| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
E3 ubiquitin ligase (VHL, Von Hippel-Lindau) (binding Ki = 0.08 μM) [1]
AURORA-A kinase (degradation DC50 = 0.21 μM; kinase activity IC50 = 0.85 μM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
1. E3连接酶结合及AURORA-A降解: E3 Ligase Ligand 3是高亲和力VHL结合配体，作为靶向AURORA-A激酶的PROTAC降解剂核心组件。SPR实验显示其与人VHL的结合Ki = 0.08 μM。在AURORA-A过表达的癌细胞系（HCT116、HeLa、MDA-MB-231）中，含E3 Ligase Ligand 3的PROTAC介导AURORA-A的剂量依赖性泛素化和蛋白酶体降解。AURORA-A降解的DC50值分别为：HCT116（0.21 μM）、HeLa（0.35 μM）、MDA-MB-231（0.42 μM），5 μM浓度下达到最大降解效率（>90%）。Western blot证实蛋白酶体抑制剂（如MG132）可阻断该降解过程，验证其依赖泛素-蛋白酶体途径[1]
2. 抑制AURORA-A激酶活性: 该PROTAC在体外抑制AURORA-A激酶活性（以组蛋白H3为底物），IC50 = 0.85 μM。对AURORA-B（IC50 > 10 μM）及其他激酶（如PLK1、CDK1、EGFR；IC50 > 10 μM）具有高选择性，脱靶激酶抑制作用极小[1] 3. 癌细胞抗增殖活性: 该PROTAC对AURORA-A过表达癌细胞具有强效抗增殖作用，EC50值分别为：HCT116（0.32 μM）、HeLa（0.48 μM）、MDA-MB-231（0.55 μM）、A549（0.61 μM）。对正常人成纤维细胞（NHF）无显著抗增殖活性（EC50 > 20 μM），显示高治疗指数[1] 4. 诱导细胞周期阻滞及凋亡: 流式细胞术（PI染色）分析显示，HCT116细胞经PROTAC（1 μM）处理48小时后，G2/M期细胞比例从溶媒对照组的28 ± 3%升至62 ± 4%，出现明显G2/M期阻滞。72小时后，膜联蛋白V/PI染色显示凋亡细胞比例从4 ± 2%升至42 ± 5%，Western blot证实切割型caspase-3、切割型PARP上调，周期蛋白B1（cyclin B1）下调，表明诱导caspase依赖性凋亡[1] 5. 抑制癌细胞迁移和侵袭: Transwell迁移和侵袭实验中，PROTAC（0.5 μM）处理使HCT116细胞迁移率降低65 ± 6%，侵袭率降低70 ± 5%，Western blot显示迁移相关蛋白（MMP-2、MMP-9）表达减少[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. HCT116结直肠癌异种移植模型疗效: 雌性BALB/c裸鼠右侧胁腹皮下接种5×10⁶ HCT116细胞，肿瘤体积达100–150 mm³时，随机分为溶媒对照组和PROTAC治疗组（10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg，腹腔注射，隔日一次，连续21天）。40 mg/kg剂量第21天肿瘤生长抑制（TGI）率为78 ± 7%，实验终点肿瘤重量为0.28 ± 0.06 g（40 mg/kg）vs. 溶媒组1.35 ± 0.18 g。肿瘤组织Western blot证实AURORA-A蛋白水平降低>85%[1]
2. 转移癌模型生存期延长: NOD-SCID小鼠尾静脉注射2×10⁶ MDA-MB-231细胞建立肺转移模型，接种后7天开始给予PROTAC（20 mg/kg，腹腔注射，隔日一次）治疗。中位生存期从溶媒组的35 ± 3天延长至治疗组的62 ± 4天，延长77%，治疗组肺转移结节数减少68 ± 6%[1] 3. 体内药效学效应: HCT116异种移植模型中，40 mg/kg PROTAC剂量使肿瘤组织中AURORA-A磷酸化水平（p-AURORA-A, Thr288）降低90 ± 5%，cyclin B1表达降低75 ± 4%。组织病理学分析显示凋亡细胞增多（TUNEL染色），有丝分裂指数降低[1] |
| 酶活实验 |
1. VHL结合实验（表面等离子体共振，SPR）:
- 通过胺偶联法将重组人VHL蛋白（VHL-Elongin B-Elongin C复合物）固定于CM5传感芯片，运行缓冲液含HEPES、NaCl和Tween-20（pH 7.4）。 - 系列浓度的E3 Ligase Ligand 3（0.001–10 μM）以25 μL/min流速在25°C下流经传感芯片。 - 实时记录结合响应值（共振单位，RU），注射后监测60秒解离过程，传感图拟合至1:1朗缪尔结合模型计算解离常数（Ki）[1] 2. AURORA-A激酶活性实验: - 重组人AURORA-A激酶稀释于含Tris-HCl、MgCl₂、ATP和DTT的激酶实验缓冲液中。 - 系列浓度的PROTAC（0.01–10 μM）与AURORA-A（50 nM）在37°C下预孵育30分钟。 - 加入生物素化组蛋白H3（底物）启动激酶反应，37°C孵育60分钟后，EDTA缓冲液终止反应。 - 链霉亲和素偶联荧光抗体检测磷酸化组蛋白H3，酶标仪测量荧光强度（激发485 nm，发射520 nm），计算抑制50%激酶活性的IC50值[1] |
| 细胞实验 |
1. AURORA-A降解Western blot实验:
- HCT116、HeLa或MDA-MB-231细胞以2×10⁶个细胞/孔接种到6孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养。 - 加入系列浓度的含E3 Ligase Ligand 3 PROTAC（0.01–10 μM），37°C、5% CO₂孵育24小时；通路验证实验中，细胞预先用MG132（10 μM）处理2小时后再加入PROTAC。 - 收集细胞，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，BCA法定量蛋白浓度。 - 等量蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗AURORA-A、抗p-AURORA-A（Thr288）、抗VHL和抗GAPDH（内参）抗体孵育，密度测定法定量条带强度，从量效曲线推导DC50值[1] 2. 细胞增殖实验: - 癌细胞（HCT116、HeLa、MDA-MB-231、A549）和正常NHF细胞以3×10³个细胞/孔接种到96孔板。 - 加入PROTAC（0.005–20 μM），37°C、5% CO₂孵育72小时。 - 比色法检测细胞活力，EC50定义为相对于溶媒对照组抑制50%增殖的浓度[1] 3. 细胞周期和凋亡分析: - HCT116细胞用PROTAC（0.1–1 μM）处理48小时（细胞周期）或72小时（凋亡）。 - 细胞周期分析：乙醇固定细胞，PI染色，流式细胞术检测G0/G1、S、G2/M期细胞比例。 - 凋亡分析：膜联蛋白V-FITC和PI双染色，流式细胞术定量凋亡细胞（膜联蛋白V阳性/PI阴性或双阳性）[1] 4. 迁移和侵袭实验: - HCT116细胞经PROTAC（0.5 μM）处理24小时后，接种到Transwell小室上室（8 μm孔径，迁移实验）或基质胶包被小室（侵袭实验）。 - 下室加入含10%胎牛血清的培养基作为趋化因子，24小时（迁移）或48小时（侵袭）后，去除未迁移/侵袭细胞，固定染色后显微镜下计数，计算相对于溶媒对照组的抑制率[1] |
| 动物实验 |
1. HCT116结肠癌异种移植模型：
- 将5×10⁶个HCT116细胞皮下注射到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，18-22 g）右侧腹部。 - 当肿瘤体积达到100-150 mm³（移植后7-10天）时，将小鼠随机分为4组（每组n=8）：载体对照组、PROTAC 10 mg/kg组、PROTAC 20 mg/kg组和PROTAC 40 mg/kg组。 - 将含有E3连接酶配体3的PROTAC溶解于DMSO和生理盐水的混合溶液中（最终DMSO浓度≤5%），每隔一天腹腔注射一次，连续21天。对照组小鼠接受相同的溶剂混合物处理。 - 每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）。第21天，处死小鼠，切除肿瘤并称重，收集肿瘤组织进行Western blot（AURORA-A、p-AURORA-A、cyclin B1）和组织病理学（H&E、TUNEL）分析[1]。 2. MDA-MB-231肺转移模型： - 将2×10⁶个MDA-MB-231细胞经尾静脉注射到雌性NOD-SCID小鼠（6-8周龄，18-22 g）体内。 - 接种7天后，将小鼠随机分为载体对照组和PROTAC治疗组（每组n=10）。 PROTAC（20 mg/kg）每隔一天腹腔注射一次，持续35天。 - 每日监测小鼠的存活情况和临床症状。在研究结束时或小鼠濒死时，取出肺脏，用4%多聚甲醛固定，并在解剖显微镜下计数转移结节。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线[1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 吸收：在 CD-1 小鼠中，腹腔注射含有 E3 连接酶配体 3 的 PROTAC（40 mg/kg）后，血浆峰浓度 (Cmax) 为 3.2 μM，达峰时间 (Tmax) 为 1.0 小时。口服给药（40 mg/kg）显示 Cmax = 0.8 μM，口服生物利用度为 22 ± 3% [1]
2. 分布：小鼠体内的表观分布容积 (Vd/F) 为 5.8 L/kg，表明其组织分布广泛。该化合物在肿瘤组织中蓄积，腹腔注射给药后2小时，肿瘤与血浆浓度比为4.2:1 [1] 3. 代谢：E3连接酶配体3主要在肝脏中通过细胞色素P450 2C19 (CYP2C19) 和葡萄糖醛酸化代谢。在人肝微粒体中，体外代谢半衰期为4.5小时。已鉴定出三种主要的非活性代谢物（两种羟基化衍生物和一种葡萄糖醛酸苷结合物）[1] 4. 排泄：在小鼠中，PROTAC的血浆消除半衰期(t1/2)为6.2 ± 0.7小时。腹腔注射后72小时内，70%的剂量经粪便排出（45%为原形PROTAC，25%为代谢物），22%经尿液排出（主要为代谢物）[1] 5. 血浆蛋白结合率：在0.1–10 μM的浓度范围内，PROTAC在人血浆中的血浆蛋白结合率为94 ± 2%（通过平衡透析法测定）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：含有E3 连接酶配体 3的 PROTAC 对正常人细胞（NHF、HepG2、PBMC）显示出较低的细胞毒性，CC50 值 >20 μM，因此对 HCT116 细胞的治疗指数 >30 [1]
2. 急性体内毒性：在 CD-1 小鼠和 Sprague-Dawley 大鼠中，单次腹腔注射剂量高达 200 mg/kg 的 PROTAC 不会引起死亡或严重的临床症状。小鼠在剂量≥100 mg/kg时观察到轻微的短暂性腹部膨胀，24小时内消退[1] 3. 亚慢性毒性：大鼠腹腔注射PROTAC（20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg，隔日一次）四周，未导致体重、食物摄入量或实验室参数（肝功能：ALT、AST；肾功能：肌酐、BUN；血液学：血红蛋白、白细胞计数）发生显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏）的组织病理学检查未见异常病变[1] 4. 药物相互作用潜力：E3 连接酶配体 3 在治疗浓度 (≤1 μM) 下不抑制或诱导主要细胞色素 P450 酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 药物分类和作用：E3 连接酶配体 3 是一种合成的小分子配体，靶向 E3 泛素连接酶 VHL，专门设计为 AURORA-A 激酶 PROTAC 降解剂的组成部分。它能够促进 VHL、AURORA-A 和 PROTAC 之间形成三元复合物，从而启动靶向降解 [1]
2. 作用机制：作为 PROTAC 的一部分，E3 连接酶配体 3 介导 VHL（E3 泛素连接酶）募集至 AURORA-A（靶激酶），形成稳定的 PROTAC-VHL-AURORA-A 三元复合物。这会触发 AURORA-A 的多聚泛素化，最终导致其被 26S 蛋白酶体降解。 AURORA-A 的降解会破坏细胞周期进程（G2/M 期阻滞），诱导细胞凋亡，并抑制癌细胞的迁移/侵袭[1] 3. 治疗潜力：基于 E3 连接酶配体 3 的 PROTAC 已被开发用于治疗 AURORA-A 过表达的癌症，包括结肠癌、乳腺癌、肺癌和卵巢癌。它们降解 AURORA-A（而不仅仅是抑制其活性）的能力，使其在克服对传统 AURORA 激酶抑制剂的耐药性方面具有潜在优势 [1] 4. 研究背景：该配体在 2022 年发表的题为“靶向 AURORA-A 激酶的新型高效 PROTAC”（《化学生物学最新研究》）的论文中有所报道，该论文重点介绍了其高 VHL 结合亲和力、强效的 AURORA-A 降解能力以及良好的临床前疗效和安全性 [1] 5. 开发优势：与其他 VHL 配体相比，E3 连接酶配体 3 具有更高的溶解度、更强的三元复合物形成效率和更低的脱靶降解，这支持了其在开发有效的靶向 AURORA-A 的 PROTAC 疗法方面的应用 [1] |
| 分子式 |
C15H12N2O7
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|---|---|
| 分子量 |
332.264984130859
|
| 精确质量 |
332.064
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| CAS号 |
1061605-21-7
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| 相关CAS号 |
1061605-21-7;
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| PubChem CID |
25015436
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
-0.1
|
| tPSA |
130
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
617
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(N(C(CCC1=O)C(N1)=O)C2=O)C(C2=CC=C3)=C3OCC(O)=O
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| InChi Key |
ZVWIXIGBWIEDFO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H12N2O7/c18-10-5-4-8(13(21)16-10)17-14(22)7-2-1-3-9(12(7)15(17)23)24-6-11(19)20/h1-3,8H,4-6H2,(H,19,20)(H,16,18,21)
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| 化学名 |
2-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]oxyacetic acid
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| 别名 |
E3 ligase Ligand 3; TC E3 5031; TC E3-5031; TC E35031; TCE3 5031; TCE3-5031; TCE35031; TCE 35031; TCE-35031
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 42 mg/mL (~126.41 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0096 mL | 15.0480 mL | 30.0960 mL | |
| 5 mM | 0.6019 mL | 3.0096 mL | 6.0192 mL | |
| 10 mM | 0.3010 mL | 1.5048 mL | 3.0096 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Thalidomide-pyrrolidine
OICR-41103N
CDK12-Cyclin K ligand-1
(S,S,S)-AHPC-Me
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COA
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