| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
p97/VCP ATPase complex (specifically p97-associated deubiquitination activity), Sec61 translocon. Eeyarestatin I inhibits p97-associated deubiquitination (PAD) by associating with the p97 complex, and also inhibits co-translational protein translocation into the endoplasmic reticulum by targeting the Sec61 complex. No specific IC₅₀ or Kᵢ values were reported in these studies. [2,3]
Endoplasmic reticulum-associated protein degradation (ERAD) Eeyarestatin I targets the ERAD pathway. It inhibits Sec61 translocon, which forms the membrane pore of the ER translocon. It also targets the p97-associated deubiquitinating process (PAD) and inhibits ataxin-3 (atx3)-dependent deubiquitination. By inhibiting ERAD, it restricts the elimination of misfolded proteins from the endoplasmic reticulum. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
抑制蛋白质分泌：在HepG2细胞中，用8 μM EerI处理1小时后，ConA凝集素结合试验表明糖蛋白的分泌几乎完全被阻断。从培养基中免疫沉淀α1-抗胰蛋白酶证实了这一效应。该效应比布雷菲德菌素A（5 μg/mL）更为显著。[3]
抑制培养细胞中的内质网转位：在表达TCRα的HeLa细胞中，用8 μM EerI处理1小时后，N-糖基化TCRα的水平显著降低，同时非糖基化蛋白的水平升高。使用半透化细胞进行的体外转位试验证实了这一点，其中EerI预处理抑制了催乳素前体（pPL）信号序列的切割和糖基化蛋白脂质蛋白（gPLP）的N-糖基化。 [3] 微粒体中共翻译转位的抑制：在用 250 μM EerI 处理的犬胰腺粗面微粒体中，通过信号序列切割和蛋白酶保护实验确定，pPL 的转位几乎完全被阻断。EerI 抑制了多种利用 Sec61 依赖性共翻译途径的膜蛋白（ASGPr、SPP、US11、P2X₂、PL、HA-TCRα、gCytB5）的转位，但不影响糖基化细胞色素 b5 (gCytB5) 变体的 Sec61 非依赖性翻译后整合。 [3] p97相关去泛素化（PAD）的抑制：在用EerI（10 μM，14 h）处理的293T细胞中，p97免疫沉淀物中多聚泛素化蛋白的含量显著增加。体外去泛素化实验表明，与对照组细胞相比，EerI处理组细胞中p97相关底物的含量在孵育后仅降低了约10%，而对照组细胞则降低了约60%。EerI还抑制了ataxin-3 (atx3)介导的p97相关底物的去泛素化，但不影响HAUSP相关的去泛素化。 [2] 多聚泛素化蛋白的积累：在表达US11和HA标签MHC I类重链(HC)的A9细胞中，用EerI(10 μM，14 h)处理后，胞质中多聚泛素化的HC积累。TCRα-GFP和可溶性胞质蛋白酶体底物GFPµ（一种带有源自IgM µ链的降解信号的GFP融合蛋白）也观察到类似的积累。EerI延缓了依赖于atx3的GFPµ的降解，而对不依赖于atx3的Ub-R-GFP的降解没有影响。[2] 对p97复合物的作用机制：EerI不破坏p97与Derlin-1、VIMP、Ufd1或atx3的相互作用。然而，研究发现一种未知的约180 kDa蛋白在未处理的细胞中与p97相互作用，但在EerI处理的细胞中则未观察到这种相互作用，且这种相互作用仅限于膜组分。EerI与p97复合物结合，因为在EerI处理的细胞的p97和atx3免疫沉淀物中检测到了EerI（该化合物具有荧光性）发出的荧光。[2]用eeyarestatin I（2.5–40 μM；48小时）处理A549和H358细胞会导致定量必需细胞死亡[1]。用eeyarestatin I（2.5–40 μM；48小时）处理A549和H358细胞会导致内质网（ER）中间体标志物（包括Bip和CHOP）的增加，即使浓度低至20 μM也能观察到这种增加。当用eeyarestatin I处理时，IRE1α和PERK等重要蛋白会以剂量依赖的方式发生泛素化[1]。用eeyarestatin I（20 μM；48小时；A549和H358细胞）处理可导致细胞侵袭和迁移[1]。eeyarestatin I很可能通过使Sec61复合物失活来抑制未成熟蛋白从膜复合物向内质网转运机制的转移[2]。体外实验表明，eeyarestatin I抑制蛋白转运，从而限制错误折叠蛋白从内质网的清除。它特异性靶向Sec61复合物。它通过促凋亡蛋白NOXA诱导细胞死亡，并具有抗癌作用。它抑制含缬氨酸蛋白（p97/VCP），并对黄病毒表现出强效的杀病毒活性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
现有文献中并未详细描述Eeyarestatin I的体内具体数据。然而，作为一种具有抗癌作用的强效ERAD抑制剂，它可用于临床前研究，以探究ERAD在癌症和其他疾病中的作用。其通过NOXA诱导细胞死亡的能力提示其可能具有治疗潜力。
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| 酶活实验 |
可通过无细胞检测方法评估 Eeyarestatin I 的活性，该方法旨在测量其对蛋白质转位的影响。将微粒体膜或纯化的 Sec61 复合物与蛋白质底物和该化合物一起孵育。使用生化检测方法测量蛋白质转位的抑制情况。可通过体外去泛素化检测方法，利用重组 ataxin-3 评估其对去泛素化的影响。
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| 细胞实验 |
代谢标记和分泌分析：HepG2 细胞用 EerI (8 μM，1 小时) 处理，在不含甲硫氨酸/半胱氨酸的培养基中饥饿培养，然后用 [³⁵S]Met/Cys (22 μCi/mL) 脉冲标记 30 分钟。90 分钟追踪后，收集培养基，使用 ConA-Sepharose 分离糖蛋白，并通过 SDS-PAGE 和放射自显影进行分析。[3]
特异性蛋白的免疫沉淀：表达 HA 标签的 MHC I 类重链或 FLAG 标签的 atx3 的细胞在变性条件下（0.2% SDS，5 mM NEM，95°C 加热）裂解，以保留泛素化修饰。用抗 HA 或抗 FLAG 抗体免疫沉淀蛋白，并通过抗泛素抗体进行免疫印迹分析。 [2] 亚细胞分级分离：用 EerI (10 μM, 14 h) 处理 A9 细胞后，在 ATP 再生系统中用 0.028% 洋地黄皂苷进行透化处理。通过离心将样品分离为膜沉淀 (P) 和上清液 (S) 两部分。在变性条件下，从各部分中免疫沉淀 HC。[2] 体外去泛素化实验：从对照组或 EerI 处理的 293T 细胞中免疫沉淀 p97 或 atx3 复合物。将免疫沉淀物在 37°C 下孵育 0-60 分钟，有或无 ATP。加入 SDS 上样缓冲液终止反应，并用抗泛素抗体进行免疫印迹分析，以监测多泛素化底物的丢失。 [2] 体外转位实验（使用半透化细胞）：用EerI（8 μM，1 小时）处理 HeLa 细胞后，收集、洗涤并用 20 μg/mL 洋地黄皂苷进行半透化处理。然后将这些细胞用作内质网膜的来源，进行体外翻译反应，反应体系包含兔网织红细胞裂解液、[³⁵S]Met/Cys 和编码前催乳素或糖基化蛋白脂蛋白 (gPLP) 的 mRNA。通过信号序列切割 (pPL) 或 N-糖基化 (gPLP) 来评估转位。[3] 蛋白酶保护实验：将含有内质网微粒体的体外翻译反应体系在冰上用 500 μg/mL 蛋白酶 K 处理 1 小时，反应体系中分别添加或不添加 1% Triton X-100。反应用 1 mM PMSF 终止，样品经 SDS-PAGE 分析。[3] 新生链转移的交联分析：在兔网织红细胞裂解液中合成截短的 P2X₂ [Q56C] 核糖体-新生链 (RNC) 复合物，并将其添加到经 DMSO 或 250 μM EerI 处理的内质网膜中。用 1 mM 双马来酰亚胺己烷 (BMH) 诱导交联。用抗 HA 抗体进行免疫沉淀后，分析新生 P2X₂ 链与 Sec61α 或 SRP54 之间的交联加合物。[3] EerI 荧光检测：EerI 是一种黄色化合物，在 488 nm 激发下发出荧光。该特性用于通过测量EerI处理细胞免疫沉淀物的荧光强度来检测EerI与p97复合物的结合。[2] 细胞活力测定[1] 细胞类型： A549和H358细胞 测试浓度： 2.5 μM、5 μM、10 μM、20 μM、40 μM 孵育时间： 48小时 实验结果： 导致A549和H358细胞剂量依赖性死亡。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： A549 和 H358 细胞 测试浓度： 2.5 μM、5 μM、10 μM、20 μM、40 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 内质网应激标志物（包括 Bip 和 CHOP）增加。 为了评估 Eeyarestatin I 的细胞效应，用该化合物处理细胞，并通过蛋白质印迹法检测 ERAD 底物的积累。使用 Annexin V/PI 染色或 caspase 活性检测评估细胞凋亡的诱导情况。评估其对未折叠蛋白反应 (UPR) 和内质网应激的影响。 |
| 动物实验 |
Eeyarestatin I 的体内研究通常包括给荷瘤小鼠给药。研究将评估该化合物对肿瘤生长、ERAD 底物积累和细胞凋亡的影响。此外，还将检测肿瘤组织中内质网应激和未折叠蛋白反应 (UPR) 激活的生物标志物。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
伊瑞司他汀 I 的分子式为 C27H25Cl2N7O7，分子量为 630.44，CAS 编号为 412960-54-4。该化合物是一种可透过细胞膜的氧代咪唑烷基羟基脲。它可溶于 DMSO 和其他有机溶剂，纯度通常 ≥98%。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有文献中未提供Eeyarestatin I的具体毒理学数据。然而，作为一种内质网相关降解（ERAD）抑制剂，它可诱导内质网应激和细胞凋亡，从而可能导致剂量依赖性毒性。与所有研究化合物一样，在操作过程中应采取标准安全预防措施。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
双重作用机制：Eeyarestatin I是一种小分子，至少具有两个不同的细胞靶点。它通过靶向Sec61转位子抑制共翻译蛋白向内质网的转位，从而阻止新生多肽从SRP靶向复合物转移到Sec61复合物。它还通过靶向p97相关去泛素化（PAD）抑制内质网相关降解（ERAD），特别是影响由p97提取的底物经ataxin-3介导的去泛素化。 [2,3]
转位抑制的底物特异性：与具有底物特异性抑制作用的环肽类化合物CAM741和cotransin不同，EerI广泛抑制多种Sec61依赖性底物的转位，包括ASGPr、SPP、US11、P2X₂、PL和HA-TCRα，但对Sec61非依赖性gCytB5的整合没有影响。[3] 细胞代谢/激活的必要性：EerI似乎需要细胞代谢才能被激活，因为当直接将其添加到透化US11细胞中时，它无法抑制逆向转位，而经胰蛋白酶处理的细胞不再对EerI有反应。该化合物本身具有荧光性，可以被细胞吸收，但其活性形式仍有待鉴定。 [2] ERAD 与易位抑制的关系：EerI 处理的细胞胞质溶胶中多聚泛素化 MHC I 类重链的积累表明，EerI 抑制的是易位之后的某个步骤，而非直接阻断易位本身。这与之前提出的 EerI 阻断易位的报道相矛盾。这种差异可能是由于不同的实验方法（稳态分析与脉冲追踪分析）造成的。[2] 潜在的治疗应用：EerI 已被证明能够诱导内质网应激，并可能具有类似于蛋白酶体抑制剂硼替佐米的抗癌活性。它能够抑制 p97 相关的去泛素化和 Sec61 介导的易位，使其成为研究蛋白质稳态的潜在有用工具，并有望进一步开发为抗癌药物。 [2,3] Eeyarestatin I 是一种强效的 ERAD 抑制剂，被用作研究蛋白质质量控制和内质网应激的研究工具。它靶向 Sec61 转位子和 p97 相关的去泛素化过程。它具有抗癌作用，并通过 NOXA 诱导细胞死亡。它尚未获得临床批准。 |
| 分子式 |
C27H25CL2N7O7
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|---|---|
| 分子量 |
630.436103582382
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| 精确质量 |
490.136
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| 元素分析 |
C, 51.44; H, 4.00; Cl, 11.25; N, 15.55; O, 17.76
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| CAS号 |
412960-54-4
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| PubChem CID |
5003929
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| 外观&性状 |
Yellow to orange solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.643
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| LogP |
3.63
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| tPSA |
150.93
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
43
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| 分子复杂度/Complexity |
1090
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=CC(=CC=1)N1C(N(CC(NN=CC=CC2=CC=C([N+](=O)[O-])O2)=O)C(C)(C)C1N(C(NC1C=CC(=CC=1)Cl)=O)O)=O
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| InChi Key |
JTUXTPWYZXWOIB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H25Cl2N7O7/c1-27(2)24(35(40)25(38)31-19-9-5-17(28)6-10-19)34(20-11-7-18(29)8-12-20)26(39)33(27)16-22(37)32-30-15-3-4-21-13-14-23(43-21)36(41)42/h3-15,24,40H,16H2,1-2H3,(H,31,38)(H,32,37)
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| 化学名 |
2-[3-(4-chlorophenyl)-4-[(4-chlorophenyl)carbamoyl-hydroxyamino]-5,5-dimethyl-2-oxoimidazolidin-1-yl]-N-[3-(5-nitrofuran-2-yl)prop-2-enylideneamino]acetamide
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| 别名 |
Eeyarestatin I; 412960-54-4; DTXSID20849579; RefChem:339570; DTXCID701323513;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 25~85 mg/mL (39.7~134.8 mM)
Ethanol: ~7 mg/mL (~11.1 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 1.25 mg/mL (1.98 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5862 mL | 7.9310 mL | 15.8619 mL | |
| 5 mM | 0.3172 mL | 1.5862 mL | 3.1724 mL | |
| 10 mM | 0.1586 mL | 0.7931 mL | 1.5862 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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463611831
