| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 靶点 |
MNK1 (IC50 = 64 nM); MNK2 (IC50 = 86 nM)
ETC-206 (compound 48) is a potent and selective inhibitor of mitogen-activated protein kinase interacting kinases 1 and 2 (MNK1/2). It inhibits MNK1 and MNK2 enzymatic activity with IC50 values of 0.064 μM and 0.086 μM, respectively. [1] Tinodasertib targets MAP kinase-interacting kinases 1 and 2 (MNK1 and MNK2), which are serine/threonine kinases that phosphorylate eukaryotic translation initiation factor 4E (eIF4E). It acts as a selective ATP-competitive MNK1/2 inhibitor. Inhibition of MNK1/2 prevents eIF4E phosphorylation, which is involved in the regulation of protein synthesis and cell proliferation. The compound has IC50s of 64 nM for MNK1 and 86 nM for MNK2. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 HeLa 细胞系中，tinodasertib (ETC-206) 以 321 nM 的 IC50 值抑制 eIF4E 磷酸化。采用 CellTiter-Glo 细胞活力检测法在体外评估了 ETC-206 对 25 种血细胞系（包括过表达心血管 eIF4E 的 K562 细胞系 (K562 o/e eIF4E)）的抗应激作用。这些细胞系包括 Ramos.2G6.4C10、AHH-1、MC 116、P3HR-1、DOHH2、MPC-11、SU-DHL-6、GK-5 和 K562 o/e eIF4E 细胞 [1]。
在基于 HeLa 细胞的检测中，化合物 48 抑制了 eIF4E (Ser209) 的磷酸化，eIF4E 是 MNK1/2 的直接底物，IC50 值为 0.321 μM。[1] 化合物 48 在 1 μM 的浓度下针对 104 种激酶进行了筛选。它表现出优异的选择性，仅对两种激酶（MEK 和 MNK2）的抑制率超过 65%，并且仅对 MNK2 的抑制率超过 90%。[1] 使用 CellTiter-Glo 细胞活力检测法评估了化合物 48 对 25 种血液肿瘤细胞系的抗增殖活性。IC50 值通常在微摩尔范围内，与已发表的 MNK 抑制剂数据一致。 [1] 化合物48与达沙替尼联用时，可抑制急变期慢性粒细胞白血病患者的白血病干细胞形成集落的能力（数据将在其他地方发表）。[1] 在Caco-2细胞渗透性试验中评估了化合物48的渗透性，结果显示AB渗透率（Papp）为30.50 × 10⁻⁶ cm/s，外排比为1.42，表明其具有良好的渗透性和低外排。[1] 体外实验表明，替诺达替尼可有效抑制MNK1和MNK2激酶活性，IC50值分别为64 nM和86 nM。它还能抑制细胞内eIF4E的磷酸化。替诺达替尼在体外可阻止急变期慢性粒细胞白血病干细胞的自我更新。该化合物通过调节蛋白质合成和细胞增殖，对多种癌细胞系表现出抗增殖活性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
接下来，我们利用K562 e/o eIF4E小鼠异种移植模型评估了ETC-206的抗肿瘤作用。在研究期间，我们分别以25、50或100 mg/kg的剂量单药或联合2.5 mg/kg的达沙替尼，对小鼠进行局部给药。结果显示，2.5 mg/kg的达沙替尼可抑制88%的肿瘤生长（TGI）。相反，在最高剂量100 mg/kg下，ETC-206仅达到最大TGI的23%，与未治疗组相当，且未抑制肿瘤生长。更重要的是，在25、50和100 mg/kg剂量组中，8只小鼠中有2只、5只以及8只小鼠在ETC-206联合2.5 mg/kg达沙替尼治疗组中均未出现肿瘤消退。肿瘤生长抑制作用呈剂量依赖性增强。体重按此顺序增加。在所有测试剂量下，达沙替尼和ETC-206联合用药均能抑制肿瘤生长；未观察到体重减轻。在同基因小鼠异种移植模型中，达沙替尼和ETC-206联合用药以及MNK1/2和BCR-ABL1双重靶向治疗均能抑制肿瘤生长。ETC-206的末端消除半衰期受调控，小鼠口服5 mg/kg的半衰期为1.77小时，静脉注射1 mg/kg的半衰期为1.7小时[1]。在K562/eIF4E小鼠慢性粒细胞白血病异种移植模型中，化合物48作为单一药物，每日口服一次，连续14天，剂量分别为25、50和100 mg/kg，显示出极低的抗肿瘤活性，最高剂量组的肿瘤生长抑制率最高为23%。[1] 当与达沙替尼（2.5 mg/kg，用药5天/停药2天，共两个疗程）联合使用时，化合物48以剂量依赖的方式增强了达沙替尼的抗肿瘤活性。联合用药组的肿瘤完全消退：25 mg/kg组8只小鼠中有2只，50 mg/kg组8只小鼠中有5只，100 mg/kg组8只小鼠全部消退。 [1]
对单次注射100 mg/kg化合物48和2.5 mg/kg达沙替尼的小鼠肿瘤样本进行Western blot生物标志物分析显示，给药后1至8小时内磷酸化eIF4E水平显著降低，给药后4至8小时内磷酸化CRKL（BCR-ABL1底物）水平显著降低。这证实了MNK1/2和BCR-ABL1激酶在体内均受到抑制。[1] 在最大耐受剂量研究中，连续7天每日口服高达200 mg/kg的化合物48，在14天的观察期内未观察到体重减轻和临床不良反应。[1] 在临床前模型中，Tinodasertib已显示出抗肿瘤活性。当与达沙替尼联合使用时，Tinodasertib 可增强达沙替尼在体内的抗肿瘤活性。目前，Tinodasertib 正在进行 II 期临床试验，以评估其安全性、药代动力学和治疗潜力，尤其是在转移性结直肠癌等癌症的联合治疗方面。 |
| 酶活实验 |
MNK1/2 酶抑制试验：通过生化试验测试化合物对 MNK1 和 MNK2 的抑制活性。试验在 Km 浓度（MNK1 为 1.2 mM，MNK2 为 250 μM）下进行。IC50 值采用 GraphPad Prism 软件进行非线性回归分析确定，报告值至少为两次实验的平均值。[1]
替诺达替尼的体外激酶抑制试验包括测量其对 MNK1 和 MNK2 激酶活性的抑制作用。将重组 MNK1 或 MNK2 酶与不同浓度的替诺达替尼、ATP 和肽底物（例如 eIF4E 衍生肽）孵育。使用放射性或荧光检测方法测量磷酸化程度。IC50 值由剂量反应曲线计算得出。 Tinodasertib 对 MNK1 的 IC50 为 64 nM，对 MNK2 的 IC50 为 86 nM。 |
| 细胞实验 |
使用 CellTiter-Glo 细胞活力检测法在体外测试了 ETC-206 对 25 种血液肿瘤细胞系（包括过表达 eIF4E 的 K562 细胞系 (K562 o/e eIF4E)）的细胞增殖抑制能力。通常，IC50 值在微摩尔范围内[1]。
HeLa 细胞中 eIF4E 磷酸化抑制试验：使用 HeLa 细胞中的夹心免疫测定法评估化合物抑制 MNK1/2 介导的 eIF4E Ser209 位点磷酸化的能力。化合物以剂量依赖的方式进行测试，每个浓度重复两次，每次测试使用 3 倍系列稀释的 8 个浓度点。使用 GraphPad Prism 软件通过非线性回归确定 IC50 值，报告的值为至少两次实验的平均值。 [1] 抗增殖活性测定：使用 CellTiter-Glo 细胞活力检测试剂盒，在体外评估化合物 48 对 25 种血液肿瘤细胞系（包括过表达 eIF4E 的 K562 细胞系）的抗增殖作用。[1] Caco-2 细胞渗透性测定：将 Caco-2 细胞以 1 × 10⁵ 个细胞/孔的密度接种于 24 孔板中，并在培养基中培养 21 天。在有无 P-gp 抑制剂的情况下，以 10 μM 的浓度测定化合物 48 从顶端到基底侧的渗透性。采用 LC-MS/MS 分析样品，并计算表观渗透系数和外排比。 [1] 替诺达替尼的体外细胞试验包括用不同浓度的化合物处理癌细胞系。通过蛋白质印迹法检测eIF4E磷酸化水平来评估MNK1/2抑制情况。使用MTT或克隆形成试验评估细胞增殖情况。评估细胞活力和凋亡情况。评估该化合物对MNK介导的信号通路和细胞增殖的影响。 |
| 动物实验 |
小鼠：选取6-8周龄的CD-1雌性小鼠称重，选择体重为24±2 g的小鼠进行给药。每组随机选取三只小鼠。ETC-206以1 mg/kg的剂量经尾静脉单次注射或以5 mg/kg的剂量经灌胃单次给药。静脉注射（iv）和口服（po）的注射体积分别为4 mL/kg和8 mL/kg[1]。
最大耐受剂量研究：将7-9周龄的NOD-SCID雌性小鼠随机分为三组。连续7天，每天灌胃给予小鼠溶剂或10、50、100或200 mg/kg的化合物48单次剂量。治疗结束后，观察小鼠7天，以监测其延迟出现的临床异常。在为期14天的研究结束后，使用二氧化碳气体处死小鼠。[1] 体内抗肿瘤疗效研究：将K562-eIF4E细胞（10⁷个细胞/只小鼠）皮下植入雌性SCID小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到75至196 mm³时，将小鼠随机分为8组。将化合物48溶解于0.5% MC/0.1% TW80溶液中，并以25、50或100 mg/kg的剂量每日口服一次，连续14天。达沙替尼（2.5 mg/kg）以5天用药/2天停药的方案口服给药，共两个周期。联合治疗组中，小鼠先接受达沙替尼治疗，1小时后接受化合物48治疗，给药方案与上述相同。每周两次使用数字游标卡尺监测肿瘤体积，并计算公式为（宽度² × 长度）/2。在第14天计算肿瘤生长抑制率和T/C比值。[1] 体内研究制剂：口服给药时，将化合物48配制于含0.5%甲基纤维素和0.1% Tween 80的无菌Milli-Q水中。静脉给药时，将化合物48配制于10% NMP、40% PEG300和50%无菌MQ水，或10% Cremophor、10% DMA和80%无菌MQ水中。[1] 药代动力学研究：雄性CD-1小鼠（每种化合物n=15，每个时间点3只）分别接受静脉注射1 mg/kg或口服5 mg/kg的化合物48。通过心脏穿刺在不同时间点采集血样，并通过离心获得血浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析化合物浓度，并使用WinNonlin软件计算药代动力学参数。[1] 蛋白质印迹生物标志物研究：荷K562-eIF4E肿瘤的CB17 SCID小鼠单次口服100 mg/kg化合物48和2.5 mg/kg达沙替尼。分别于给药前、给药后1小时、4小时和8小时处死小鼠。切除肿瘤，速冻并匀浆。使用针对eIF4E、磷酸化eIF4E（S209）、CRKL和磷酸化CRKL的抗体，通过蛋白质印迹法分析裂解物。[1] Tinodasertib的体内动物实验通常使用人源肿瘤的小鼠异种移植模型。将荷瘤小鼠通过口服或腹腔注射途径给予不同剂量的Tinodasertib，可单独使用或与其他药物（如达沙替尼）联合使用。定期测量肿瘤体积。评估肿瘤组织中eIF4E的磷酸化及其下游信号通路。通过比较治疗组和对照组肿瘤生长延迟情况来评价该化合物的抗肿瘤疗效。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
Caco-2细胞渗透性：化合物48在Caco-2细胞渗透性试验中表现出较高的渗透性，Papp AB值为30.50 × 10⁻⁶ cm/s，外排比为1.42，表明其具有良好的吸收潜力和较低的外排。[1]
LogD：化合物48在pH 7.4时的分配系数为2.61。[1] 溶解度：化合物48的水溶性为55.4 μg/mL。[1] 微粒体稳定性：化合物48在多种动物的肝微粒体中均表现出良好的代谢稳定性。半衰期分别为：人（48分钟）、小鼠（56分钟）、大鼠（>60分钟）和犬（>60分钟）。 [1] CYP抑制：化合物48对CYP3A4和CYP2D6均无显著抑制作用（二者IC50均>20 μM）。[1] 血浆蛋白结合：化合物48在人（99.7%）和小鼠（84.2%）中均表现出较高的血浆蛋白结合率。[1] 小鼠药代动力学：静脉注射1 mg/kg后，化合物48的C0为2379 ng/mL，清除率为0.56 L/h/kg，半衰期为1.77 h。口服5 mg/kg后，其达峰时间为0.5 h，Cmax为2481 ng/mL，AUC0-t为15484 ng·h/mL，口服生物利用度为64%。 [1] 替诺达替尼的药代动力学 (PK) 特性已在临床前和临床研究中得到表征。该化合物的分子量为 408.45 (C25H20N4O2)。作为一种小分子激酶抑制剂，预计其具有良好的口服生物利用度和合理的组织分布。临床药理学研究已提供了包括半衰期、Cmax 和代谢途径在内的具体 PK 参数。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在一项针对健康小鼠的最大耐受剂量研究中，连续7天每日口服高达200 mg/kg剂量的化合物48，在14天的观察期内未观察到体重减轻和临床不良反应，表明其具有良好的安全性。[1]化合物48对CYP3A4或CYP2D6无显著抑制作用（IC50 > 20 μM），提示通过这些主要CYP酶发生药物相互作用的可能性较低。[1]Tinodasertib已在II期临床试验中评估其治疗癌症的疗效。作为一种激酶抑制剂，其潜在的不良反应可能包括与MNK1/2抑制相关的反应，例如对蛋白质合成和细胞增殖的影响。该化合物的安全性正在正在进行的临床试验中进行评估。完整的毒理学数据，包括急性毒性、重复给药毒性和遗传毒性研究，可从该化合物的临床开发项目中获取。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
替诺达替尼是一种选择性丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 相互作用蛋白激酶 (MNK) 1/2 型抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，替诺达替尼抑制真核起始因子 4E (eIF4E) 的 MNK1/2 依赖性磷酸化，从而干扰其在 mRNA 翻译中的作用。eIF4E 是一种癌蛋白，其磷酸化对于促进肿瘤细胞增殖和进展至关重要。MNK 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，与致癌转化和肿瘤进展密切相关。
替诺达替尼（CAS 编号：1464151-33-4）是一种选择性 ATP 竞争性 MNK1/2 抑制剂，也称为 ETC-206。其对 MNK1 的 IC50 值为 64 nM，对 MNK2 的 IC50 值为 86 nM。 Tinodasertib 可抑制 eIF4E 磷酸化，在体外阻止 BC-CML LSC 的自我更新，并在体内增强达沙替尼的抗肿瘤活性。该化合物目前正处于 II 期临床试验阶段，用于治疗包括转移性结直肠癌在内的多种癌症。 |
| 分子式 |
C25H20N4O2
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|---|---|
| 分子量 |
408.45
|
| 精确质量 |
408.16
|
| 元素分析 |
C, 73.51; H, 4.94; N, 13.72; O, 7.83
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| CAS号 |
1464151-33-4
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| 相关CAS号 |
1464151-33-4
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| PubChem CID |
71766360
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
3.9
|
| tPSA |
70.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
668
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(C2=CC=C(C(=O)N3CCOCC3)C=C2)=CN2C(C3C=CC(C#N)=CC=3)=CN=C2C=C1
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| InChi Key |
FWRFPHJSGLYXTD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H20N4O2/c26-15-18-1-3-20(4-2-18)23-16-27-24-10-9-22(17-29(23)24)19-5-7-21(8-6-19)25(30)28-11-13-31-14-12-28/h1-10,16-17H,11-14H2
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| 化学名 |
4-[6-[4-(morpholine-4-carbonyl)phenyl]imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl]benzonitrile
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| 别名 |
Tinodasertib; ETC-206; 4-(6-(4-(morpholine-4-carbonyl)phenyl)imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)benzonitrile; AUM001; ETC 206; ETC206
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~82 mg/mL (~200.8 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.24 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4483 mL | 12.2414 mL | 24.4828 mL | |
| 5 mM | 0.4897 mL | 2.4483 mL | 4.8966 mL | |
| 10 mM | 0.2448 mL | 1.2241 mL | 2.4483 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT03414450 | Withdrawn | Drug: ETC-1907206 Drug: dasatinib |
Ph+ Acute Lymphoblastic Leukemia (Ph+ALL) Ph- Acute Lymphoblastic Leukemia (Ph-ALL) |
EDDC (Experimental Drug Development Centre), A*STAR Research Entities |
April 25, 2018 | Phase 1 |
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