一种有用的腺苷A1受体拮抗剂配体[2]。

在CYP/生理盐水预处理60小时后，大鼠腹腔注射美托咪定（Domitor® vet.，0.2 ml）进行麻醉，然后用过量二氧化碳处死。取出膀胱，切开并展开。从膀胱体上切取2至3条（6 × 2 mm）组织条。为防止组织干燥损伤，将膀胱始终保存在克氏碳酸氢盐溶液中。在收缩实验中，将组织条固定在两根钢棒之间，其中一根钢棒可调节。膀胱浴槽中充满克氏碳酸氢盐溶液（去离子水，118 mM NaCl，4.6 mM KCl，1.18 mM KH₂PO₄，1.16 mM MgSO₄，25 mM NaHCO₃，5.5 mM葡萄糖和1.27 mM CaCl₂）。在整个实验过程中，克氏液保持在 37 °C，并通入 5% CO₂ 和 O₂ 的混合气体，以维持稳定的中性 pH 值并为组织提供氧气。将组织条拉伸至 15 mN 的张力，并静置 45 分钟使其达到平衡。这导致组织逐渐松弛，最终达到 7–9 mN 的稳定张力。45 分钟后，给予含钾克氏液（含 124 mM K⁺；通过等摩尔量的 K⁺ 与 Na⁺ 交换获得），并将由此产生的收缩作为活力参考反应。然后将每条组织的张力稳定在 7–9 mN。这比通常使用的基础张力（4–5 mN；Tobin 和 Sjogren，1995）略高。结果表明，该张力增强了松弛反应。静息30分钟后，给予中等钾浓度的克氏液（50 mM K+；通过等摩尔量的K+与Na+交换获得）以预收缩组织。随后观察20分钟，以确保预收缩达到稳定状态，且高于基础张力水平2.5 mN以上。预收缩20分钟后，加入腺苷，其浓度为5×10⁻⁵ M，该浓度已被证实能诱导大鼠膀胱条带产生稳定的舒张反应。此浓度可溶于水，而更高浓度则需溶于二甲基亚砜（DMSO）。当组织达到最大舒张状态时（通常在约150秒后），彻底冲洗器官浴槽，并将膀胱条带重新拉伸至7-9 mN，并使其平衡30分钟。随后加入拮抗剂，并用中等浓度的钾克氏液预收缩标本20分钟，之后评估腺苷（5×10⁻⁵ M）的舒张反应。对所有使用的拮抗剂（即PPADS、DPCPX、SCH 58261和MRS 1523）重复此步骤。激动剂和所有拮抗剂的加入体积为 125 μl。[4]

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\n\n用于大鼠预处理的物质为：A1 腺苷受体拮抗剂 8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤 (DPCPX) (Bruns 等，1987；Haleen 等，1987)，选择性 A2B 腺苷受体拮抗剂 4-(2,3,6,7-四氢-2,6-二氧代-1-丙基-1H-嘌呤-8-基)-苯磺酸 (PSB1115) (Muller 等，1998) 和非选择性 P2 嘌呤能拮抗剂苏拉明 (Dunn 和 Blakeley，1988；Soto 等，1997)。所用浓度如下，基于预实验和/或既往研究：DPCPX，1 mg/kg，腹腔注射（Kadowaki等，2003；Wang等，2005）；PSB1115，1 mg/kg，腹腔注射（Savegnago等，2008）；苏拉明，10 mg/kg。除DPCPX外，所有拮抗剂均溶于生理盐水。DPCPX由于溶解度有限，溶于纯二甲基亚砜（DMSO；1 ml/kg）。既往研究表明，该剂量不足以诱导任何免疫抑制作用（Watson等，1985）。此外，少量大鼠（每组n = 4）预先注射纯DMSO（1 ml/kg，作为对照）。为了诱导膀胱炎，在处死前60小时，腹腔注射环磷酰胺（CYP；100 mg/kg）联合皮下注射镇痛药丁丙诺啡（Temgesic®；10 μg/kg），以确保实验时炎症达到高峰（Giglio等，2005）。对照组则注射生理盐水（0.9%；1 ml/kg，腹腔注射）。第六天，用美托咪定（Domitor®Vet.，1 mg/kg，腹腔注射）麻醉大鼠，随后用二氧化碳窒息法处死。“预处理和治疗”方案旨在使每个“活性”CYP治疗组都与一个生理盐水治疗组相匹配。因此，对照组和实验组（生理盐水-生理盐水组、生理盐水-环磷酰胺组、DPCPX-生理盐水组、DPCPX-环磷酰胺组、PSB1115-生理盐水组、PSB1115-环磷酰胺组以及最终的苏拉明-生理盐水组和苏拉明-环磷酰胺组）均采用平行处理。文中，“预处理”指连续五天给予生理盐水或药物，而“处理”指在第3天单次给予生理盐水或环磷酰胺（图1）。[5]

[1]. PD 116,948, a Highly Selective A1 Adenosine Receptor Antagonist. Life Sci. 1987 Feb 9;40(6):555-61.

[2]. Binding of the A1-selective Adenosine Antagonist 8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine to Rat Brain Membranes. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1987 Jan;335(1):59-63.

[3]. Br J Pharmacol. 1989 Jul; 97(Suppl): 496P–535P.

[4]. Functional and morphological examinations of P1A1 purinoceptors in the normal and inflamed urinary bladder of the rat. Auton Neurosci . 2011 Jan 20;159(1-2):26-31.
[5]. Adenosine receptor antagonism suppresses functional and histological inflammatory changes in the rat urinary bladder. Auton Neurosci . 2012 Nov 2;171(1-2):49-57.

DPCPX 是一种氧嘌呤，其结构为 7H-黄嘌呤，1 位和 3 位被丙基取代，8 位被环己基取代。它是一种腺苷 A1 受体拮抗剂和 EC 3.1.4.（磷酸二酯水解酶）抑制剂。其功能与 7H-黄嘌呤类似。
CPX 已用于囊性纤维化治疗的临床试验。

C16H24N4O2

304.38736

304.19

C, 63.13; H, 7.95; N, 18.41; O, 10.51

102146-07-6

1329

White to off-white solid powder

1.195g/cm3

535.1ºC at 760mmHg

178°C

277.4ºC

1.59E-11mmHg at 25°C

1.564

2.363

72.68

1

3

5

22

436

0

CCCN1C2=C(C(=O)N(CCC)C1=O)N=C(C3CCCC3)N2

FFBDFADSZUINTG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H24N4O2/c1-3-9-19-14-12(15(21)20(10-4-2)16(19)22)17-13(18-14)11-7-5-6-8-11/h11H,3-10H2,1-2H3,(H,17,18)

8-cyclopentyl-1,3-dipropyl-7H-purine-2,6-dione

DPC-PX; DP-CPX; 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine; DPCPX; 102146-07-6; 8-cyclopentyl-1,3-dipropyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione; 1,3-dipropyl-8-cyclopentylxanthine; 1,3-Dpcpx; PD-116948; PD-116,948;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 10~31 mg/mL (32.9~101.8 mM)
Ethanol: ~5 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.29 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。