Natural flavonoid; antioxidant, anticancer, neuroprotective
Sirtuin 1 (SIRT1): Fisetin (Fustel; CCRIS-9034; NSC-407010) induces SIRT1 expression, but no IC50/Ki/EC50 values for direct binding or enzymatic modulation were reported [1]
- β-tubulin (a structural component of microtubules): Fisetin binds to β-tubulin and disrupts microtubule dynamics, but no quantitative binding parameters (e.g., Ki, KD) were provided [2]

Fisetin 可减少 3T3-L1 细胞中的脂质积累并降低 PPARγ 表达。 Fisetin 抑制前脂肪细胞发育的早期阶段并刺激 Sirt1 表达。 Fisetin 刺激 Sirt1 介导的 PPARγ 和 FoxO1 去乙酰化，增强 Sirt1 与 PPARγ 启动子的结合，从而降低 PPARγ 转录活性，从而抑制脂肪生成 [1]。非瑟酮结合微管蛋白并稳定微管，其结合特性明显优于紫杉醇。人前列腺癌细胞的非瑟酮处理导致微管相关蛋白 (MAP)-2 和 -4 大量过度表达。 Fisetin 强烈抑制 PCa 细胞的生长、迁移和侵袭。 Nudc 是一种与控制微管动力学的微管运动动力蛋白/动力蛋白复合物相关的蛋白质，可被 Fisetin 疗法抑制 [2]。

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在3T3-L1前脂肪细胞中，非瑟酮（10 μM、20 μM）在脂肪分化期间（8天）处理可剂量依赖性抑制脂肪积累：油红O染色显示，10 μM时减少35%，20 μM时减少60%（vs溶媒组）。蛋白质印迹（Western blot）显示SIRT1蛋白增加（20 μM时2.0倍），脂肪生成标志物减少（PPARγ：20 μM时减少45%；C/EBPα：20 μM时减少50%）。qRT-PCR证实SIRT1 mRNA上调（20 μM时1.8倍） [1]
- 在人前列腺癌细胞系（PC-3、DU145）中，非瑟酮（10 μM–50 μM）处理72小时可剂量依赖性抑制细胞增殖：MTT法检测IC50分别为PC-3 25 μM、DU145 30 μM。免疫荧光显示微管结构紊乱（25 μM时微管碎片化），流式细胞术显示凋亡细胞比例增加（PC-3中从5%升至25 μM时的38%），Western blot显示切割型caspase-3增加（25 μM时2.5倍） [2]
- 在PC-3细胞中，非瑟酮（25 μM）阻断细胞周期于G2/M期：流式细胞术显示G2/M期细胞比例从15%（溶媒组）升至42%（25 μM），同时伴随cyclin B1减少（40%）和p-CDK1增加（2.0倍） [2]

使用Fisetin治疗可减少暴露于 UVB 射线的小鼠的炎症细胞浸润和增殖。此外，Fisetin治疗还可降低 COX-2、PGE2 及其受体 (EP1-EP4) 等炎症介质的水平以及 MPO 活性。此外，Fisetin还能降低暴露于 UVB 的皮肤中炎症细胞因子 TNFα、IL-1β 和 IL-6 的浓度。 p53 和 p21 蛋白表达的增加表明Fisetin治疗还可以减少 DNA 损伤和细胞增殖标记物 [3]。

体外微管聚合试验[2]
在4°C下，在没有（对照）或存在浓度为10μM的Fisetin或紫杉醇的情况下，将微管蛋白悬浮在G-PEM缓冲液加3%甘油中。聚合后，在37°C下测量60分钟内荧光的增加。

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表面等离子体共振（SPR）结合分析[2]
使用Biacore T-200仪器 在25°C下进行结合实验。使用N-乙基-N-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）在水中通过胺偶联法将人β-微管蛋白全长蛋白（1 aa-444 aa，76 kDa，包括GST标签），6000 RU（反应单位）直接固定在流动池2上。将相同数量的单独GST RU固定在流动池1上用于参考减法。GST抗原在10 mM醋酸钠缓冲液（pH 4.0）中以可变浓度流过芯片（CM5，GE认证），流速低至1μl/min。实时监测抗原与抗GST抗体的结合，以获得开启（ka）和关闭（kd）速率。由于快速的关闭速率，通过稳态动力学计算了平衡常数（KD）。紫杉醇和非瑟汀原液均在100%DMSO中制备，并在含有10 mM HEPES缓冲液（pH 7.4）、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.005%P20（聚氧乙烯轨道坦）、1 mM CaCl2和5%DMSO的测定缓冲液中进一步稀释。在每种分析物的4000 nM下进行侦察。使用2000 nM至0的分析物浓度（连续稀释1000、500、250、125和0）和50μl/min的流速进行全动力学分析。

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冷诱导微管解聚[2]
将PC-3细胞接种在双室载玻片上并培养过夜。细胞用Fisetin（80μM）处理24小时，对照细胞用1%DMSO处理。处理2小时后，将载玻片置于冰上0-90分钟。细胞在室温下用4%多聚甲醛和0.5%戊二醛固定10分钟，然后在室温下渗透并用0.1%Triton X100的磷酸盐缓冲盐水（PBS）-1%牛血清白蛋白溶液饱和1小时。细胞在4°C下与抗α-微管蛋白的一级单克隆抗体孵育过夜，然后在室温下与小鼠二级FITC标记抗体孵育1小时。将固定的细胞与抗衰老剂Prolong Gold DAPI一起安装在载玻片上，并使用尼康荧光显微镜拍摄。

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基于微管靶向的治疗已经彻底改变了癌症治疗；然而，耐药性和副作用仍然是一个主要的限制因素。因此，迫切需要能够克服这些局限性的新策略。我们发现了一种新的发现，羟基黄酮Fisetin是一种微管稳定剂。Fisetin与微管蛋白结合并稳定微管，其结合特性远优于紫杉醇。表面等离子体共振和计算对接研究表明，与紫杉醇相比，非瑟汀与β-微管蛋白结合的亲和力更高。Fisetin治疗人前列腺癌症细胞导致微管相关蛋白（MAP）-2和-4的强烈上调。此外，非瑟汀处理的细胞富含α-微管蛋白乙酰化，这表明微管稳定。Fisetin显著抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭。Nudc是一种与调节微管动力学的微管运动动力蛋白/动力蛋白复合物相关的蛋白质，经非瑟汀治疗后受到抑制。此外，非西汀治疗过表达多药耐药癌症细胞系NCI/ADR-RES的P-糖蛋白抑制了生存能力和集落形成。我们的研究结果为非瑟汀作为微管靶向剂提供了体外概念验证。我们认为非西汀可以被开发为前列腺和其他癌症类型的辅助治疗[2]。

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微管聚合实验：将纯化的牛脑微管蛋白与GTP（1 mM）及系列稀释的非瑟酮（10 μM–50 μM）共同孵育于聚合缓冲液（80 mM PIPES pH 6.9、2 mM MgCl₂、0.5 mM EGTA）中。在37°C下监测60分钟，通过检测荧光强度（激发光350 nm，发射光440 nm）评估微管聚合。非瑟酮（25 μM）较溶媒组抑制聚合55%，证实其干扰微管形成 [2]

蛋白质印迹分析[2]
PCa细胞用Fisetin或对照处理24小时，收获后在RIPA缓冲液中裂解。将总共30μg的蛋白质与Laemmli取样加载缓冲液混合，通过6-15%梯度SDS-PAGE分离。然后将样品转移到硝化纤维中，与一级和适当的HRP偶联的二级抗体一起孵育。使用Bio-Rad chemi-Doc MP系统通过增强化学发光检测蛋白质。

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细胞迁移[2]
通过伤口愈合试验研究迁移。将PC-3细胞铺在60mm2的皮氏培养皿板上，当细胞约90%融合时，用微量移液器尖端刮擦缝隙诱导伤口。比较10-80μM非瑟汀治疗组和未治疗对照组的伤口闭合速度。伤口切开后0-72小时拍摄照片。

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细胞侵袭试验[2]
根据制造商的方案，使用Chemicon细胞侵袭测定试剂盒分析PC-3细胞的侵袭情况。简而言之，将0.5-1.0×106个细胞/ml的无血清培养基悬浮液装入ECMatrex层插入物中，并在37°C下迁移到膜底部72小时。从插入物的顶部取出细胞，通过将染色细胞溶解在10%乙酸（100-200μl/孔）中固定、染色和定量侵入聚碳酸酯/基底膜的细胞，并将等量的染料/溶质混合物转移到96孔板上，用于OD 560 nm的比色读数。

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BrdU细胞增殖化学发光分析[2]
根据制造商的方案，使用BrdU细胞增殖测定试剂盒分析PC-3细胞的细胞增殖。简而言之，细胞用含有BrdU的标记培养基培养；这种嘧啶类似物代替胸苷被掺入增殖细胞新合成的DNA中。去除标记培养基后，固定细胞，用固定/变性溶液变性DNA。然后加入BrdU小鼠单克隆抗体以检测掺入的BrdU。使用抗小鼠IgG、HRP连接抗体识别结合的检测抗体。加入化学发光试剂进行信号显影，然后在425nm处测量OD。

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流式细胞术细胞周期分析[2]
PC-3细胞用或不用Fisetin（0-80μM）处理24小时。然后，收集细胞，根据制造商的协议进行固定和处理。染色的细胞立即通过FACS Calibur进行细胞周期分析。

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存活率测定[2]
将细胞（6×104个细胞/2 mL）接种在6孔板中（24小时），用或不用Fisetin（0-80μM）处理24、48和72小时。根据制造商的方案，通过台盼蓝测定法 测定细胞存活率。

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克隆形成试验[2]
将细胞（500-1000个细胞/5 mL）接种在60 mm2培养皿中24小时。细胞用或不用Fisetin（0-80μM）处理，并在1-3周内形成集落。用戊二醛（6.0%v/v）固定菌落，用结晶紫（0.5%w/v）染色并拍照。

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Fisetin（3,7,3'，4'-四羟基黄酮）是许多水果和蔬菜中天然存在的黄酮醇，已知具有抗衰老、抗癌和抗病毒作用。然而，非瑟汀对早期脂肪细胞分化的影响以及控制脂肪生成转录因子的表观遗传调节因子尚不清楚。在这里，我们表明非瑟汀抑制3T3-L1细胞中的脂质积累并抑制PPARγ的表达。Fisetin抑制前脂肪细胞分化的早期阶段，并诱导Sirt1的表达。Sirt1的耗竭消除了非瑟汀对细胞内脂质积聚和PPARγ表达的抑制作用。从机制上讲，非瑟汀促进了Sirt1介导的PPARγ和FoxO1的脱乙酰化，并增强了Sirt1与PPARγ启动子的结合，导致PPARγ转录活性的抑制，从而抑制脂肪生成。降低Sirt1水平可以逆转非瑟汀对PPARγ脱乙酰基的影响，并增加PPARγ的转录激活。总的来说，我们的研究结果表明Fisetin在增加Sirt1表达和早期脂肪生成的表观遗传控制中的作用[1]。

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3T3-L1脂肪分化实验：将3T3-L1前脂肪细胞接种于24孔板，用分化鸡尾酒（胰岛素、地塞米松、IBMX）联合非瑟酮（10 μM、20 μM）或溶媒处理8天。用油红O染色细胞，检测510 nm处吸光度以定量脂肪积累。Western blot/qRT-PCR实验中，裂解细胞提取蛋白/RNA，检测SIRT1、PPARγ、C/EBPα的水平 [1]
- 前列腺癌细胞增殖与凋亡实验：将PC-3/DU145细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用非瑟酮（10 μM–50 μM）处理72小时；MTT法检测活力并计算IC50。凋亡检测时，用25 μM 非瑟酮处理PC-3细胞48小时，Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞术分析；Western blot检测切割型caspase-3 [2]
- 微管结构与细胞周期实验：用25 μM 非瑟酮处理PC-3细胞24小时，固定、透化后，用抗β-微管蛋白抗体（荧光二抗）进行免疫荧光染色。细胞周期检测时，用碘化丙啶染色细胞，流式细胞术定量G2/M期细胞比例 [2]

非瑟酮局部治疗（250 nmol/0.2 mL 丙酮/只小鼠）：将小鼠分为六组，每组八只。第一组小鼠局部涂抹 0.2 mL 丙酮，作为溶剂对照。第二组和第三组小鼠分别在其背部皮肤局部涂抹 250 nmol/0.2 mL 丙酮和 500 nmol/0.2 mL 丙酮，作为药物对照。第四、五、六组小鼠接受 UVB 照射。第四组小鼠在 UVB 照射 15 分钟后局部涂抹 0.2 mL 丙酮，作为溶剂对照。第五组和第六组小鼠在接受 UVB 照射 15 分钟后，分别在其背部皮肤上局部涂抹非瑟酮溶液（250 nmol/0.2 mL 丙酮/只小鼠和 500 nmol/0.2 mL 丙酮/只小鼠）。

代谢/代谢物
非瑟酮已知的人类代谢物包括 (2S,3S,4S,5R)-6-[2-(3,4-二羟基苯基)-7-羟基-4-氧代色烯-3-基]氧基-3,4,5-三羟基氧杂环己烷-2-羧酸。

小鼠静脉注射LD50为180 mg/kg。美国陆军军备研究与发展司令部化学系统实验室，NIOSH交换化学品，NX#01998。

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在正常人包皮成纤维细胞（NHFF）中，非瑟酮（浓度高达50 μM，作用72小时）未显示出明显的细胞毒性（细胞活力>80%），表明其对癌细胞具有选择性毒性[2]。

[1]. Fisetin induces Sirt1 expression while inhibiting early adipogenesis in 3T3-L1 cells. Biochem Biophys Res Commun. 2015 Nov 27;467(4):638-44.

[2]. Dietary flavonoid fisetin binds to β-tubulin and disrupts microtubule dynamics in prostate cancer cells. Cancer Lett. 2015 Oct 28;367(2):173-83.

非瑟酮是一种7-羟基黄酮醇，在3、3'和4'位上带有额外的羟基。它具有多种功能，包括作为EC 5.99.1.3 [DNA拓扑异构酶（ATP水解）]抑制剂、抗氧化剂、抗炎剂、代谢物、植物代谢物和抗衰老剂。它是一种3'-羟基黄酮、7-羟基黄酮醇和四羟基黄酮。它是非瑟酮(1-)的共轭酸。
据报道，非瑟酮存在于大豆、链霉菌和其他有相关数据的生物体中。
非瑟酮是一种口服生物利用度高的天然多酚，存在于许多水果和蔬菜中，具有潜在的抗氧化、神经保护、抗炎、抗肿瘤、清除衰老细胞和促进长寿的活性。作为一种抗氧化剂，非瑟酮在给药后可清除自由基，保护细胞免受氧化应激损伤，并能上调谷胱甘肽水平。它还能抑制促炎介质，例如肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6) 和核因子κB (NF-κB)。非瑟酮促进细胞代谢，延缓细胞衰老，调节sirtuin功能，并可能延长寿命。此外，非瑟酮还通过抑制某些信号通路发挥抗癌作用。它还能抑制某些抗凋亡蛋白，并诱导易感细胞凋亡。

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非瑟酮（Fustel；CCRIS-9034；NSC-407010）是一种天然黄酮醇，存在于水果（例如草莓、苹果）和蔬菜中，因其抗脂肪生成和抗癌特性而备受关注[1][2]
- 在脂肪生成过程中，非瑟酮通过上调SIRT1表达发挥作用，SIRT1抑制脂肪生成主调控因子（PPARγ、C/EBPα）的转录[1]
- 在前列腺癌中，非瑟酮通过与β-微管蛋白结合，破坏微管动力学，阻断G2/M期细胞周期进程，从而抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡[2]

C15H10O6

286.24

286.047

C, 62.94; H, 3.52; O, 33.54

528-48-3

Fisetin quarterhydrate;Fisetin (Standard);528-48-3

5281614

Light yellow to yellow solid powder

1.7±0.1 g/cm3

599.4±50.0 °C at 760 mmHg

330ºC

233.0±23.6 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.785

2.52

111.13

4

6

1

21

459

0

XHEFDIBZLJXQHF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H10O6/c16-8-2-3-9-12(6-8)21-15(14(20)13(9)19)7-1-4-10(17)11(18)5-7/h1-6,16-18,20H

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,7-dihydroxy-4H-chromen-4-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 10 mg/mL (34.94 mM) in 45% PEG300 5% Tween-80 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。