| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 靶点 |
CARM1 (IC50 = 6 nM)
EZM2302 selectively targets CARM1 (coactivator-associated arginine methyltransferase 1, also known as PRMT4), a histone methyltransferase that methylates arginine residues on histone H3 (H3R17) and other proteins. CARM1 plays a key role in transcriptional coactivation and is overexpressed in various cancers. EZM2302 inhibits CARM1 activity with an IC₅₀ of 6 nM. When bound to CARM1, EZM2302 exhibits broad selectivity for other histone methyltransferases while selectively inhibiting CARM1 activity. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
EZM 2302 与 CARM1 结合后，对其他组蛋白甲基转移酶表现出广泛的选择性，同时选择性地抑制 CARM1 的活性（IC50=6 nM）。将 EZM 2302 应用于多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系可阻止细胞周期阻滞以及 PABP1 和 SMB 的甲基化，IC50 值在纳摩尔范围内（分别为 9 nM 和 31 nM）。EZM 2302 在体外可抑制多种造血细胞系；在第 14 天，15 个细胞系中有 9 个细胞系的 IC50 值低于 100 nM [1]。
体外实验表明，EZM2302 能有效抑制 CARM1 的活性，IC₅₀ 为 6 nM。该化合物对 CARM1 的选择性远高于其他组蛋白甲基转移酶。在细胞实验中，EZM2302 可抑制癌细胞系中 CARM1 介导的组蛋白甲基化及其下游靶基因的表达。该化合物在多发性骨髓瘤和其他癌细胞系中均表现出抗增殖作用。EZM2302 独特的作用机制为靶向癌症中的表观遗传调控提供了一种新的策略。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
EZM 2302 在人肝细胞中表现出稳定性（CL<3 mL/min/kg），在小鼠、大鼠和人体内与血浆蛋白的结合度中等，平均游离分数分别为 0.66、0.46 和 0.74。大鼠和小鼠的血浆清除率 (CL) 分别为 91 mL/min/kg 和 43 mL/min/kg。在 RPMI-8226 异种移植瘤模型中，EZM 2302 经 21 天后显示出剂量依赖性的暴露量和肿瘤生长抑制 (TGI)。第 21 天，所有 EZM 2302 给药组的肿瘤生长速度均显著慢于溶媒组 [1]。体内研究表明，EZM2302 在多发性骨髓瘤的临床前模型中具有显著活性。该化合物的口服生物利用度支持在动物模型中每日一次或两次给药。 EZM2302在异种移植模型中抑制肿瘤生长，并显示出良好的药代动力学特性。该化合物对CARM1的选择性优于其他甲基转移酶，这有助于其靶向作用机制，并降低脱靶毒性。
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| 酶活实验 |
组蛋白甲基转移酶活性测定[1]
CARM1 活性测定方法与之前报道的组蛋白甲基转移酶 PRMT1/6/865 和 PRMT558 的测定方法相同。简而言之，在反应开始前，将 CARM1 与化合物在室温下预孵育 30 分钟。最终测定条件为：0.25 nM CARM1、30 nM 3H-S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 和 250 nM 生物素标记肽，缓冲液成分为 20 mM bicine、1 mM 三(2-羧乙基)膦、0.005% 牛皮明胶和 0.002% Tween-20，pH 7.5。加入 300 μM 未标记的 SAM 终止反应。使用 Topcount 酶标仪上的 Flashplate 测定生成的 3H 标记肽的量。更多详情请参见补充方法。[1] 蛋白质生产[1] 用于生化研究的FLAG-CARM1（氨基酸2-585）-His在293F哺乳动物细胞中表达，并使用FLAG亲和层析纯化。用于X射线晶体学的His-TEV-CARM1（氨基酸134-479）在昆虫细胞中表达，并使用Ni亲和层析和尺寸排阻层析纯化。详细方法请参见补充方法。 X射线晶体学[1] CARM1（氨基酸134-479）晶体采用气相扩散法生长，化合物浸泡于预先形成的晶体中。结晶和结构测定方法，包括数据收集和精修统计，请参见补充方法和补充表S1。结构已存入蛋白质数据库（PDB），PDB代码如下：化合物2：6ARV； EZM2302：6ARJ。 EZM2302 的非细胞酶活性测定包括使用纯化的重组 CARM1 酶评估其对 CARM1 甲基转移酶活性的抑制作用。将该酶与肽底物（例如组蛋白 H3）和甲基供体 S-腺苷甲硫氨酸 (SAM) 在不同浓度的 EZM2302 存在下进行孵育。使用 [³H]-SAM 放射性测定法或基于发光的测定法（例如 MTase-Glo™）测量甲基掺入底物的程度。IC₅₀ 值由剂量反应曲线确定。 |
| 细胞实验 |
体外化合物处理[1]
将处于线性/对数生长期的培养细胞以2e5个细胞/mL的接种密度接种于2-20mL培养基中，具体接种量取决于生长周期结束时所需的产量。将化合物用DMSO稀释，并加入到每个培养容器中，使DMSO的最终浓度为0.2%。细胞培养96小时。在每个处理周期结束后，通过离心（5分钟，1200 rpm）收集细胞，并将细胞沉淀用PBS洗涤一次，然后在干冰上冷冻，以备后续处理。 蛋白质印迹[1] 使用含0.1% SDS的1X RIPA缓冲液，从细胞沉淀、速冻肿瘤异种移植样本或外周组织中制备裂解液。 Western blot定量分析采用红外发射二抗，并使用ODYSSEY红外成像系统进行检测。 体外增殖实验[1] 长期（14-15天）细胞增殖实验采用先前描述的方法进行，并根据每种细胞系的生长特性调整初始接种密度。6天增殖实验见补充方法。 EZM2302的体外细胞实验包括用该化合物处理癌细胞系（例如，多发性骨髓瘤细胞），并评估细胞活力、增殖和CARM1活性。细胞用不同浓度的EZM2302（0.1-1000 nM）处理72小时。细胞活力采用MTT或CellTiter-Glo®法测定。CARM1活性通过使用甲基化特异性抗体进行Western blot检测H3R17甲基化来评估。下游靶基因表达通过qPCR进行测量。 |
| 动物实验 |
体内异种移植研究[1]
本研究中所有与动物操作、护理和治疗相关的程序均按照上海康普顿生物技术有限公司机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准的指南进行，并遵循实验动物评估和认证协会（AAALAC）的指导原则。实验方案已获得上海康普顿生物技术有限公司IACUC的批准。在体内疗效研究中，每个剂量组使用8只小鼠，每只小鼠均在右侧腹部皮下接种。所有细胞均悬浮于0.2 mL基础培养基和Matrigel（1:1）的混合物中，用于肿瘤生长。RPMI-8226细胞的接种量为5 × 10⁶个细胞/只小鼠，当平均肿瘤体积达到120 mm³（接种后28天）时开始治疗。CB-17 SCID小鼠采用随机区组设计分组。 EZM2302 或赋形剂（0.5% 甲基纤维素水溶液）以 37.5、75、150 或 300 mg/kg 的剂量，每日两次口服给药，持续 21 天。研究期间每周测量两次体重。使用游标卡尺每周两次测量肿瘤大小（二维），并以立方毫米表示体积。末次给药后 3 小时处死动物，采集血液和组织进行分析。 小鼠和大鼠药代动力学研究[1] 本研究中所有与动物操作、护理和治疗相关的程序均按照上海科友生物技术有限公司机构动物护理和使用委员会 (IACUC) 批准的指南进行，并遵循实验动物评估和认证协会 (AAALAC) 的指导。实验方案已获得上海科友生物技术有限公司 IACUC 的批准。雄性CD-1小鼠（每组n=9，每个时间点3只）和雄性Sprague-Dawley大鼠（n=3）分别接受单次静脉注射（iv）2 mg/kg和灌胃（po；仅限小鼠）10 mg/kg的EZM2302给药，药物配制于pH 3.5的5%葡萄糖溶液中。另取一组大鼠，在颈静脉和门静脉插管后，通过灌胃给药（10 mg/kg，溶于0.5%甲基纤维素溶液中）。在预设的时间间隔，分别通过眼眶后静脉（小鼠）、尾静脉（大鼠iv）或颈静脉和门静脉（大鼠po）采集约110 μL血液。将2小时采集的血液样本分成两份，分别用于平行测定血液和血浆中的药物浓度（离体比值）。血液样本收集于K2-EDTA抗凝管中，离心后获得血浆。蛋白质沉淀后，采用LC-MS/MS分析测定EZM2302浓度，并使用Phoenix WinNonlin 6.2或更高版本软件进行数据分析。 ADME测定[1] 肝细胞稳定性、血浆蛋白结合率和细胞色素P450测定均采用标准方法进行。详细信息见补充方法。 EZM2302的体内动物实验在多发性骨髓瘤和其他癌症的小鼠异种移植模型中进行。荷瘤小鼠每日灌胃给予10-100 mg/kg剂量的EZM2302。通过游标卡尺测量监测肿瘤生长抑制情况。通过免疫组织化学检测H3R17甲基化来评估肿瘤组织中CARM1的抑制情况。药代动力学研究表征了药物的吸收、分布、代谢和排泄。评估该化合物对肿瘤生长和存活的影响。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
EZM2302 的分子量为 585.09，分子式为 C₂₉H₃₇ClN₆O₅。它在室温下为固体，纯度≥98%。该化合物可溶于 DMSO 和其他有机溶剂。通常储存于 -20°C，避光防潮。EZM2302 具有良好的口服生物利用度，且药代动力学性质良好，支持每日一次给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
EZM2302 是一种仅供实验室使用的研究化合物，尚未获准用于人体治疗。在临床前研究中，其在治疗剂量下通常耐受性良好。作为一种表观遗传抑制剂，它可能对正常组织中的基因表达产生影响。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。它可能引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CARM1 是一种精氨酸甲基转移酶，其底物包括多种组蛋白和非组蛋白，并参与调控多种细胞过程，包括转录共激活和 RNA 加工。据报道，CARM1 在多种癌症类型中过表达，体外研究表明其能够调节致癌通路。由于缺乏选择性工具化合物，特别是用于体内研究的工具化合物，我们对 CARM1 在肿瘤发生中的作用机制的理解仍然有限。我们描述了首个已知的高效选择性 CARM1 抑制剂的鉴定和表征，该抑制剂在体外和体内均表现出抗增殖活性，并且据我们所知，首次揭示了 CARM1 在多发性骨髓瘤 (MM) 中的作用。EZM2302 (GSK3359088) 在生化分析中显示出对 CARM1 酶活性的抑制活性 (IC50 = 6 nM)，并且对其他组蛋白甲基转移酶具有广泛的选择性。用 EZM2302 处理 MM 细胞系可抑制 PABP1 和 SMB 的甲基化，并导致细胞周期阻滞，IC50 值在纳摩尔范围内。口服 EZM2302 可在体内以剂量依赖的方式抑制 CARM1，并在 MM 异种移植模型中表现出抗肿瘤活性。EZM2302 是一种经过验证的化学探针，适用于进一步了解 CARM1 在癌症和其他疾病中的生物学作用 [1]。
EZM2302（GSK-3359088；CAS 1628830-21-6）是一种高效、选择性强且口服生物利用度高的 CARM1 抑制剂，IC₅₀ 为 6 nM。它选择性地抑制 CARM1 活性，对其他组蛋白甲基转移酶具有广泛的选择性。EZM2302 已在多发性骨髓瘤的临床前模型中显示出强大的活性。该化合物可从多家商业供应商处获得，用于研究用途。 |
| 分子式 |
C29H37CLN6O5
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|---|---|
| 分子量 |
585.094285726547
|
| 精确质量 |
584.251
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| 元素分析 |
C, 59.53; H, 6.37; Cl, 6.06; N, 14.36; O, 13.67
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| CAS号 |
1628830-21-6
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| PubChem CID |
90425581
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.4
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| tPSA |
126
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
10
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
| 重原子数目 |
41
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| 分子复杂度/Complexity |
873
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CC1=C(N=C(N=C1N2CC3(C2)CCN(CC3)C(=O)OC)C4=C(C=CC(=C4)OC[C@@H](CNC)O)Cl)C5=C(ON=C5C)C
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| InChi Key |
OWCOTUVKROVONT-HXUWFJFHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H37ClN6O5/c1-17-25(24-18(2)34-41-19(24)3)32-26(22-12-21(6-7-23(22)30)40-14-20(37)13-31-4)33-27(17)36-15-29(16-36)8-10-35(11-9-29)28(38)39-5/h6-7,12,20,31,37H,8-11,13-16H2,1-5H3/t20-/m1/s1
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| 化学名 |
Methyl (R)-2-(2-(2-chloro-5-(2-hydroxy-3-(methylamino)propoxy)phenyl)-6-(3,5-dimethylisoxazol-4-yl)-5-methylpyrimidin-4-yl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane-7-carboxylate
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| 别名 |
EZM2302 GSK3359088EZM-2302 GSK-3359088EZM 2302 GSK 3359088
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~170.91 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7091 mL | 8.5457 mL | 17.0914 mL | |
| 5 mM | 0.3418 mL | 1.7091 mL | 3.4183 mL | |
| 10 mM | 0.1709 mL | 0.8546 mL | 1.7091 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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