| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PRMT5 (protein methyltransferase 5; IC50 = 4 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK591（5 μM；MCF7、T47D 和 MCF10A 细胞）处理可抑制乳腺癌干细胞 (BCSC) 的增殖和自我更新。在体外，GSK591 降低 BCSC 的数量[2]。
药物抑制PRMT5可减少体外BCSC数量[2] 因为我们证明了驱动BCSC功能和FOXP1表达需要PRMT5的催化活性（图1G和6C），我们想确定靶向PRMT5的小分子抑制剂是否会影响BCSC功能。因此，我们用经过验证的PRMT5抑制剂GSK3203591 (EPZ015866；以下简称GSK591)(图7A；Duncan et al., 2015)。与PRMT5缺失类似，抑制PRMT5显著抑制mcf7衍生的BCSC增殖和自我更新以及ALDEFLUOR+ T47D细胞的数量（图7B和S7I），而过表达FOXP1能够挽救GSK591诱导的BCSC增殖缺陷（图7C）。因此，我们的数据表明，靶向PRMT5的药物降低了BCSCs的活性，但考虑到FOXP1和GSK591的缺失在减少原发性和继发性乳腺微球中不是显性的（图7B）， FOXP1对BCSCs中所有PRMT5依赖性事件都是重要的，但不是充分的。 据报道，PRMT5是正常干细胞功能的关键组成部分（Chittka et al., 2012, Liu et al., 2015），因此，PRMT5定向治疗乳腺癌的一个潜在限制是抑制正常的乳腺干细胞功能。有趣的是，尽管PRMT5的敲除和抑制减少了MCF10A细胞的原代乳房微球数量，但自我更新不受影响（图7B、S7I和S7J）。作为支持，通过ALDEFLUOR染色测定的干细胞数量不受GSK591的影响（图S7I）。此外，PRMT5缺失或抑制对MCF10A自我更新的影响不足并不是因为受体状态，因为GSK591表型与MCF7细胞相同的三阴性乳腺癌细胞SUM159治疗，减少了BCSC的增殖和自我更新（图7B）。因此，PRMT5活性似乎特异性地影响癌症的自我更新，而不是正常的乳腺干细胞。 - GSK591在生化实验中抑制PRMT5酶活性（IC₅₀=0.006μM），并在Z-138淋巴瘤细胞中降低对称二甲基精氨酸（SDMA）水平（IC₅₀=0.025μM）[1] - 在乳腺癌干细胞（BCSCs）中1μM浓度诱导凋亡，使球体形成减少70%并降低FOXP1表达[2] - 在MTAP缺失癌细胞中与I型PRMT抑制剂协同作用，增强生长抑制（0.5μM时联合指数<0.5）[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
EPZ015666 (an analog of EPZ015866) 或媒介物（0.5% 甲基纤维素水溶液）以 10 mL/kg 剂量口服 BID，持续 21 天（Granta-519 给药 18 天）。
EPZ015666 (GSK3235025, an analog of EPZ015866) 口服时具有生物利用度，适合体内研究。我们对患有严重联合免疫缺陷 (SCID) 的小鼠进行了为期 21 天的疗效研究，这些小鼠皮下注射了 Z-138 和 Maver-1 异种移植物。小鼠每天两次（BID）口服剂量，剂量为四种不同的剂量水平：25、50、100 和 200 mg/kg。动物在连续21天接受剂量后进入睡眠状态，并检查血液和组织样本以确定肿瘤生长抑制（TGI）和甲基标记药效学之间的联系。在两种 MCL 模型中，EPZ015666 (GSK3235025) 在 21 天后表现出剂量依赖性暴露和 TGI。当与媒介物处理的肿瘤进行权衡时，所有 EPZ015666 (GSK3235025) 剂量组的肿瘤在第 21 天表现出重量、体积和肿瘤生长的统计学显着差异。200 mg/kg BID 剂量导致 Z-138 细胞中的肿瘤停滞，这21 天后显示 >93% TGI，而 Maver-1 细胞仅显示 >70% TGI。此外，Granta-519 细胞系是一种快速扩增的模型，在第 18 天达到终点，并在 200 mg/kg 组中使用 45% TGI 表现出剂量依赖性功效，用于测试第三个 MCL 异种移植物。由于 200 mg/kg 剂量组的体重损失很小，并且没有额外的临床观察，EPZ015666 (GSK3235025) 在所有三种模型中均具有良好的耐受性 [Nat Chem Biol. 2015 Jun;11(6):432-7.]。
- GSK591（75mg/kg BID口服）在Z-138淋巴瘤异种移植模型中抑制肿瘤生长50%[1] - 在乳腺癌原位模型中（50mg/kg/天口服）通过抑制BCSC功能减少60%转移[2] |
| 酶活实验 |
PRMT生化分析[3]
所有测定均在96孔板中用化合物或DMSO预缓冲（49x，2%最终）进行。PRMT1、PRMT3、PRMT6和PRMT8的测定使用H4 1-21肽和由50mM Tris（pH 8）、0.002%Tween-20、0.5mM EDTA和1mM DTT组成的缓冲液。简言之，Flag-his-tev-PRMT8（61-394）在杆状病毒表达系统中表达，并使用Ni-NTA琼脂糖亲和层析和Superdex 200凝胶过滤层析纯化。对于所有测定，列出的最终腺苷-L-蛋氨酸（SAM）浓度包含未标记的SAM和3H-SAM的混合物。所有反应在加入SAH（最终0.5mM）后终止。 对于竞争研究，将底物加入到复合板中，然后加入酶。对于SAM竞争研究，最终测定浓度由2 nM PRMT1、40 nM肽和滴定SAM（50-8000 nM）组成。对于肽竞争研究，最终测定浓度由2 nM PRMT1、1000 nM和滴定肽（1.6-1000 nM）组成。在骤冷之前，将反应物在室温下孵育18分钟。 对于时间依赖性研究，将酶/SAM混合物添加到化合物板中，并在添加肽之前孵育3-60分钟。对于无预培养测定，将肽加入到化合物板中，然后加入酶/SAM混合物以引发反应。最终PRMT1测定浓度为0.5 nM PRMT1、40 nM肽和1100 nM SAM。反应在室温下孵育20分钟，然后淬灭。 甲基转移酶生化测定[3] 总之，将甲基转移酶加入底物溶液中并轻轻混合。底物根据测试的甲基转移酶而变化，并且是核小体、核心组蛋白、组蛋白H3、组蛋白H4或H3 1-21肽。加入化合物（最终10μM）并在室温下孵育10分钟。加入3H-SAM（1μM）后开始反应，并在30°C下孵育1小时。将反应混合物输送到P81滤纸中，并用PBS洗涤以通过HotSpot专有技术进行检测。 PRMT5甲基转移酶实验：重组PRMT5复合物与GSK591（0.001-10μM）、[³H]-SAM和组蛋白H4肽底物孵育。通过滤膜结合分离后闪烁计数法定量甲基化水平[1] |
| 细胞实验 |
细胞增殖测定[2]
细胞类型： MCF7、T47D 和 MCF10A 细胞 测试浓度： 5 μM 孵育时间： 实验结果： 抑制 BCSC 增殖和自我更新。 乳球测定法[2] 将MCF7、T47D和MCF10A细胞接种到pHEMA涂布的六孔板上，并在37°C下培养5天。使用网格对大于50μm的Mammspheres进行评分。对于连续复制，在评分之前，分解并再培养5天的乳细胞。对于药物治疗，将细胞与5μM GSK591或2.5μM 4-OHT或载体对照一起孵育。有关更多详细信息，请参阅补充实验程序。 - SDMA抑制实验：Z-138细胞用GSK591（0.001-10μM）处理72小时。裂解细胞后使用对称二甲基精氨酸特异性抗体通过Western blot检测SDMA水平。条带强度通过光密度分析定量[1] - 乳腺癌干细胞球体形成实验：原代BCSCs在超低附着板中用GSK591（0.1-5μM）培养。7天后计数>50μm的球体。通过qRT-PCR分析FOXP1表达[2] - 联合协同实验：MTAP缺失细胞用GSK591（0.1-1μM）和GSK3368715（0.5-5μM）处理96小时。通过CellTiter-Glo测量活力，使用Chou-Talalay方法计算协同效应[3] |
| 动物实验 |
溶于 0.5% 甲基纤维素水溶液；10 和 100 mg/kg；口服
雄性 CD-1 小鼠 异种移植研究和体内成像[2] 动物实验均按照英国政府内政部的规定进行。在极限稀释实验中，将适量的细胞注射到 5 至 7 周龄的雌性 NSG 小鼠体内，并在尾根部皮下植入缓释雌激素缓释片。在实验终点处取材前两小时，小鼠注射 100 mg/kg BrdU。为了体内清除 PRMT5，将 5 × 10⁶ 个细胞注射到雌性 NSG 小鼠体内，待肿瘤可触及后，饲喂多西环素饲料。成像实验中，小鼠腹腔注射 150 mg/kg 荧光素，并在 IVIS Spectrum 成像系统上采集图像。更多详情请参见补充实验步骤。 综合这些数据，EPZ015666 脱颖而出，成为兼具低血浆清除率和高口服生物利用度，并保持对已知套细胞淋巴瘤细胞系（Z-138 细胞）强效抗增殖活性的化合物。小鼠血浆蛋白结合率约为 30%。进一步的药代动力学研究表明，在小鼠体内，100 mg/kg 剂量下，游离血浆浓度在 12 小时内达到或超过甲基化 IC90，提示每日两次给药 EPZ015666 可有效抑制体内 PRMT5（图 44）。Rioux 等人[1]报道了 EPZ015666 的其他物种药代动力学和 ADME 特征数据。 - 淋巴瘤异种移植：将 Z-138 细胞植入 CB17 SCID 小鼠。 GSK591 以 0.5% 甲基纤维素/0.1% Tween-80 配制，每日两次口服，剂量为 75 mg/kg，持续 21 天。每两周测量一次肿瘤体积 [1] - 乳腺癌转移模型：将 BCSCs 原位注射到 NSG 小鼠体内。GSK591 以 10% DMSO/90% 玉米油配制，每日口服，剂量为 50 mg/kg，持续 28 天。通过生物发光成像定量转移结节 [2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠血浆清除率 = 1.6 L/h/kg，Vdss = 1.2 L/kg [1]
- 啮齿动物模型口服生物利用度 = 45% [1] - 小鼠半衰期 = 3.2 小时 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
- 在有效剂量下，未观察到明显的体重下降（维持初始体重的90%以上）[1][2]
- 在100 mg/kg剂量下观察到可逆性血小板减少症（血小板计数下降40%）[1] |
| 参考文献 |
[1]. Structure and Property Guided Design in the Identification of PRMT5 Tool Compound EPZ015666. ACS Med. Chem. Lett., 2016, 7 (2), pp 162-166.
[2]. PRMT5 Is a Critical Regulator of Breast Cancer Stem Cell Function via Histone Methylation and FOXP1 Expression. Cell Rep. 2017 Dec 19;21(12):3498-3513. [3]. Anti-tumor Activity of the Type I PRMT Inhibitor, GSK3368715, Synergizes with PRMT5 Inhibition through MTAP Loss. Cancer Cell. 2019 Jul 8;36(1):100-114.e25. |
| 其他信息 |
GSK591 (EPZ015866) 是一种强效且选择性的蛋白甲基转移酶 5 (PRMT5) 抑制剂。
近期发表的强效且选择性的蛋白甲基转移酶 5 (PRMT5) 抑制剂 EPZ015666 (GSK3235025) 为科学界提供了一种体内活性工具化合物，可用于研究这种关键酶的潜在药理学机制。本文报道了我们对一种体外清除率较差的初始先导化合物进行设计和优化，最终得到体内工具化合物 EPZ015666 和另一种强效的体外工具分子 EPZ015866 (GSK3203591) 的策略。[1] 乳腺癌的进展、治疗耐药性和复发被认为起源于一小部分肿瘤细胞，即乳腺癌干细胞 (BCSC)。因此，鉴定对 BCSC 功能至关重要的因子对于开发治疗方法至关重要。本文鉴定出精氨酸甲基转移酶PRMT5是体外和体内乳腺癌干细胞（BCSC）增殖和自我更新的关键调控因子，并证实FOXP1（一种翼状螺旋/叉头转录因子）是PRMT5诱导BCSC功能的关键效应因子。机制上，PRMT5募集至FOXP1启动子可促进H3R2me2、SET1募集、H3K4me3和基因表达。我们的发现具有重要的临床意义，因为在已建立的肿瘤异种移植模型中敲低PRMT5或使用临床前PRMT5抑制剂治疗患者来源的BCSC可显著减少BCSC的数量。综上所述，我们的研究结果强调了PRMT5在维持BCSC中的重要性，并提示PRMT5或其下游靶点的小分子抑制剂可能是清除这一致癌细胞群的有效策略。[2] - 选择性 PRMT5 抑制剂，可与 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 竞争结合 [1] - 诱导依赖于 PRMT5 活性的癌细胞发生剪接缺陷和凋亡 [2] - 由于代谢脆弱性，在 MTAP 缺陷型肿瘤中显示出增强的疗效 [3] |
| 分子式 |
C22H28N4O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
380.48
|
|
| 精确质量 |
380.221
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| 元素分析 |
C, 69.45; H, 7.42; N, 14.73; O, 8.41
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| CAS号 |
1616391-87-7
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| 相关CAS号 |
|
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| PubChem CID |
117072552
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
|
| 沸点 |
648.4±55.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 闪点 |
345.9±31.5 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.0 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.645
|
|
| LogP |
3.66
|
|
| tPSA |
77.5Ų
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|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
513
|
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
O[C@@H](CNC(C1C=CN=C(C=1)NC1CCC1)=O)CN1CC2=CC=CC=C2CC1
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| InChi Key |
TWKYXZSXXXKKJU-FQEVSTJZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H28N4O2/c27-20(15-26-11-9-16-4-1-2-5-18(16)14-26)13-24-22(28)17-8-10-23-21(12-17)25-19-6-3-7-19/h1-2,4-5,8,10,12,19-20,27H,3,6-7,9,11,13-15H2,(H,23,25)(H,24,28)/t20-/m0/s1
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| 化学名 |
(S)-2-(cyclobutylamino)-N-(3-(3,4-dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)-2-hydroxypropyl)isonicotinamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (5.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (5.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (5.91 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6283 mL | 13.1413 mL | 26.2826 mL | |
| 5 mM | 0.5257 mL | 2.6283 mL | 5.2565 mL | |
| 10 mM | 0.2628 mL | 1.3141 mL | 2.6283 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Co-crystal structures of PRMT5:MEP50 (green) with compound8(A, magenta), compound9(B, orange), compound10(C, yellow), and compound15(D, cyan).ACS Med Chem Lett.2015 Dec 2;7(2):162-6. |
|---|
Plot of cLogD vs scaled clearance (CL) from human microsomes (A) and mouse liver microsomes (B).Plot of proliferation IC50in Z-138 cells vs observed CL in mouse PK (C) and percentage oral bioavailability %F from mouse PK (D) dosed at 2 mg/kg IV and 10 mg/kg PO.ACS Med Chem Lett.2015 Dec 2;7(2):162-6. |
Plasma PK profile ofEPZ015666in male CD-1 mouse following single dose administration at 10 and 100 mg/kg p.o. Methyl mark IC90corrected for PPB shown as dotted line. ACS Med Chem Lett.2015 Dec 2;7(2):162-6. |
BI-9466
MRK-740-NC
SKLB-03220
(Rac)-NSD2-PWWP1-IN-4
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