Fluorofenidone (AKF-PD; AKFPD)

别名: AKF-PDAKFPD; AKF PD; FLUOROFENIDONE; 848353-85-5; 2(1H)-Pyridinone, 1-(3-fluorophenyl)-5-methyl-; 1-(3-Fluorophenyl)-5-methylpyridin-2(1H)-one; 1-(3-fluorophenyl)-5-methylpyridin-2-one; AKF-PD; Fluorofenidone?; 1-(3-fluorophenyl)-5-methyl-pyridin-2-one; AMR69 analog; Fluorofenidone
目录号: V19873
氟非尼酮(AKF-PD;AKFPD)是 AMR69 的衍生物,是一种有前途的多功能抗纤维化吡啶酮药物,在肾间质纤维化的发病机制中通过 PI3K/Akt 途径作为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的有效抑制剂。
Fluorofenidone (AKF-PD; AKFPD) CAS号: 848353-85-5
产品类别: PI3K
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
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  • Fluorofenidone-d3
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产品描述
氟非尼酮(AKF-PD;AKFPD)是 AMR69 的衍生物,是一种有前景的多功能抗纤维化吡啶酮药物,通过 PI3K/Akt 途径作为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的有效抑制剂,抑制肾间质纤维化的发病机制。它通过 PI3K/Akt 信号通路抑制 NADPH 氧化酶和细胞外基质 (ECM) 沉积,部分减缓肾间质纤维化的发展。
生物活性&实验参考方法
靶点
PI3K/Akt
体外研究 (In Vitro)
AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II诱导的大鼠NRK-52E细胞中I型胶原(α1)的表达[1]
Ang II预处理也增加了I型胶原(α1)的蛋白表达,AKF-PD和氯沙坦治疗均以相似的速率减弱了I型胶原蛋白(α1,P<0.05)(图4B)。
AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II诱导的大鼠近端肾小管上皮(NRK-52E)细胞中ROS的形成[1]
首先进行实验,通过测量DCF发射的荧光来确定Ang II刺激的大鼠NRK-52E细胞产生ROS的时间过程(图3A)。Ang II诱导的ROS产生在60分钟时增加。然后,用Ang II加AKF-PD、氯沙坦或DPI处理24小时血清饥饿的细胞组,60分钟后测定DCF荧光。AKF-PD、氯沙坦和DPI均能减弱ROS的产生(P<0.01)。AKF-PD和氯沙坦治疗之间没有差异(图3B、C)。
AKF-PD氟非尼酮/抑制大鼠NRK-52E细胞中Nox 2亚基的表达[1]
单独用Ang II预处理细胞(24小时)可增加Nox1和Nox2的蛋白表达(P<0.01)(图4A)。DPI阻断Nox1和Nox2的表达(P<0.01),AKF-PD仅阻断Nox2的表达(P<0.05)。AKF-PD和氯沙坦之间没有差异。
AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II诱导的NRK-52E细胞Akt磷酸化[1]
研究了Akt对Ang II反应的时间过程。早在Ang II治疗后15分钟,就检测到p-Akt水平升高(图4C)。而与LY29004的PI3K抑制剂联合治疗阻断了p-Akt(p<0.01),AKF-PD和氯沙坦治疗显著降低了p-Akt水平(p<0.05),如图4(D)所示。AKF-PD、氯沙坦和LY29004之间没有差异(P>0.05)。
AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II处理的NRK-52E细胞中的PI3K/Akt信号通路[1]
用组成型表达PI3K活性形式的质粒(PI3K P110α-CAAX)转染NRK-52E细胞。瞬时转染的NRK-52E细胞显示p-Akt、p47phox、Nox2和I型胶原(α1)的表达增加,ROS的产生增加。AKF-PD的加入减少了ROS的形成(P<0.01,图5)和除Nox2外的所有蛋白质的表达。
体内研究 (In Vivo)
AKF-PD/氟非尼酮治疗减轻了载体治疗UUO大鼠的肾间质损伤和胶原沉积[1]
AKF-PD和氯沙坦的给药显著减轻了肾脏病理改变,这可以通过下调肾间质损伤指数来证明(图1A)。此外,AKF-PD和氯沙坦治疗也减少了肾小管间质损伤的量(P<0.05)。虽然UUO大鼠肾脏中胶原纤维的间质积聚增加,但AKF-PD和氯沙坦治疗都减弱了(P<0.05)胶原表达(图1B)。关于I型和III型胶原的特定沉积,在假手术大鼠肾脏血管周围观察到少量这两种胶原。尽管如此,受损的肾脏显示出相当高的胶原蛋白表达,AKF-PD和氯沙坦治疗均显著抑制了胶原蛋白的表达。
AKF-PD/氟非尼酮治疗减弱了载体治疗UUO大鼠肾脏中Nox酶活性和亚基表达[1]
与假手术大鼠相比,UUO大鼠的肾脏经历了氧化应激,NADPH氧化酶活性显著增加(图2A)。与UUO大鼠相比,AKF-PD和氯沙坦治疗改善了氧化酶活性的增加(P<0.05)。UUO大鼠肾脏四种Nox亚基,即Nox1、Nox2、p47phox和Nox4的蛋白水平升高(P<0.05);相反,UUO组和假手术组p22phox的表达水平没有变化(P>0.05)(图2B,C)。AKF-PD和氯沙坦治疗减弱了Nox2、p47phox和Nox4的表达(P<0.05),而不影响Nox1或p22phox的表达(P>0.05)。AKF-PD和氯沙坦之间没有统计学差异(P>0.05)(图2B,C)。
AKF-PD/氟非尼酮治疗减轻了载体治疗UUO大鼠肾脏的脂质过氧化[1]
与假手术大鼠相比,8-iso-PGF2a水平升高,脂质过氧化的证据也支持UUO大鼠肾脏氧化酶活性的增加。AKF-PD和氯沙坦治疗均能减弱8-iso-PGF2a的表达(P<0.05)(图2D)。AKF-PD和氯沙坦治疗组之间没有统计学差异(P>0.05)(图2D)。
AKF-PD/氟非尼酮降低纤维化肾脏中Akt磷酸化[1]
Akt的蛋白质印迹分析与UUO大鼠发生肾损伤一致,与假手术大鼠相比,p-Akt的显著出现证明了这一点。与未经治疗的UUO大鼠相比,AKF-PD或氯沙坦治疗确实抵消了P-Akt表达的增加(P<0.05)(图2E,F)。AKF-PD和氯沙坦治疗之间没有统计学差异(P<0.05)(图2F)。
细胞实验
细胞培养和治疗[1]
NRK-52E细胞购自ATCC。NRK-52E细胞在添加了5%FBS、链霉素(100μg/mL)和青霉素(100单位/mL)的DMEM中在37°C、5%CO2空气中培养。将细胞接种在6孔培养板上,在含有10%FBS的完全培养基中融合60-70%,持续24小时。治疗前一天,将细胞与无血清培养基孵育24小时,以同步细胞生长。最终Ang II浓度为10-7mol,以检查氟非尼酮/AKF-PD和氯沙坦对Ang II诱导的p-Akt、Nox1和Nox2表达的影响。细胞用氟芬尼酮/AKF-PD(2 mM)或氯沙坦(10-5 mol)处理24小时,与LY294002的PI3K抑制剂(25μM,细胞信号)或NADPH氧化酶抑制剂碘化二苯碘鎓(DPI)(10-7 mol)孵育1小时,随后在提取细胞蛋白之前用Ang II(10-7 mmol)诱导15分钟(p-Akt)和24小时(Nox1、Nox2、纤维连接蛋白和I型胶原(1a))。每个实验重复三次。
瞬时转染试验[1]
分别使用组成型表达PI3K活性形式的质粒(PI3K P110α-CAAX)。按照制造商提供的方案,使用Lipofectamine 2000试剂对细胞进行瞬时转染。然后,在用氟非尼酮/AKF-PD和氯沙坦处理24小时后,测量这些细胞组中ROS的产生(见下文)。每个实验重复三次。
完整细胞中ROS生成的测量[1]
通过使用微孔板读数器测量细胞可渗透DCFH-DA向DCF的氧化转化来确定细胞内ROS水平的变化。简而言之,将细胞接种到96孔板上,如上所述进行处理,用D-Hank's溶液洗涤,并在37°C下与DCFH-DA(10μM)在黑暗中孵育20分钟。然后将细胞在PBS中洗涤,脱毒并重新悬浮在100μL PBS中。测量2′,7′-二氢荧光素氧化产生的细胞ROS(激发:488nm;发射:515至540nm)。荧光数据表示为未处理样品的百分比增加。 此外,将转染的NRK-52E细胞接种到50mm培养皿上,并如上所述进行处理。在PBS溶液中洗涤后,细胞在37°C下与DCFH-DA(10 mM)在黑暗中孵育20分钟。使用FACS卡尺通过流式细胞术分析评估细胞可渗透DCFH-DA向荧光DCF的氧化转化。通过ModFit LT软件评估荧光强度的百分比。荧光数据表示为未处理样品的百分比增加。每个实验进行三次。
动物实验
动物及氟非尼酮治疗[1]
共28只雄性Sprague-Dawley大鼠(体重220-250g)被随机分为四组,每组7只,具体如下:(i)单侧输尿管梗阻(UUO)组,给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)治疗(简称UUO);(ii)UUO组,给予500 mg/kg/天氟非尼酮/AKF-PD治疗(简称UUO + AKF-PD);(iii)UUO组,给予20 mg/kg/天氯沙坦治疗(简称UUO + 氯沙坦);(iv)假手术组,给予0.5% CMC-Na治疗(简称假手术组)。所有大鼠均于术后第14天处死,并去除左肾包膜。UUO手术方法参考Le Tulzo Y SR等17
参考文献

[1]. Fluorofenidone inhibits nicotinamide adeninedinucleotide phosphate oxidase via PI3K/Akt pathway in the pathogenesis of renal interstitial fibrosis. Nephrology (Carlton). 2013 Oct;18(10):690-9.

[2]. Design, synthesis and antifibrotic activities of carbohydrate-modified 1-(substituted aryl)-5-trifluoromethyl-2(1H) pyridones. Molecules. 2012 Jan 17;17(1):884-96.

其他信息
目的:氧化应激在肾间质纤维化的进展中起着重要作用。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(Nox)家族被认为是活性氧(ROS)的主要来源之一。本研究旨在探讨一种新型抗纤维化药物氟非尼酮(AKF-PD)对Nox介导的氧化应激和细胞外基质(ECM)沉积在肾间质纤维化发展过程中的抑制作用。方法:采用AKF-PD治疗单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠梗阻性肾病模型中的肾纤维化。通过免疫印迹或免疫组织化学方法检测Nox同源物、磷酸化Akt(p-Akt)、I型和III型胶原的表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定8-异前列腺素F2α(8-Iso PGF2α)的水平。此外,本研究还检测了血管紧张素II(Ang II)刺激的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)培养物中活性氧(ROS)以及I型胶原蛋白(1a)、Nox亚基和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果显示,AKF-PD治疗显著减轻了纤维化大鼠肾脏的肾小管间质损伤、细胞外基质(ECM)沉积和氧化应激。此外,AKF-PD抑制了Ang II刺激的NRK-52E细胞中ROS、I型胶原蛋白(1a)、Nox2和p-Akt的表达。结论:AKF-PD部分通过PI3K/Akt信号通路抑制NADPH氧化酶和ECM沉积,从而减缓肾间质纤维化的进展,提示AKF-PD可能是一种治疗肾纤维化的新型潜在药物。 [1]吡非尼酮是一种吡啶酮类化合物,是一种高效且新型的抗纤维化药物。本文描述了新型抗纤维化药物——糖基修饰的1-(取代芳基)-5-三氟甲基-2(1H)吡啶酮的设计、合成和活性评价。大多数目标化合物的抑制活性与氟非尼酮相当或更优。值得注意的是,化合物19a对NIH 3T3细胞表现出最高的细胞抑制活性(IC50 = 0.17 mM)。[2]总之,我们报道了一些糖基修饰的1-(取代芳基)-5-三氟甲基-2(1H)吡啶酮的设计、合成和生物学评价。我们的研究表明,用糖基修饰吡非尼酮类似物似乎可以增强其对NIH 3T3细胞增殖的抑制活性。在所测试的化合物中,由吡非尼酮类似物 19 与葡萄糖修饰合成的化合物 19a 表现出最高的细胞抑制活性(IC50 = 0.17 mM)。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C12H10FNO
分子量
203.2164
精确质量
203.075
元素分析
C, 70.93; H, 4.96; F, 9.35; N, 6.89; O, 7.87
CAS号
848353-85-5
相关CAS号
Fluorofenidone-d3
PubChem CID
11851183
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
2.285
tPSA
22
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
2
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
15
分子复杂度/Complexity
322
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C1N(C2C=C(F)C=CC=2)C=C(C)C=C1
InChi Key
JDZYVVUJIQYGRX-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C12H10FNO/c1-9-5-6-12(15)14(8-9)11-4-2-3-10(13)7-11/h2-8H,1H3
化学名
1-(3-fluorophenyl)-5-methylpyridin-2-one
别名
AKF-PDAKFPD; AKF PD; FLUOROFENIDONE; 848353-85-5; 2(1H)-Pyridinone, 1-(3-fluorophenyl)-5-methyl-; 1-(3-Fluorophenyl)-5-methylpyridin-2(1H)-one; 1-(3-fluorophenyl)-5-methylpyridin-2-one; AKF-PD; Fluorofenidone?; 1-(3-fluorophenyl)-5-methyl-pyridin-2-one; AMR69 analog; Fluorofenidone
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~140 mg/mL (~688.9 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.33 mg/mL (11.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 23.3 mg/mL的澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中并混合均匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.33 mg/mL (11.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 23.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.33 mg/mL (11.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 23.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 4.9208 mL 24.6039 mL 49.2078 mL
5 mM 0.9842 mL 4.9208 mL 9.8416 mL
10 mM 0.4921 mL 2.4604 mL 4.9208 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • Different concentrations of test compounds and fluorofenidone were added to the medium, and DMSO was used as a solvent for the test compounds and fluorofenidone, which were applied at a final concentration of 0.1% (v/v) in cell culture medium. Molecules . 2012 Jan 17;17(1):884-96.
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