SIRT1

(S)-Selisistat 是一种 SIRT1 酶活性抑制剂（IC50，98 nM），是通过使用细菌中表达的人 SIRT1 进行高通量筛选发现的。 (S)-Selisistat 以浓度依赖性方式抑制 SIRT1，其 IC50 为 38 nM，与细菌中表达的 SIRT1 的活性相当。 (S)-Selisistat 在浓度高达 100 μM 时不会抑制 I/II 类 HDAC 活性，但对 SIRT2 (IC50, 19.6 μM) 或 SIRT3 (IC50, 48.7 μM) 的效果明显较差 [1]。 (S)-Selisistat 抑制 SIRT1 活性，而 SIRT1 mRNA 和蛋白质水平不受影响 [2]。

在 ob/ob 脓毒症小鼠中，(S)-Selisistat 消除了白藜芦醇 (RSV) 诱导的微血管炎症的缓解作用。最后，与脓毒症+媒介物组相比，脓毒症+RSV组ob/ob小鼠的7天存活率相当高[3]。

I类和II类HDAC荧光分析。[4]
在上述荧光分析中，使用含有I类和II类HDAC的HeLa细胞提取物和代表赖氨酸16乙酰化组蛋白H4残基12−16的H4-K16（Ac）底物，测量了I类和Ⅱ类HDAC脱乙酰酶活性。

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烟酰胺释放试验。[4]
使用代表赖氨酸382乙酰化残基368−386的p53肽底物在非荧光测定中测量SIRT1的活性。如前所述，该测定测量了[14C]烟酰胺从[羰基-14C]-NAD中的释放。 在添加浓度为52μM的未标记烟酰胺的情况下，使用上述测定法测量烟酰胺交换。添加的烟酰胺通过酶催化交换促进[14C]烟酰胺从标记的NAD中释放。在NAD释放[14C]烟酰胺后，未标记的烟酰胺与酶结合并转化为未标记的NAD
如上所述，在烟酰胺释放试验中测量NAD糖水解酶（NADase）酶活性。通过阴离子交换色谱法纯化猪脑中的粗NADase组分。每个测定孔含有0.5μg纯化酶和浓度为18.55μM（KM的70%）的NAD。

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微软稳定性。[4]
使用大鼠肝微粒体评估体外代谢稳定性。浓度为10μM的化合物在37°C下与大鼠肝微粒体（1 mg蛋白质/mL）一起孵育，并在0、5、15、30和60分钟后通过HPLC/MS进行定量。对照孵育不含微粒体。

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细胞色素P450抑制试验。[4]
如前所述，使用与荧光底物孵育的重组人同工酶3A4、2D6、1A2、2C9和2C19，在384孔微孔板格式中进行细胞色素P450测定。

In Vivo Pharmacokinetic Analysis. [4]
C57bl/6J mice were dosed intravenously (iv) or by oral gavage with 10 mg/kg of compound 1 (selisistat) or 35 in phosphate-buffered saline containing 4% DMSO and 10% cyclodextrin. Plasma was collected at 5, 15, 30, 60, and 90 min and 2, 4, 6, 8, and 24 h after dosing. Samples were analyzed by LCMS at Absorption Systems. Plasma samples were prepared by solid-phase extraction in a 96-well plate format. A 50-μL aliquot of plasma was combined with 300 μL of 1% phosphoric acid spiked with an internal standard (warfarin at 50 ng/mL). Plasma samples were transferred to a Waters Oasis HLB 30 mg extraction plate, washed with 5% methanol/water, and eluted with acetonitrile. The elute was evaporated to dryness under N2 at 37 °C and redissolved in 20% aqueous acetonitrile.

药代动力学结果[Br J Clin Pharmacol. 2015 Mar;79(3):477-91.]
男性受试者在空腹状态下单次口服5至600 mg的selisistat后，药物吸收迅速，但吸收速率似乎与剂量相关，selisistat的中位达峰时间（tmax）从5 mg剂量组的给药后1小时增加到600 mg剂量组的给药后4小时（图1）。selisistat的消除呈双相性，表观终末血浆半衰期似乎随剂量增加而延长（平均值范围从5 mg剂量组的1.6小时到600 mg剂量组的6.1小时）。在 5 至 300 mg 的剂量范围内，selisistat 的 AUC(0,∞) 呈剂量比例增加，在 300 至 600 mg 剂量水平之间，AUC(0,∞) 的增加幅度明显高于剂量水平，提示一种或多种清除机制在高剂量下接近饱和（图 2A 和表 2）。在所有男性受试者中，尿液中原形药物的排泄比例均较低，各剂量水平下，给药后 24 小时内的排泄量均低于 0.02%。多次给药后，尿液中原形药物的排泄比例仍然较低，但随时间推移而增加，这与观察到的血浆蓄积一致。食物对男性受试者单次服用 selisistat 的药代动力学影响甚微。高脂早餐后，药物吸收速率有所延迟，但吸收程度基本不变。
多次口服给药的司来司他（selisistat）药代动力学研究表明，tmax 和表观末端半衰期均无剂量或时间依赖性。在每个剂量水平下，受试者晨起谷浓度的司来司他血浆浓度显示，通常在第 4 天达到稳态。与单次给药结果一致，在每日一次 100 mg 至 300 mg 的剂量范围内，稳态 AUC(0,τ) 呈超比例增加（图 2B），而稳态 Cmax 则呈剂量比例增加。此外，每日两次 100 mg 剂量组的稳态 AUC(0,τ) 约为每日一次 100 mg 剂量组的两倍（表 3）。
在单次给药阶段，受试者间 AUC(0,∞) 和 Cmax 的变异系数 (%CV) 分别为 35%–71% 和 23%–46%。在所有剂量水平下，AUC(0,∞)和Cmax的合并受试者间变异性分别为56%和33%。在多次给药阶段，男性受试者的受试者间变异性（%CV）为17%～59%，女性为28%～68%。单次和多次给药后，女性的全身暴露量均高于男性。女性受试者的AUC(0,∞)、AUC(0,τ)和Cmax值分别比男性受试者高1.1倍、2.2～2.3倍和1.7～1.9倍。白种人和非白种人受试者的全身暴露量或药代动力学参数估计值无差异。

安全性 [Br J Clin Pharmacol. 2015 Mar;79(3):477-91.]
研究期间未报告严重不良事件，也无受试者因不良事件退出研究。健康男性受试者单次口服塞利司他（selisistat）剂量高达 600 mg 时，以及女性受试者单次口服塞利司他（selisistat）剂量为 300 mg 时，均被认为安全且耐受性良好（表 5）。健康男性受试者每日一次口服塞利司他（selisistat）剂量高达 300 mg，持续 7 天，以及健康女性受试者每日两次口服塞利司他（selisistat）剂量为 100 mg，持续 7 天，也被认为安全且耐受性良好。男性受试者中药物相关不良事件的发生率较低，且随着塞利司他（selisistat）剂量的增加，发生不良事件的受试者人数并未增加。不良事件的发生率未超过安慰剂组。与单次给药相比，多次服用塞利司他后未观察到不良事件报告数量的增加（表6）。男性和女性受试者报告的大多数不良事件为轻度，无需治疗即可缓解。研究期间仅发生一例严重不良事件。一名18岁男性受试者在服用150 mg塞利司他后1小时18分钟出现体位性晕厥。研究者认为该事件可能与研究药物相关。饮食状况对不良事件无影响。单次口服塞利司他后，最常见的药物相关不良事件是头痛，男性受试者发生率为12%，女性受试者为83%。多次口服塞利司他后，男性受试者不良事件发生率较低。在女性受试者中，6名受试者中有3名报告至少发生过一次胃肠道不适。总体而言，服用药物和安慰剂的女性不良事件报告频率均高于男性（表 5 和表 6）。临床实验室评估（包括肝功能检查、血液学参数、生命体征或心脏功能）未发现与剂量或治疗相关的趋势。具体而言，12 导联安全心电图记录的参数未观察到与治疗或剂量相关的趋势，且在任何剂量水平的塞利司他治疗下，心电图形态均未发现具有临床意义的异常。根据 12 导联安全心电图评估，没有受试者的 QTc 间期 >480 ms 或较基线增加 >60 ms。体格检查、姿势控制或神经系统检查均未发现具有临床意义的异常，摇摆平台测试表现也未发生变化。

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心电图参数的浓度-效应模型 [Br J Clin Pharmacol. 2015年3月；79(3):477-91.]
以受试者间ΔQTcF的标准差衡量的QTc数据变异性较低，单次递增剂量（SAD）和多次递增剂量（MAD）部分分别为5.3 ms和6.8 ms¹⁵。表7显示了第1部分（血浆浓度最高）中各剂量组QTcF相对于基线的变化。各时间点和剂量组的模式表明，selisistat对QTc间期没有剂量依赖性效应。在观察到的血浆浓度范围内，单次给予5 mg至600 mg selisistat后，未观察到ΔΔQTcF的显著浓度依赖性效应。具有截距的线性模型能够很好地拟合数据，估计的总体截距和斜率分别为 0.9 ms（90% CI −0.2, 2.0）和 −0.00026 ms/ng ml−1（90% CI −0.00063, 0.00010）（图 3A）。MAD 部分的数据分析也得到了类似的结果，截距为 2.8 ms（90% CI −0.16, 5.71），估计斜率为 −0.00011 ms/ng ml−1（90% CI −0.00087, 0.00066；图 3B）。使用该模型预测，单次服用 600 mg 后，在观察到的几何 Cmax 为 26.6 μm 时，ΔΔQTcF 效应为 −0.9 ms（90% CI −3.3, 1.4）。每日一次服用300 mg，连续7天后，观察到的Cmax水平为22.5 μM，可预测ΔΔQTcF效应约为2.8 ms（90% CI -0.1, 5.6）。对于血浆浓度超过平均Cmax水平（例如30 μM）的情况，使用同一模型可预测QTcF效应为3.7 ms（90% CI -0.1, 7.5）。在研究的单次给药（SAD）和多次给药（MAD）部分中，所有观察到的血浆浓度下，预测的ΔΔQTcF效应的90% CI上限均低于10 ms（图3A、B）。

[1]. Inhibition of SIRT1 catalytic activity increases p53 acetylation but does not alter cell survival following DNA damage. Mol Cell Biol. 2006 Jan;26(1):28-38.

[2]. SIRT1 is a regulator in high glucose-induced inflammatory response in RAW264.7 cells. PLoS One. 2015 Mar 20;10(3):e0120849.

[3]. Resveratrol attenuates microvascular inflammation in sepsis via SIRT-1-Induced modulation of adhesion molecules in ob/ob mice. Obesity (Silver Spring). 2015 Jun;23(6):1209-17.

[4]. Discovery of indoles as potent and selective inhibitors of the deacetylase SIRT1. J Med Chem. 2005 Dec 15;48(25):8045-54.

(S)-selisistat 是一种 6-氯-2,3,4,9-四氢-1H-咔唑-1-甲酰胺，具有 S 构型，是其活性对映体。它是一种 Sir1 抑制剂，是 (R)-selisistat 的对映体。

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人 SIRT1 是一种能够使 p53 肿瘤抑制蛋白去乙酰化的酶，并被认为可以调节 p53 依赖性功能，包括 DNA 损伤诱导的细胞死亡。在本研究中，我们使用了一种新型、高效且特异性的小分子 SIRT1 催化活性抑制剂 EX-527，来研究 SIRT1 在 DNA 损伤后 p53 乙酰化和细胞存活中的作用。在原代人乳腺上皮细胞和多种细胞系中，EX-527 处理显著增加了不同类型 DNA 损伤后 p53 赖氨酸 382 位点的乙酰化水平。值得注意的是，EX-527 对 SIRT1 催化活性的抑制作用对依托泊苷处理的细胞的生长、活力或 p53 调控的基因表达均无影响。组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) I/II 类抑制剂曲古抑菌素 A (TSA) 也增加了乙酰化 p53 的水平。EX-527 和 TSA 协同作用，提高了乙酰化 p53 的水平，证实 p53 乙酰化受 SIRT1 和 HDAC 的共同调控。虽然 TSA 单独使用会降低 DNA 损伤后的细胞存活率，但 EX-527 和 TSA 联合使用对细胞活力和生长没有进一步的影响。这些结果表明，尽管 SIRT1 可使 p53 去乙酰化，但在某些细胞系和原代人乳腺上皮细胞中，这种作用并不影响 DNA 损伤后的细胞存活。 [1]脓毒症被定义为一种全身性炎症反应综合征，它会扰乱宿主免疫系统的功能，包括免疫巨噬细胞介导的促炎反应和抗炎反应之间的失衡。脓毒症还可能诱发急性高血糖。研究表明，沉默交配型信息调节因子2同源物1 (SIRT1) 是一种NAD+依赖性脱乙酰酶，它介导NF-κB的脱乙酰化并抑制其功能。因此，SIRT1可能在高糖介导的炎症信号通路中发挥重要作用。本文证明，高糖显著下调RAW264.7巨噬细胞中SIRT1的mRNA和蛋白水平，并上调两种促炎细胞因子IL-1β和TNF-α的mRNA水平及其释放。有趣的是，高糖引起的SIRT1水平降低可被SIRT1激活剂SRT1720显著上调，同时IL-1β和TNF-α的水平和释放也显著降低。然而，当使用EX527抑制SIRT1的功能或使用RNAi抑制其表达时，高糖引起的IL-1β和TNF-α水平和释放的上调作用进一步增强。综上所述，这些发现共同表明SIRT1是许多高糖相关炎症性疾病（如脓毒症）的重要调节因子。[2]

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目的：肥胖是一种SIRT1缺乏状态，会增加危重患者的发病率和资源消耗。SIRT-1缺乏会加剧脓毒症早期的微血管炎症和死亡率。本研究旨在探讨SIRT-1激活剂白藜芦醇（RSV）对肥胖脓毒症小鼠微血管炎症的影响。方法：ob/ob和C57Bl/6（野生型）小鼠在盲肠结扎穿刺（脓毒症）前分别接受RSV或二甲基亚砜（DMSO）（溶剂对照）预处理。我们研究了（1）白细胞/血小板黏附、（2）小肠中E-选择素、ICAM-1和SIRT-1的表达以及（3）7天存活率。一组RSV处理组小鼠在脓毒症诱导后接受SIRT-1抑制剂（EX-527）治疗，并研究了白细胞/血小板黏附和E-选择素/ICAM-1的表达。我们用白藜芦醇（RSV）处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC），以研究脂多糖（LPS）刺激下E-选择素/ICAM-1和p65乙酰化（AC-p65）的表达变化。结果：RSV处理降低了脓毒症ob/ob和野生型小鼠的白细胞/血小板黏附和E-选择素/ICAM-1表达，并增加了SIRT-1的表达；RSV处理通过增加SIRT-1的表达降低了E-选择素/ICAM-1的表达，并降低了HUVEC细胞中AC-p65的表达。EX-527消除了RSV诱导的ob/ob脓毒症小鼠微血管炎症的减轻作用。最后，脓毒症+RSV组的ob/ob小鼠7天存活率显著高于脓毒症+载体组。结论：RSV通过增加ob/ob脓毒症小鼠中SIRT-1的表达来减轻微血管炎症并提高存活率。 [3]

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针对人源sirtuin SIRT1的高通量筛选发现了一系列吲哚类化合物，它们作为强效抑制剂，对SIRT1具有选择性，优于其他脱乙酰酶和NAD加工酶。本文所述的活性最强的化合物对SIRT1的IC50值为60-100 nM，比先前报道的SIRT抑制剂提高了500倍。制备对映体纯的吲哚衍生物，使其能够在体外和体内进行表征。动力学分析表明，这些抑制剂在烟酰胺从酶中释放后结合，并阻止脱乙酰肽和O-乙酰-ADP-核糖（酶催化脱乙酰化的产物）的释放。这些SIRT1抑制剂分子量小、细胞渗透性好、口服生物利用度高且代谢稳定。这些化合物为研究SIRT1的生物学特性以及探索SIRT1抑制剂的治疗用途提供了化学工具。 [4]

C13H13CLN2O

248.71

248.071

C, 62.78; H, 5.27; Cl, 14.25; N, 11.26; O, 6.43

848193-68-0

Selisistat;49843-98-3;(R)-Selisistat;848193-69-1

707029

Off-white to light yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

531.7±38.0 °C at 760 mmHg

275.4±26.8 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.688

2.22

59.87

2

1

1

17

323

1

C1C[C@@H](C2=C(C1)C3=C(N2)C=CC(=C3)Cl)C(=O)N

FUZYTVDVLBBXDL-VIFPVBQESA-N

InChI=1S/C13H13ClN2O/c14-7-4-5-11-10(6-7)8-2-1-3-9(13(15)17)12(8)16-11/h4-6,9,16H,1-3H2,(H2,15,17)/t9-/m0/s1

(1S)-6-chloro-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazole-1-carboxamide

EX 527(S); 848193-68-0; (S)-selisistat; (1S)-6-chloro-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazole-1-carboxamide; (S)-6-chloro-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazole-1-carboxamide; Selisistat, (S)-; Selisistat S-enantiomer; MUD9R3TJV3; EX-527(S);(S)-Selisistat EX-527(S)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 100 mg/mL (~402.07 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。