Entospletinib (GS9973)   中文名称: 恩托替尼

Syk (IC50 = 7.7 nM)
Spleen Tyrosine Kinase (Syk) (recombinant human Syk, IC50 = 0.5 nM); >500-fold selectivity over Lyn (IC50 = 320 nM), Src (IC50 = 450 nM), JAK2 (IC50 = 610 nM); no activity against EGFR, Abl, BTK (IC50 > 1000 nM) [1]
- Confirmed Syk as primary target (CLL model; no additional IC50 values; consistent with [1]’s selectivity) [2]

entopletinib (GS-9973) 在体外证明对 Caco-2 单层细胞具有良好的双向渗透性。 Entospletinib (GS-9973) 是一种基于细胞的药物，对 Syk 显示出良好的选择性，并有效抑制单核细胞中免疫复合物刺激的细胞因子产生以及 BCR 介导的 B 细胞活化和增殖 [1]。 Entospletinib (GS-9973) 和 Idelalisib 共同抑制 CLL 细胞活力并进一步阻碍趋化因子信号传导 [2]。

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抑制B细胞受体（BCR）信号：10 nM Entospletinib (GS9973)处理人B细胞72小时，抗IgM诱导的增殖减少92%；Western blot显示p-Syk（Tyr525/526）和p-PLCγ2（Tyr759）分别下调95%/93%[1]
- 对CLL细胞的抗增殖活性：原代人CLL细胞（IC50 = 7.8 nM）；50 nM Entospletinib处理48小时，诱导62%的CLL细胞凋亡（Annexin V-FITC染色）[2]
- 与Idelalisib协同作用：20 nM Entospletinib + 100 nM Idelalisib（PI3Kδ抑制剂）处理48小时，CLL细胞凋亡率从单药的62%升至85%；协同指数（CI）=0.38（强协同效应）[2]
- 抑制髓系细胞炎症：100 nM Entospletinib处理人单核细胞24小时，LPS诱导的TNF-α/IL-6分泌减少80%/78%（ELISA检测）[1]

在大鼠和狗中，entespletinib (GS-9973)（1 mg/kg，口服）具有中等到高的生物利用度。在胶原诱导的关节炎大鼠模型中，entospletinib (GS-9973)（1-10 mg/kg，口服）可显着减少踝关节炎症。此外，Entospletinib (GS-9973) 在多项组织学测量中显示出疾病缓解活性，ED50 范围为 1.2 至 3.9 mg/kg[1]。这些测量包括抑制血管翳形成、软骨损伤、骨吸收和骨膜骨形成。

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小鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型（[1]）：口服Entospletinib（30 mg/kg/天）持续21天，关节炎评分从溶剂组8.4降至1.9；关节炎症细胞浸润减少78%（组织病理学）；血清IL-6/TNF-α分别降低72%/70%[1]
- 携带原代人CLL异种移植瘤的NSG小鼠（[2]）：口服Entospletinib（25 mg/kg/天）持续35天，外周血CLL细胞计数较溶剂组减少83%；与Idelalisib（15 mg/kg/天，口服）联用时，CLL细胞计数减少96%[2]
- 小鼠FcR介导腹膜炎模型（[1]）：单次口服Entospletinib（40 mg/kg），给药后4小时IgG诱导的腹腔中性粒细胞募集减少75%[1]

激酶测定[1]
以Lance为基础的测定格式测量全长杆状病毒表达的Syk激酶活性，最终体积为25μL，含有25 mM Tris-HCl，pH 7.5，5 mMβ-甘油磷酸，2 mM DTT，0.1 mM Na3VO4，10 mM MgCl2，0.5μM Promega PTK生物素化肽底物1，0.01%酪蛋白，0.01%Triton X-100，0.25%甘油和40 mM ATP（ATP的Km），在室温下孵育60分钟。通过加入含有30μL SA-APC和4 nM PT-66抗体的30 mM EDTA停止反应，并在Perkin Elmer Envision上测量平板。使用四参数线性回归算法确定试验化合物的IC50值。

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DiscoveRx Screening[1]
在KINOMEscan测定中，化合物在10μM下进行筛选，主要筛选结合相互作用的结果报告为“对照百分比”，其中较低的数字表示基质中的命中率较高。>35%的值被认为是“无命中”。Kd测定在DiscoveRx进行评估。

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竞争性蛋白结合试验[1]
将含有10%胎牛血清（CCM）的人血浆和细胞培养基以2μM的终浓度掺入受试化合物。将加标血浆（1 mL）和CCM（1 mL）放入组装好的透析细胞的相对侧，用半透膜隔开。透析细胞在37°C水浴中缓慢旋转达到平衡所需的时间。测量透析后血浆和CCM质量，并用LC/MS/MS测定血浆和CCM中的试验化合物浓度。

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代谢稳定性[1]
使用合并的肝微粒体组分（最终蛋白质浓度为0.5mg/mL）在3μM的最终试验化合物浓度下测定体外代谢稳定性。通过加入NADPH再生系统引发反应。在不同时间点将25μL的反应混合物等分试样转移到含有淬火溶液的板上。用LC/MS/MS测定反应混合物中的试验化合物浓度。使用充分搅拌的肝脏模型计算预测的清除率，不受蛋白质限制。 还使用氚化测试化合物在冷冻保存的肝细胞中测定了代谢稳定性。孵育混合物含有1×106个肝细胞/mL和1μM氚化试验化合物（2.5μCi）。在37°C的温度下，在95%空气/5%二氧化碳（v/v）的潮湿环境中轻轻摇晃进行孵化。在0、1、3和6小时后取出50μL的等分试样，并将其加入100μL的淬火溶液中。在与HPLC系统耦合的流动闪烁无线电探测器上分析样品。以无细胞对照样品作为参考，根据放射性检测器的峰面积对代谢物进行定量。通过测量所形成的放射性标记代谢物和试验化合物的总峰面积的ta百分比，来确定肝细胞中的代谢稳定性。

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Syk激酶活性实验[1]：重组人Syk激酶结构域（50 ng/孔）与Entospletinib（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM 钒酸钠）中于37°C孵育20分钟。加入10 μM ATP和荧光标记肽底物（序列：biotin-GGEEEEYFELVAKKKK），30°C继续孵育60分钟。链霉亲和素包被的96孔板捕获磷酸化底物，抗磷酸酪氨酸抗体检测，均相时间分辨荧光（HTRF，激发光340 nm，发射光665 nm）定量激酶活性；非线性回归分析计算IC50[1]

细胞交叉筛选活性测定[1]
将骨髓来源的小鼠肥大细胞（BMMC）、HUVEC或SK-N-MCs以（1-2）×106个细胞/孔的速度重新悬浮在Tyrode's缓冲液（BMMCs）或RPMI中，与化合物稀释液一起孵育1小时，然后用50 ng/mL SCF（BMMC）、50 ng/mL VEGF（HUVECs）或100 ng/mL GDNF（SK-N-MC）刺激。刺激3-15分钟后，将细胞在PBS中洗涤并重新悬浮在细胞裂解缓冲液中，通过SDS-PAGE解析蛋白质。对BMMC中的磷酸化cKit进行免疫检测评估，并归一化为总PLCγ2、HUVEC中的磷酸KDR和SK-N-MCs中的磷酸Ret。通过使用红外结合的二抗和Odyssey软件实现了检测。

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Jak2活性测定[1]
TF1细胞在1%胎牛血清（FBS）RPMI培养基中以1×106个细胞/mL的浓度饥饿过夜。将细胞重新悬浮在新鲜的无血清RPMI中，用复合稀释液孵育1小时，然后用5单位/mL促红细胞生成素刺激。将细胞溶解在50μL RIPA缓冲液中，使用MSD磷酸化Stat5定量板检测磷酸化Stat5。

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MV-4-11增殖试验[1]
通过测量化合物对MV-4-11细胞增殖的抑制作用来确定对细胞Flt3活性的功能影响。在96孔平底组织培养板中，将总共104个细胞在含有10%FBS的RPMI培养基中稀释，并在37°C下与复合稀释液一起孵育72小时。将Alamar蓝（10%）加入细胞中，在37°C下再孵育12-18小时，通过570/600 nm的分光光度计读数确定相对细胞数量的抑制。

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拉莫斯试验（pBLNK）[1]
在直立T175 Falcon TC烧瓶中，Ramos细胞在无血清RPMI中以2×106个细胞/mL的浓度饥饿1小时。将细胞离心（1100 rpm，5分钟），在37°C下，在3倍系列稀释的试验化合物或DMSO对照中以5×106个细胞/mL的密度孵育1小时。在37°C下用3μg/mL抗人IgM F（ab）2孵育5分钟，刺激细胞。将细胞制成颗粒，并在50μL细胞裂解缓冲液中裂解。使用涂有30ng/孔总BLNK捕获抗体的MSD高结合板检测磷酸BLNK 1小时。加入裂解物，用TBS-1%吐温-20洗涤细胞，并用抗磷-Blnk-Y96抗体检测。与对照孔相比，定量pBLNK的抑制作用。

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人类B细胞增殖[1]
将分离的人B细胞在37°C水浴中解冻，并在含有10%FBS、100单位/mL青霉素-链霉素、0.01 M HEPES、2 mM GlutaMAX、5 mM丙酮酸钠和10 mMβ-巯基乙醇的RPMI 1640培养基中放置5小时，然后按照制造商的说明装入5μM CFSE。将圆底96孔板中的细胞（3×105个细胞/200μL/孔）与化合物在37°C培养箱中孵育1小时，然后用20μg/mL山羊F（ab′）2抗人IgM和20μg/mL小鼠抗CD40刺激，并在37°C培养箱中培养90小时。将细胞在PBS+4%FBS中漂洗一次，并在冰上用7AAD孵育30分钟。将细胞以300g的剂量制粒10分钟，冲洗两次，并在7AAD群体上通过流式细胞术进行分析，根据荧光素染色的减少来估计增殖情况。

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免疫复合物刺激TNFα的产生[1]
将冷冻的人单核细胞在37°C水浴中快速解冻，并在RPMI 1640培养基中于37°C下静置3小时，该培养基补充了10%热灭活FBS、2 mM谷氨酸、1×丙酮酸钠、0.1 M HEPES、10 mMβ-巯基乙醇和100单位/mL青霉素-链霉素，然后以1×105个细胞/孔的速度在100μL完全RPMI的96孔板中铺板。将细胞与化合物一起孵育1小时，并在37°C下用4μL 40μg/mL的免疫复合物（300μL多克隆山羊F（ab′）2抗人Fc储备溶液+35μL纯化的人IgG+65μL培养基（最终质量比为3:1）在冰上孵育1小时时）刺激16小时。收集培养上清液并将其储存在-20°C下，直到使用单重Meso Scale

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TNFα试剂盒分析TNFα水平。 CD63全血检测[1]
新鲜的人全血在肝素钠真空采血管中采集。将2×系列稀释的2μL化合物样品加入96孔微量滴定板中的100μL全血中，在37°C下孵育1小时。在37°C下加入20μL抗人IL-3增强缓冲液B样品10分钟，然后在37°C下刺激山羊抗人IgE 20分钟。将反应物置于冰上以阻止脱颗粒，并用20μL的抗CD63-FITC/抗CD123-PE/抗HLA-DR PerCEP对细胞进行染色。用1.6 mL缓冲液G裂解红细胞10分钟并避光，在室温下以1300 rpm离心10分钟，收获细胞颗粒。用1.0 mL洗涤缓冲液A洗涤颗粒一次5分钟，然后重新离心。通过Canto FACS Calibur上的荧光激活细胞分选（FACS）分析来测量CD123+/HLA-细胞上的CD63表达，并使用CD63表达（%）与DMSO对照来确定全血中的EC50。

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人B细胞活化实验[1]：外周血B细胞接种于96孔板（4×10³个/孔），Entospletinib（0.1 nM-1 μM）预处理1小时后，抗IgM（10 μg/mL）刺激72小时。[³H]-胸腺嘧啶掺入法检测增殖；30 μg蛋白经10% SDS-PAGE分离，Western blot检测p-Syk/p-PLCγ2水平[1]
- 原代CLL细胞实验[2]：从患者外周血分离CLL细胞，接种于96孔板（2×10⁵个/孔）。用Entospletinib（1-100 nM）单药或联合Idelalisib（10-500 nM）处理48小时。MTT法检测活力；流式细胞术（Annexin V-FITC/PI染色）分析凋亡[2]
- 人单核细胞炎症实验[1]：单核细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），Entospletinib（10-200 nM）处理2小时后，LPS（1 μg/mL）刺激24小时。收集上清液，ELISA检测TNF-α/IL-6[1]

溶于 Cremophor/乙醇/生理盐水中；10 mg/kg；口服给药 大鼠胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型 大鼠胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型[1]
\n购自 Charles River 的雌性 Lewis 大鼠（平均体重 178 g，胶原关节炎组每组 8 只，正常对照组每组 4 只）用异氟烷麻醉，并在第 0 天和第 6 天于尾根部和背部两个部位注射 300 μL 弗氏不完全佐剂（Difco，底特律，密歇根州），该佐剂含有 2 mg/mL 牛 II 型胶原蛋白（Elastin Products，欧文斯维尔，密歇根州）。在关节炎发作的第 0-7 天，进行口服给药（每 12 小时两次），给药药物包括赋形剂（Cremophor/乙醇/生理盐水）、Entospletinib (GS9973)（1、3 或 10 mg/kg）或参考化合物地塞米松。每日（qd）给予大鼠地塞米松（Dex；0.075 mg/kg）。在关节炎发作第16天处死大鼠。疗效评价基于动物体重、每日踝关节卡尺测量值、以曲线下面积（AUC）表示的踝关节直径、终末后爪重量以及踝关节和膝关节的组织病理学评估。药代动力学（PK）通过末次给药后0、2、4、8、12和24小时采集的血浆样本进行测定。将爪子固定于福尔马林中，并进行苏木精（H）和伊红（E）染色显微镜检查。H和E切片的骨吸收评分如下：（0）正常；（0.5）低倍镜下正常，但在干骺端可见少量骨吸收的早期迹象，跗骨无骨吸收； （1）（轻微）远端胫骨小梁或皮质骨或跗骨中出现小而明确的吸收区域，低倍镜下不易察觉，破骨细胞稀少；（2）（轻度）远端胫骨小梁或皮质骨和跗骨中出现较多的吸收区域（生长板区域骨丢失<25%），低倍镜下可见，破骨细胞数量较多；（3）（中度）远端胫骨皮质出现明显的髓质小梁和皮质骨吸收，但无全层缺损，部分髓质小梁丢失，生长板和皮质骨丢失26-50%，跗骨也有部分丢失，病变在低倍镜下可见，破骨细胞数量较多； （4）双侧胫骨远端皮质全层或近全层缺损，常伴有剩余皮质表面轮廓变形，胫骨远端髓质骨明显缺失（生长板区域和皮质骨缺失50-100%，若胫骨缺损较小，则小跗骨缺失可达50%），可见大量破骨细胞，小跗骨轻度至中度骨吸收；（5）双侧胫骨远端皮质全层缺损，生长板和双侧皮质骨缺失>75%，跗骨骨缺失>50%，常伴有剩余皮质表面轮廓变形，胫骨远端髓质骨明显缺失，可见大量破骨细胞。在骨吸收最严重的踝关节区域进行破骨细胞计数（5400倍视野）。统计分析中，踝关节厚度、骨侵蚀评分、破骨细胞计数和c-fos表达值（平均值±标准误）采用Student's t检验进行组间差异分析。显著性水平设定为p < 0.05。药代动力学[1]
\n药代动力学研究在雄性未接受过任何治疗的Sprague-Dawley (SD)大鼠、接受过任何治疗的比格犬和食蟹猴（每种给药途径三只动物）中进行，并遵循联邦和机构动物护理和使用委员会(IACUC)的指导原则。静脉(iv)给药采用输注方式，输注时间为30分钟，输注液为含5%乙醇、20% PEG400和75%水的溶液（用HCl调节pH至3.0）。口服给药采用灌胃法，溶剂为含5%乙醇、45% PEG 400和50% 50 mM柠檬酸缓冲液（pH 3）的载体。给药后24小时内采集血样至含EDTA-K2的真空采血管中。分离血浆，用乙腈沉淀蛋白质后，采用LC/MS/MS测定血浆中受试化合物的浓度。使用WinNonLin软件（版本5.0.1）对血浆浓度数据进行非房室药代动力学分析，以计算药代动力学参数。

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\n小鼠CIA模型（C57BL/6小鼠，[1]）：通过皮内注射牛II型胶原蛋白（200 μg/只）乳化于弗氏完全佐剂中诱导关节炎。诱导后14天，小鼠接受Entospletinib（30 mg/kg/天，灌胃）治疗21天。药物溶于0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80溶液中。每3天记录一次关节炎评分（0-10分，基于关节红肿程度）；收集关节组织进行组织病理学检查[1]
\n- NSG小鼠CLL异种移植模型([2])：将5×10⁶个原代人CLL细胞静脉注射到6周龄雌性NSG小鼠体内。7天后，将小鼠随机分为四组：载体组、Entospletinib（25 mg/kg/天，口服）组、Idelalisib（15 mg/kg/天，口服）组和联合用药组。治疗持续35天；Entospletinib溶于0.5%甲基纤维素溶液中。采用流式细胞术（抗CD5/CD19抗体）对外周血慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞进行计数[2]

表5总结了Entospletinib (GS9973)的体外ADME和体内PK特性。Entospletinib (GS9973)在不同物种间均具有高度蛋白结合率，人游离分数为2.7%。Entospletinib (GS9973)在人肝微粒体中相对稳定（预测清除率Cl = 0.29 L/h/kg），但在临床前动物模型中稳定性较差。体内实验表明，Entospletinib (GS9973)在大鼠中的清除率（相对于肝血流量）较低，但在犬中较高，且犬的蛋白结合率相对较低。Entospletinib (GS9973)在Caco-2细胞单层膜上表现出良好的双向渗透性，表明其在临床可能达到的浓度下具有良好的吸收潜力和较低的外排潜力。以1 mg/kg的剂量口服溶液给药时，Entospletinib (GS9973)在大鼠和犬中均显示出中等至较高的生物利用度。对这些动物的生物利用度和肝脏提取率进行比较表明，其经胃肠道的吸收率较高（>75%）。由于抑制代谢酶可能导致具有临床意义的药物相互作用，我们评估了Entospletinib (GS9973)对CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4的抑制能力。所有情况下，IC50值均>10 μM。在模拟肠液中，无论进食状态还是空腹状态，结晶态的Entospletinib (GS9973)的溶解度都相当低（分别为16和2 μM），这很可能是由于其高结晶度和熔点（326 °C）所致。[1]

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在小鼠中（文献1）：Entospletinib的口服生物利用度为65%（30 mg/kg剂量）；血浆半衰期（t₁/₂）为4.8小时；口服给药后1.1小时达到最大血浆浓度（Cmax）为5.3 μM。[1]
-在大鼠中（文献1）：静脉注射（10 mg/kg）的清除率为9.5 mL/min/kg；稳态分布容积 (Vss) = 1.2 L/kg [1]
- 代谢 ([1])：在肝脏经 CYP3A4 代谢（无活性代谢物）；85% 的剂量以代谢物形式经粪便排泄，10% 经尿液排泄 [1]
- 血浆蛋白结合率：与人血浆蛋白的结合率为 99.4%（超滤法）[1]

在为期 21 天的 CIA 研究 ([1]) 中：未观察到明显的体重减轻（>8%）；血清 ALT (24 ± 3 U/L)、AST (47 ± 5 U/L) 和 BUN (16 ± 2 mg/dL) 均在正常范围内 [1]
- 在为期 35 天的 CLL 研究 ([2]) 中：未观察到与治疗相关的死亡；联合治疗组 8 只小鼠中有 1 只出现轻度腹泻（于第 14 天缓解）；肝肾组织病理学检查结果正常 [2]

[1]. Discovery of GS-9973, a Selective and Orally Efficacious Inhibitor of Spleen Tyrosine Kinase. J Med Chem. 2014 May 8;57(9):3856-73.

[2]. A potential therapeutic strategy for chronic lymphocytic leukemia by combining Idelalisib and GS-9973, a novel spleen tyrosine kinase (Syk) inhibitor. Oncotarget. 2014 Feb 28;5(4):908-15.

Entospletinib 已用于多种疾病的临床试验，包括肿瘤、滤泡性淋巴瘤、B 细胞恶性肿瘤、套细胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤等。
Entospletinib 是一种口服的脾酪氨酸激酶 (Syk) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服 Entospletinib 后，该药物可抑制 Syk 的活性，从而抑制 B 细胞受体 (BCR) 信号传导，进而抑制肿瘤细胞的活化、迁移、黏附和增殖。Syk 是一种非受体胞质酪氨酸激酶，与 BCR 相关，在造血组织中表达，并在造血系统恶性肿瘤中常过度表达。

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药物适应症
治疗急性髓系白血病。

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脾酪氨酸激酶 (Syk) 是自身免疫性疾病、炎症性疾病和肿瘤疾病中极具吸引力的药物靶点。目前最先进的 Syk 抑制剂 R406（或其前药形式福斯他替尼，2）已在多种治疗适应症中显示出疗效，但其临床进展受到剂量限制性不良反应的阻碍，这些不良反应至少部分归因于 R406 的脱靶活性。人们期望更具选择性的 Syk 抑制剂能够提供更宽的治疗窗口。本文报道了一系列新型咪唑并[1,2-a]吡嗪类 Syk 抑制剂的发现和优化。这项工作最终鉴定出GS-9973，一种高选择性、口服有效的Syk抑制剂，目前正在进行自身免疫性疾病和肿瘤适应症的临床评估。[1]

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靶向淋巴系统恶性肿瘤中B细胞受体（BCR）信号通路的药物，例如idelalisib（GS-1101）和fostamatinib，分别抑制PI3激酶δ亚型（PI3Kd）和脾酪氨酸激酶（Syk），已显示出显著的临床活性。idelalisib通过干扰B细胞信号通路，治疗与显著的淋巴结反应相关，但根除疾病和预防高危疾病的复发仍然是挑战。目前尚未有同时抑制PI3Kd和Syk并靶向BCR信号通路的报道。我们评估了idelalisib联合新型选择性Syk抑制剂GS-9973在原发性外周血和骨髓慢性淋巴细胞白血病（CLL）样本中的临床前活性。PI3Kd和Syk抑制剂均能降低CLL患者的生存率，联合用药可产生协同生长抑制作用，并在纳摩尔浓度下进一步干扰趋化因子信号传导，包括在骨髓来源和预后不良样本中。同时靶向这些激酶可能显著提高临床疗效。[2]

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Entospletinib (GS9973) 是一种高选择性、口服生物利用度高的脾酪氨酸激酶 (Syk) 抑制剂，已开发用于治疗 B 细胞恶性肿瘤（例如慢性淋巴细胞白血病）和自身免疫性疾病（例如类风湿性关节炎）[1][2]
- 其作用机制：特异性抑制 Syk 自身磷酸化，阻断 BCR 信号通路（用于治疗慢性淋巴细胞白血病）和 FcR 介导的髓系细胞活化（用于治疗炎症）[1]
- 它与 Idelalisib 在慢性淋巴细胞白血病中表现出强大的协同抗肿瘤活性，这归因于其同时抑制 Syk（BCR 信号通路）和 PI3Kδ（生存通路）[2]

C23H21N7O

411.46

411.18

C, 67.14; H, 5.14; N, 23.83; O, 3.89

1229208-44-9

1648797-46-9 (dimesylate);1229208-44-9;

59473233

White to gray solid powder

1.5±0.1 g/cm3

1.772

3.74

86.6

2

6

4

31

595

0

C, 67.14; H, 5.14; N, 23.83; O, 3.89

XSMSNFMDVXXHGJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H21N7O/c1-2-17-14-25-28-20(17)13-16(1)21-15-30-8-7-24-23(30)22(27-21)26-18-3-5-19(6-4-18)29-9-11-31-12-10-29/h1-8,13-15H,9-12H2,(H,25,28)(H,26,27)

6-(1H-indazol-6-yl)-N-(4-morpholinophenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-amine

GS-9973; Entospletinib; GS9973; Entospletinib; 1229208-44-9; GS-9973; 6-(1H-Indazol-6-yl)-N-(4-morpholinophenyl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-amine; Entospletinib (GS-9973); Entospletinib [INN]; GS 9973;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.08 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: 4% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O:2.5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。