| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RAF; p38 MAPK
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| 体外研究 (In Vitro) |
Exarafenib/KIN-2787的Kinome分析显示，669种非RAF家族激酶中只有2种在1 M时被抑制>75%，并且相对于RAF激酶，对这两种激酶DDR1和p38b分别保留了约10倍和70倍的选择性窗口。我们之前报道了KIN-2787在BRAF、NRAS和KRAS突变肿瘤细胞系中的活性，在II类和III类二聚体驱动的BRAF模型中具有最高的敏感性[1]。
KIN-2787是一种高选择性、强效的下一代泛RAF抑制剂，在BRAF和RAS突变的人类肿瘤细胞模型中具有活性[1]。
Exarafenib的体外活性 泛RAF抑制剂15/Exarafenib在生化测定中是有效的，显示出跨异构体的低纳摩尔活性（ARAF IC50=2.4 nM，BRAF IC50=3.5 nM，CRAF IC50=1.4 nM；表3）。在包括野生型和突变体在内的>600种激酶的完整激酶组中（反应生物学热点激酶选择性测定；见支持信息），1μM浓度的化合物15/Exarafenib具有一流的选择性特征（图4a），只有一种脱靶野生型激酶的抑制率>90%（DDR1 IC50 107 nM）。同样，在突变体面板中，除了RAF家族突变体外，只有DDR突变体受到抑制（支持信息）。在扩大的RAF突变体和RAF依赖性细胞研究中（表3），化合物15抑制了单体I类改变的细胞系（A375 EC50=62 nM和Colo800 EC50=103 nM）、二聚体驱动的II类改变细胞系（NCI-H2405 EC50=10 nM，BxPC-3 EC50=51 nM和OV-90 EC50=26 nM）和异二聚体III类改变细胞株（WM3629 EC50=9 nM和CAL-12T EC50=18 nM）中的pERK信号传导，这些细胞系在临床上很容易达到的未结合血浆浓度下（见下文）。相比之下，具有BRAFWT背景的MAPK失调细胞系对15的敏感性较低，15仅具有适度的pERK抑制作用（SK-MEL-2 EC50=144 nM，NCI-H358 EC50=351 nM，CHL-1 EC50=580 nM）。为了测试药物诱导的反常激活，用15种已知的反常激活剂1和2处理具有BRAFWT背景的NRASQ61L突变细胞系IPC-298。与15在细胞环境中抑制BRAFWT二聚体信号传导的两种原聚体的预期能力一致，观察到pERK的剂量依赖性抑制（EC50=265 nM），而1和2明显诱导pERK反常激活（图4b）。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在这里，我们评估了NRAS突变体BRAF WT黑色素瘤与binimetinib的联合潜力。携带NRAS热点突变的黑色素瘤肿瘤细胞系与Exarafenib/KIN-2787联合比尼替尼显示出协同效益。与单独使用任何一种药物相比，在NRAS突变黑色素瘤异种移植物模型中，每日使用KIN-2787加binimetinib治疗可显著抑制肿瘤生长，并与增加的MAPK通路生物标志物抑制有关。
使用Exarafenib/KIN-2787与binimetinib联合进行的临床前体内研究表明，在NRAS突变黑色素瘤模型中，联合使用具有显著的益处。结合其独特的选择性，这些数据支持在该患者群体中使用KIN-2787进行联合治疗。一项评估KIN-2787安全性和有效性的1/1b期剂量递增和扩大临床试验正在进行中（NCT04913285）[1]。 Exarafenib的药理学 [2] 在植入BxPC-3细胞的BALB/c裸鼠中评估了疗效，BxPC-3细胞是一种具有II类BRAFindel（NVTAP）改变的人胰腺导管腺癌（PDAC）模型。与赋形剂治疗组相比，每天两次（BID）服用1.5、3、5和10mg/kg的化合物15/Exarafenib治疗14天的剂量组分别表现出68%、79%、88%和118%的剂量依赖性肿瘤生长抑制（TGI）（图5a）。根据研究期间体重没有变化，所有剂量水平都具有良好的耐受性（支持信息）。研究结束时的游离血浆浓度证实了接近线性的剂量比例暴露（图5b）。在另一组接受3天治疗的BxPC-3荷瘤动物中测量了体内生物标志物的调节。在给药后1小时，pERK相对于总ERK的测量比率以剂量依赖的方式受到抑制，并在12小时后恢复到基线水平（图5c）。这些数据表明，在II类BRAF突变癌症模型中，化合物15/Exarafenib与药效机制调节的程度和持续时间相关的体内疗效稳健。 为了在III类BRAF突变环境中评估化合物15/Exarafenib，对携带WM3629的小鼠进行了21天的治疗，WM3629是一种具有III类BRAFD594G改变和上游NRASG12D激活突变的人类黑色素瘤模型。化合物15的剂量为3、5、10和20mg/kg BID，耐受性良好（见支持信息），分别产生81%、91%、100%和105%的强效剂量依赖性TGI（图6a）。 除了通过BRAF二聚体发出信号的II类和III类BRAF改变的肿瘤外，化合物15/Exarafenib也在单体I类BRAFV600E人黑色素瘤异种移植物模型A375中进行了测试。与显示I类BRAF突变肿瘤细胞系与II类或III类相比效力较弱的体外细胞数据一致，A375异种移植物需要更高的化合物15暴露量才能在体内达到疗效。10 mg/kg BID治疗组的TGI有效率为21%（图6b），而30 mg/kg BID组的TGII有效率为130%，肿瘤消退（见图6b）。重要的是，即使在较高剂量水平下，化合物15仍具有良好的耐受性（见支持信息）。 基于体外MAPK通路抑制数据表明NRAS突变黑色素瘤也依赖于RAF二聚体信号传导，在具有NRASQ61R突变和BRAFWT背景的人类黑色素瘤模型（SK-MEL-2）中评估了疗效。用化合物15/Exarafenib治疗携带SK-MEL-2肿瘤的NOD SCID小鼠，在10mg/kg BID时产生13%的TGI，而30mg/kg BID导致135%的TGI和肿瘤消退（图6c）。这些数据验证了化合物15在RAF依赖性癌症中有效的潜力，这些癌症原本是BRAFWT，如NRAS突变黑色素瘤。 总之，体内研究确定了化合物15/Exarafenib在具有不同BRAF改变或RAF依赖性的肿瘤模型中的耐受性和抗肿瘤活性。 |
| 酶活实验 |
在Reaction Biology，通过放射性酶测定法对688种激酶（包括野生型、非典型和突变型）进行了Kinome分析[1]。
BRAF激酶生化测定：[2] 使用ADP-Glo测定法测量BRAF激酶的小分子抑制。在该试验中，ADP在测试激酶和底物存在的情况下转化为ATP，导致萤光素酶反应和发光读数，产生的光与相对激酶活性成比例。在DMSO中稀释的化合物用于两种测定的10点3倍剂量曲线。在室温下，将终浓度为6 nM的BRAF和30 nM的MEK1底物与3μM ATP、10 mM MgCl2、0.003%Brij-35、2 mM DTT、0.05%BSA、1 mM EGTA和50 mM HEPES孵育90分钟，然后加入ADP-Glo试剂40分钟，检测试剂45分钟。在Envision平板读数器上读取发光，使用Dotmatics Knowledge Solutions Studies曲线拟合的四参数拟合模型，使用剩余活性百分比计算IC50。 Kinome选择性Panel：[2] 如前所述，确定了Exarafenib的激酶特异性。1在10uM ATP的反应生物学热点Kinome选择性测定中评估了Exarafenib，活性以抑制百分比表示（=100-相对于DMSO对照的酶活性）。表S3中688种突变体和野生型激酶的数据。 |
| 细胞实验 |
通过抑制下游MAPK通路信号传导和抑制人肿瘤细胞系中的细胞生长来评估细胞活性。分别用KIN-2787和binimetinib在9x5剂量的基质中进行了联合细胞生长抑制研究。Incucyte成像评估了延长的细胞生长抑制作用[1]。
细胞检测：[2] 将细胞以8000个细胞/孔的速度接种在384孔板中的24µl生长培养基中，并在37°C和5%CO2的条件下粘附过夜。第二天，在384孔板中将化合物连续稀释成10点3倍稀释曲线。使用Echo550将化合物(e.g. Exarafenib)转移到细胞板上，使其在0.1%DMSO中的最终浓度范围为0.508nM至10mM，0.1%DMSO用作阴性对照。细胞在37°C、5%CO2的条件下与化合物一起孵育1小时。通过加入HTRF试剂盒提供的8µl 4X裂解缓冲液和1X蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物来裂解细胞。按照制造商的说明，将20µl裂解物转移到HTRF板上，然后分别转移2.5µl抗ERK1/2铕/铽Cryptate和抗磷酸ERK1/2抗体溶液并孵育。在Perkin-Elmer Envision 2105上在665nm（供体）和620nm（受体）处测量特定信号，用于计算Dotmatics Knowledge Solutions Studies曲线拟合环境中IC50值的比率如表1-3所示。 |
| 动物实验 |
在NRAS突变异种移植模型中评估了KIN-2787及其联合用药的体内疗效。[1]
体内药理学研究：[2] 将iPC-3、WM3629或A375细胞接种到BALB/c裸鼠体内，而将SKMEL-2细胞接种到NOD SCID小鼠体内。将5×10⁶或1×10⁷个肿瘤细胞悬浮于0.1 ml培养基和Matrigel的1:1混合物中，皮下注射到小鼠侧腹部。每隔一天监测小鼠体重，每周监测肿瘤体积（宽²×长×0.5）2-3次。当平均肿瘤体积达到约200-300 mm³时，开始疗效研究。动物被随机分为治疗组（除A375模型每组n=6外，所有模型每组n=9），并每日两次给药，持续2-4周。给药方案为：赋形剂（0.5%甲基纤维素/0.1% Tween80水溶液）或化合物15/艾沙非尼（Exarafenib），剂量范围为1.5 mg/kg至30 mg/kg。肿瘤生长抑制率（TGI）的计算公式为：[1 − (TVf − TV0)治疗组/(TVf − TV0)对照组] × 100，其中“TVf”和“TV0”分别代表治疗结束日和治疗开始日的平均肿瘤体积。统计分析采用双因素方差分析（ANOVA），并进行Tukey事后检验。所有检验的显著性水平均设定为5%或p<0.05。在最后一次给药后，于多个时间点采集研究结束时的血浆样本，并采用 LC/MS/MS 进行分析。[2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
体外ADME和理化性质[1]
化合物15/艾沙非尼在不同物种的肝细胞中进行了代谢稳定性测试，结果表明孵育60分钟后仍有>60%的残留（h = 85%，d = 72%，r = 69%，m = 62%，表3）。化合物15/艾沙非尼的分子量为521.58，熔点为193 °C，pKa值为5.3，log D值为3.82。与乙二醇14（pKa = 3.8）相比，其碱性增强，使得化合物15能够以盐酸盐的形式进行常规配制，从而在生理相关pH值（7.4–2.0）范围内具有良好的溶解性，并在生物相关介质（FaSSGF、FaSSIF）中具有良好的热力学溶解性。该化合物的特性使其在人血浆中游离分数可可靠地测量为 6.7%。由于其符合高效泛 RAF 抑制剂的标准，且具有最小的矛盾激活、优异的 ADME 和药学特性，因此对化合物 15 进行了进一步的体内分析。 化合物 15/艾沙非尼的药代动力学[1] 化合物 15/艾沙非尼在不同物种中的药代动力学特性总结于表 4。化合物 15 在临床前动物模型中表现出低至中等的静脉清除率（小鼠 = 7.5，大鼠 = 17.4，犬 = 11.7 mL/min/kg）、低至中等的 Cmax（小鼠 = 7.0，大鼠 = 1.4，犬 = 4.8 μM）和中等的分布容积（小鼠 = 1.6，大鼠 = 2.5，犬 = 1.6 L/kg）。化合物 15 口服后易于吸收，导致暴露量极佳（小鼠 = 16.7，大鼠 = 15，狗 = 31 μM·h），相应的口服生物利用度 >40%。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
艾沙非尼是一种口服的I、II和III类B-Raf（BRAF）蛋白激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，艾沙非尼可与I、II或III类B-Raf突变结合并抑制其活性。这可阻断B-Raf介导的信号转导通路，从而抑制B-Raf突变细胞的肿瘤生长。B-Raf蛋白激酶在RAF/MEK/ERK信号通路中发挥关键作用，该通路在人类癌症中常发生失调和突变，并在肿瘤细胞增殖和存活中起着重要作用。NRAS突变激活MAPK信号通路，在美国，约20%的黑色素瘤病例中存在致癌驱动基因改变。NRAS突变型黑色素瘤特异性地依赖于CRAF而非BRAF来激活下游MEK/ERK信号通路。在BRAF突变型黑色素瘤中，已获批准的RAF靶向疗法通常与MEK抑制剂联合使用，通过抑制致癌MAPK信号通路中的两个靶点发挥临床疗效。早期临床开发中的泛RAF抑制剂的新兴数据显示，无论是否联合MEK抑制剂，均能带来疗效，但目前尚无获批的针对NRAS突变型黑色素瘤患者的靶向疗法。KIN-2787是一种新型口服泛RAF抑制剂，旨在对RAF依赖性癌症有效，且不受RAF亚型的影响。[1]RAF是MAPK激酶级联反应的核心信号成分，在包括黑色素瘤、肺癌和结直肠癌在内的多种癌症中经常发生突变。已获批准的抑制剂主要针对BRAFV600E突变，该突变会导致单体蛋白（I类）激酶信号的组成型激活。然而，这些抑制剂也存在矛盾之处，即它们会激活RAF二聚体的激酶信号通路，导致正常组织中MAPK信号通路增强。近年来，人们开始关注靶向激活二聚体信号的RAF改变（II类和III类BRAF和NRAS）。然而，发现一种高效、选择性强且具有生物药学特性的抑制剂，以在临床环境中维持稳定的靶点抑制效果，仍然是一项挑战。本文报道了Exarafenib (15) 的发现，它是一种高效、选择性强的抑制剂，能够阻断处于二聚体相容的αC螺旋-IN构象的RAF蛋白，并在BRAF I类、II类和III类以及NRAS改变的临床前模型中显示出抗肿瘤疗效。[2] FDA批准的RAF抑制剂已在治疗BRAFV600E突变型癌症方面显示出临床疗效。然而，这些抑制剂对BRAF II类和III类以及NRAS突变肿瘤无效，这些肿瘤的信号传导活性是通过二聚体实现的。此外，这些抑制剂还会产生诱导活性二聚体构象的意外后果，导致MAPK通路出现矛盾性激活，而MAPK通路在二聚体信号传导占主导地位，例如在携带BRAF野生型（BRAFWT）的正常组织中。RAF改变的异质性凸显了在避免不良副作用的同时开发靶向疗法的挑战。我们发现了Exarafenib (15)，一种泛RAF抑制剂，它能够阻断激酶结构域的αC螺旋-IN构象，并能够抑制单体和二聚体信号传导。Exarafenib展现出极高的激酶组选择性，并且对多种RAF改变类型具有显著的细胞活性，而不会诱导矛盾性激活。为了实现体内广泛的靶点覆盖，我们采用多参数优化方法将类药特性整合到分子设计中。结果表明，艾沙非尼具有优异的ADME/DMPK特性，并在生理相关pH值范围内表现出良好的溶解性。因此，在I类、II类和III类以及NRAS突变肿瘤模型中，艾沙非尼的体内治疗耐受性良好，并作为单药治疗展现出剂量依赖性的疗效。基于这些发现，我们最终选择艾沙非尼作为临床候选药物。我们将适时报告艾沙非尼在携带RAF和NRAS突变的癌症患者中的安全性和有效性。[2]
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| 分子式 |
C26H34F3N5O3
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|---|---|
| 分子量 |
521.575076580048
|
| 精确质量 |
521.26
|
| 元素分析 |
C, 59.87; H, 6.57; F, 10.93; N, 13.43; O, 9.20
|
| CAS号 |
2639957-39-2
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| 相关CAS号 |
2639957-39-2
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| PubChem CID |
156297592
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| 外观&性状 |
White to yellow solid
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| LogP |
4
|
| tPSA |
90
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
739
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CC1=C(C=C(C=C1)NC(=O)N2CC[C@H](C2)CC(F)(F)F)C3=CC(=NC(=C3)N4CCOCC4)N[C@H](C)CO
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| InChi Key |
GZMYLSJUNSCMTD-MOPGFXCFSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C26H34F3N5O3/c1-17-3-4-21(31-25(36)34-6-5-19(15-34)14-26(27,28)29)13-22(17)20-11-23(30-18(2)16-35)32-24(12-20)33-7-9-37-10-8-33/h3-4,11-13,18-19,35H,5-10,14-16H2,1-2H3,(H,30,32)(H,31,36)/t18-,19+/m1/s1
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| 化学名 |
(3S)-N-[3-[2-[[(2R)-1-hydroxypropan-2-yl]amino]-6-morpholin-4-ylpyridin-4-yl]-4-methylphenyl]-3-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide
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| 别名 |
Exarafenib; RAF/KIN_2787; 2639957-39-2; KIN-2787 free base; 2VPX8HL8AB; compound 15 [Chen et al., 2024]; example 14 [WO2021081375A1]; KIN 2787; KIN2787; KIN-2787
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (~191.7 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.79 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9173 mL | 9.5863 mL | 19.1725 mL | |
| 5 mM | 0.3835 mL | 1.9173 mL | 3.8345 mL | |
| 10 mM | 0.1917 mL | 0.9586 mL | 1.9173 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT04913285 | Recruiting | Drug: KIN-2787 and binimetinib Drug: KIN-2787 |
Melanoma Solid Tumor, Adult |
Kinnate Biopharma | August 4, 2021 | Phase 1 |
RAF-IN-2
BRAF ligand-1
CST905
BRAFV600E-IN-2
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