| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
p97/VCP ATPase complex (specifically p97-associated deubiquitination activity), Sec61 translocon. Eeyarestatin I inhibits p97-associated deubiquitination (PAD) by associating with the p97 complex, and also inhibits co-translational protein translocation into the endoplasmic reticulum by targeting the Sec61 complex. No specific IC₅₀ or Kᵢ values were reported in these studies. [2,3]
Endoplasmic reticulum-associated protein degradation (ERAD) |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
抑制蛋白分泌：在经8 μM EerI处理1小时的HepG2细胞中，ConA凝集素结合实验显示糖蛋白分泌几乎完全被阻断。从培养基中免疫沉淀α1-抗胰蛋白酶进一步证实了这一效应。该效应比布雷菲德菌素A（5 μg/mL）更显著。[3]
抑制培养细胞中的ER转运：在表达TCRα的HeLa细胞中，8 μM EerI处理1小时显著降低N-糖基化TCRα的水平，同时非糖基化蛋白增加。使用半透化细胞的体外转运实验证实，EerI预处理抑制了前催乳素(pPL)的信号肽切割和糖基化蛋白水解蛋白(gPLP)的N-糖基化。[3] 抑制微粒体中的共翻译转运：在经250 μM EerI处理的犬胰腺粗微粒体中，通过信号肽切割和蛋白酶保护实验测定，pPL的转运几乎完全被阻断。EerI抑制了多种利用Sec61依赖性共翻译途径的膜蛋白（ASGPr、SPP、US11、P2X₂、PL、HA-TCRα、gCytB5）的转运，但不影响糖基化细胞色素b5（gCytB5）变体的Sec61非依赖性翻译后整合。[3] 抑制p97相关去泛素化：在经EerI（10 μM，14小时）处理的293T细胞中，p97免疫沉淀物中含有显著更多的多聚泛素化蛋白。体外去泛素化实验显示，来自EerI处理细胞的p97相关底物在孵育后仅减少约10%，而对照细胞减少约60%。EerI还抑制ataxin-3介导的p97相关底物去泛素化，但不影响HAUSP相关去泛素化。[2] 多聚泛素化蛋白积累：在表达US11和HA标记的MHC I类重链的A9细胞中，EerI处理（10 μM，14小时）导致细胞质中多聚泛素化HC积累。在TCRα-GFP和可溶性细胞质蛋白酶体底物GFPµ（一种带有IgM µ链降解信号的GFP融合蛋白）中也观察到类似积累。EerI延迟了依赖于ataxin-3的GFPµ降解，但不影响不依赖于ataxin-3的Ub-R-GFP降解。[2] p97复合物上的作用机制：EerI不破坏p97与Derlin-1、VIMP、Ufd1或ataxin-3的相互作用。然而，在未处理细胞中与p97相互作用的一个未知~180 kDa蛋白在EerI处理细胞中不再结合，且该相互作用仅限于膜组分。由于EerI本身具有荧光性，在EerI处理细胞的p97和ataxin-3免疫沉淀物中检测到荧光，表明EerI与p97复合物结合。[2] 用 eeyarestatin I（2.5–40 μM；48 小时）处理的 A549 和 H358 细胞会经历定量的基本细胞死亡 [1]。用 eeyarestatin I（2.5–40 μM；48 小时）处理 A549 和 H358 细胞会导致内质网 (ER) 中间标记物升高，包括低至 20 μM 的 Bip 和 CHOP。当使用 eeyarestatin I 治疗时，IRE1α 和 PERK 等重要蛋白质会以剂量依赖性方式泛素化[1]。用 eeyarestatin I（20 μM；48 小时；A549 和 H358 细胞）处理会导致细胞侵袭和迁移 [1]。通过最有可能使 Sec61 复合物失活，eeyarestatin 1 抑制未成熟蛋白质从膜复合物转移到 ER 易位机制 [2]。 |
| 细胞实验 |
代谢标记和分泌测定：HepG2细胞用EerI（8 μM，1小时）处理，在无甲硫氨酸/半胱氨酸培养基中饥饿，然后用[³⁵S]Met/Cys（22 μCi/mL）脉冲标记30分钟。90分钟示踪后，收集培养基，用ConA-Sepharose分离糖蛋白，通过SDS-PAGE和放射自显影分析。[3]
特异性蛋白免疫沉淀：表达HA标记的MHC I类重链或FLAG标记的ataxin-3的细胞在变性条件下（0.2% SDS，5 mM NEM，95°C加热）裂解以保留泛素化状态。用抗HA或抗FLAG抗体免疫沉淀蛋白，用抗泛素抗体进行免疫印迹分析。[2] 亚细胞分级分离：经EerI（10 μM，14小时）处理的A9细胞用0.028%洋地黄皂苷在ATP再生系统存在下透化。样品通过离心分离成膜沉淀(P)和上清(S)组分。在变性条件下从各组分免疫沉淀HC。[2] 体外去泛素化实验：从对照或EerI处理的293T细胞中免疫沉淀p97或ataxin-3复合物。免疫沉淀物在37°C下孵育0-60分钟，存在或不存在ATP。加入SDS样品缓冲液终止反应，用抗泛素抗体进行免疫印迹分析，监测多聚泛素化底物的减少。[2] 半透化细胞体外转运实验：经EerI（8 μM，1小时）处理的HeLa细胞被收获、洗涤，并用20 μg/mL洋地黄皂苷半透化。这些细胞作为ER膜来源用于体外翻译反应，反应体系含有兔网织红细胞裂解液、[³⁵S]Met/Cys以及编码前催乳素或糖基化蛋白水解蛋白的mRNA。通过信号肽切割或N-糖基化评估转运。[3] 蛋白酶保护实验：含ER微粒体的体外翻译反应用500 μg/mL蛋白酶K在冰上处理1小时，存在或不存在1% Triton X-100。加入1 mM PMSF终止反应，SDS-PAGE分析样品。[3] 新生链转移的交联分析：截短的P2X₂ [Q56C]核糖体-新生链复合物在兔网织红细胞裂解液中合成，加入经DMSO或250 μM EerI处理的ER膜。用1 mM双马来酰亚胺己烷诱导交联。用抗HA抗体免疫沉淀后，分析新生P2X₂链与Sec61α或SRP54之间的交联加合物。[3] EerI荧光检测：EerI是一种黄色化合物，在488 nm激发时发出荧光。利用这一特性，通过测量EerI处理细胞免疫沉淀物中的荧光来检测EerI与p97复合物的结合。[2] 活力测定 [1] 细胞类型： A549 和 H358 细胞 测试浓度： 2.5 μM、5 μM、10 μM、20 μM、40 μM 孵育持续时间：48小时 实验结果：引起A549和H358细胞的剂量依赖性细胞死亡。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： A549 和 H358 细胞 测试浓度： 2.5 μM、5 μM、10 μM ，20 μM，40 μM 孵育持续时间：48 小时 实验结果：增加 ER 应激标记物，包括 Bip 和 CHOP。 |
| 参考文献 |
|
| 分子式 |
C27H25CL2N7O7
|
|---|---|
| 分子量 |
630.436103582382
|
| 精确质量 |
490.136
|
| 元素分析 |
C, 51.44; H, 4.00; Cl, 11.25; N, 15.55; O, 17.76
|
| CAS号 |
412960-54-4
|
| PubChem CID |
5003929
|
| 外观&性状 |
Yellow to orange solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.643
|
| LogP |
3.63
|
| tPSA |
150.93
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
43
|
| 分子复杂度/Complexity |
1090
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=CC(=CC=1)N1C(N(CC(NN=CC=CC2=CC=C([N+](=O)[O-])O2)=O)C(C)(C)C1N(C(NC1C=CC(=CC=1)Cl)=O)O)=O
|
| InChi Key |
JTUXTPWYZXWOIB-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C27H25Cl2N7O7/c1-27(2)24(35(40)25(38)31-19-9-5-17(28)6-10-19)34(20-11-7-18(29)8-12-20)26(39)33(27)16-22(37)32-30-15-3-4-21-13-14-23(43-21)36(41)42/h3-15,24,40H,16H2,1-2H3,(H,31,38)(H,32,37)
|
| 化学名 |
2-[3-(4-chlorophenyl)-4-[(4-chlorophenyl)carbamoyl-hydroxyamino]-5,5-dimethyl-2-oxoimidazolidin-1-yl]-N-[3-(5-nitrofuran-2-yl)prop-2-enylideneamino]acetamide
|
| 别名 |
Eeyarestatin I; 412960-54-4; DTXSID20849579; RefChem:339570; DTXCID701323513;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 25~85 mg/mL (39.7~134.8 mM)
Ethanol: ~7 mg/mL (~11.1 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1.25 mg/mL (1.98 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5862 mL | 7.9310 mL | 15.8619 mL | |
| 5 mM | 0.3172 mL | 1.5862 mL | 3.1724 mL | |
| 10 mM | 0.1586 mL | 0.7931 mL | 1.5862 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
