| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PI3K/Akt
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| 体外研究 (In Vitro) |
AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II诱导的大鼠NRK-52E细胞中I型胶原(α1)的表达[1]
Ang II预处理也增加了I型胶原(α1)的蛋白表达,AKF-PD和氯沙坦治疗均以相似的速率减弱了I型胶原蛋白(α1,P<0.05)(图4B)。 AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II诱导的大鼠近端肾小管上皮(NRK-52E)细胞中ROS的形成[1] 首先进行实验,通过测量DCF发射的荧光来确定Ang II刺激的大鼠NRK-52E细胞产生ROS的时间过程(图3A)。Ang II诱导的ROS产生在60分钟时增加。然后,用Ang II加AKF-PD、氯沙坦或DPI处理24小时血清饥饿的细胞组,60分钟后测定DCF荧光。AKF-PD、氯沙坦和DPI均能减弱ROS的产生(P<0.01)。AKF-PD和氯沙坦治疗之间没有差异(图3B、C)。 AKF-PD氟非尼酮/抑制大鼠NRK-52E细胞中Nox 2亚基的表达[1] 单独用Ang II预处理细胞(24小时)可增加Nox1和Nox2的蛋白表达(P<0.01)(图4A)。DPI阻断Nox1和Nox2的表达(P<0.01),AKF-PD仅阻断Nox2的表达(P<0.05)。AKF-PD和氯沙坦之间没有差异。 AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II诱导的NRK-52E细胞Akt磷酸化[1] 研究了Akt对Ang II反应的时间过程。早在Ang II治疗后15分钟,就检测到p-Akt水平升高(图4C)。而与LY29004的PI3K抑制剂联合治疗阻断了p-Akt(p<0.01),AKF-PD和氯沙坦治疗显著降低了p-Akt水平(p<0.05),如图4(D)所示。AKF-PD、氯沙坦和LY29004之间没有差异(P>0.05)。 AKF-PD/氟非尼酮抑制Ang II处理的NRK-52E细胞中的PI3K/Akt信号通路[1] 用组成型表达PI3K活性形式的质粒(PI3K P110α-CAAX)转染NRK-52E细胞。瞬时转染的NRK-52E细胞显示p-Akt、p47phox、Nox2和I型胶原(α1)的表达增加,ROS的产生增加。AKF-PD的加入减少了ROS的形成(P<0.01,图5)和除Nox2外的所有蛋白质的表达。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
AKF-PD/氟非尼酮治疗减轻了载体治疗UUO大鼠的肾间质损伤和胶原沉积[1]
AKF-PD和氯沙坦的给药显著减轻了肾脏病理改变,这可以通过下调肾间质损伤指数来证明(图1A)。此外,AKF-PD和氯沙坦治疗也减少了肾小管间质损伤的量(P<0.05)。虽然UUO大鼠肾脏中胶原纤维的间质积聚增加,但AKF-PD和氯沙坦治疗都减弱了(P<0.05)胶原表达(图1B)。关于I型和III型胶原的特定沉积,在假手术大鼠肾脏血管周围观察到少量这两种胶原。尽管如此,受损的肾脏显示出相当高的胶原蛋白表达,AKF-PD和氯沙坦治疗均显著抑制了胶原蛋白的表达。 AKF-PD/氟非尼酮治疗减弱了载体治疗UUO大鼠肾脏中Nox酶活性和亚基表达[1] 与假手术大鼠相比,UUO大鼠的肾脏经历了氧化应激,NADPH氧化酶活性显著增加(图2A)。与UUO大鼠相比,AKF-PD和氯沙坦治疗改善了氧化酶活性的增加(P<0.05)。UUO大鼠肾脏四种Nox亚基,即Nox1、Nox2、p47phox和Nox4的蛋白水平升高(P<0.05);相反,UUO组和假手术组p22phox的表达水平没有变化(P>0.05)(图2B,C)。AKF-PD和氯沙坦治疗减弱了Nox2、p47phox和Nox4的表达(P<0.05),而不影响Nox1或p22phox的表达(P>0.05)。AKF-PD和氯沙坦之间没有统计学差异(P>0.05)(图2B,C)。 AKF-PD/氟非尼酮治疗减轻了载体治疗UUO大鼠肾脏的脂质过氧化[1] 与假手术大鼠相比,8-iso-PGF2a水平升高,脂质过氧化的证据也支持UUO大鼠肾脏氧化酶活性的增加。AKF-PD和氯沙坦治疗均能减弱8-iso-PGF2a的表达(P<0.05)(图2D)。AKF-PD和氯沙坦治疗组之间没有统计学差异(P>0.05)(图2D)。 AKF-PD/氟非尼酮降低纤维化肾脏中Akt磷酸化[1] Akt的蛋白质印迹分析与UUO大鼠发生肾损伤一致,与假手术大鼠相比,p-Akt的显著出现证明了这一点。与未经治疗的UUO大鼠相比,AKF-PD或氯沙坦治疗确实抵消了P-Akt表达的增加(P<0.05)(图2E,F)。AKF-PD和氯沙坦治疗之间没有统计学差异(P<0.05)(图2F)。 |
| 细胞实验 |
细胞培养和治疗[1]
NRK-52E细胞购自ATCC。NRK-52E细胞在添加了5%FBS、链霉素(100μg/mL)和青霉素(100单位/mL)的DMEM中在37°C、5%CO2空气中培养。将细胞接种在6孔培养板上,在含有10%FBS的完全培养基中融合60-70%,持续24小时。治疗前一天,将细胞与无血清培养基孵育24小时,以同步细胞生长。最终Ang II浓度为10-7mol,以检查氟非尼酮/AKF-PD和氯沙坦对Ang II诱导的p-Akt、Nox1和Nox2表达的影响。细胞用氟芬尼酮/AKF-PD(2 mM)或氯沙坦(10-5 mol)处理24小时,与LY294002的PI3K抑制剂(25μM,细胞信号)或NADPH氧化酶抑制剂碘化二苯碘鎓(DPI)(10-7 mol)孵育1小时,随后在提取细胞蛋白之前用Ang II(10-7 mmol)诱导15分钟(p-Akt)和24小时(Nox1、Nox2、纤维连接蛋白和I型胶原(1a))。每个实验重复三次。 瞬时转染试验[1] 分别使用组成型表达PI3K活性形式的质粒(PI3K P110α-CAAX)。按照制造商提供的方案,使用Lipofectamine 2000试剂对细胞进行瞬时转染。然后,在用氟非尼酮/AKF-PD和氯沙坦处理24小时后,测量这些细胞组中ROS的产生(见下文)。每个实验重复三次。 完整细胞中ROS生成的测量[1] 通过使用微孔板读数器测量细胞可渗透DCFH-DA向DCF的氧化转化来确定细胞内ROS水平的变化。简而言之,将细胞接种到96孔板上,如上所述进行处理,用D-Hank's溶液洗涤,并在37°C下与DCFH-DA(10μM)在黑暗中孵育20分钟。然后将细胞在PBS中洗涤,脱毒并重新悬浮在100μL PBS中。测量2′,7′-二氢荧光素氧化产生的细胞ROS(激发:488nm;发射:515至540nm)。荧光数据表示为未处理样品的百分比增加。 此外,将转染的NRK-52E细胞接种到50mm培养皿上,并如上所述进行处理。在PBS溶液中洗涤后,细胞在37°C下与DCFH-DA(10 mM)在黑暗中孵育20分钟。使用FACS卡尺通过流式细胞术分析评估细胞可渗透DCFH-DA向荧光DCF的氧化转化。通过ModFit LT软件评估荧光强度的百分比。荧光数据表示为未处理样品的百分比增加。每个实验进行三次。 |
| 动物实验 |
动物及氟非尼酮治疗[1]
共28只雄性Sprague-Dawley大鼠(体重220-250g)被随机分为四组,每组7只,具体如下:(i)单侧输尿管梗阻(UUO)组,给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)治疗(简称UUO);(ii)UUO组,给予500 mg/kg/天氟非尼酮/AKF-PD治疗(简称UUO + AKF-PD);(iii)UUO组,给予20 mg/kg/天氯沙坦治疗(简称UUO + 氯沙坦);(iv)假手术组,给予0.5% CMC-Na治疗(简称假手术组)。所有大鼠均于术后第14天处死,并去除左肾包膜。UUO手术方法参考Le Tulzo Y SR等17。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
目的:氧化应激在肾间质纤维化的进展中起着重要作用。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(Nox)家族被认为是活性氧(ROS)的主要来源之一。本研究旨在探讨一种新型抗纤维化药物氟非尼酮(AKF-PD)对Nox介导的氧化应激和细胞外基质(ECM)沉积在肾间质纤维化发展过程中的抑制作用。方法:采用AKF-PD治疗单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠梗阻性肾病模型中的肾纤维化。通过免疫印迹或免疫组织化学方法检测Nox同源物、磷酸化Akt(p-Akt)、I型和III型胶原的表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定8-异前列腺素F2α(8-Iso PGF2α)的水平。此外,本研究还检测了血管紧张素II(Ang II)刺激的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)培养物中活性氧(ROS)以及I型胶原蛋白(1a)、Nox亚基和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果显示,AKF-PD治疗显著减轻了纤维化大鼠肾脏的肾小管间质损伤、细胞外基质(ECM)沉积和氧化应激。此外,AKF-PD抑制了Ang II刺激的NRK-52E细胞中ROS、I型胶原蛋白(1a)、Nox2和p-Akt的表达。结论:AKF-PD部分通过PI3K/Akt信号通路抑制NADPH氧化酶和ECM沉积,从而减缓肾间质纤维化的进展,提示AKF-PD可能是一种治疗肾纤维化的新型潜在药物。 [1]吡非尼酮是一种吡啶酮类化合物,是一种高效且新型的抗纤维化药物。本文描述了新型抗纤维化药物——糖基修饰的1-(取代芳基)-5-三氟甲基-2(1H)吡啶酮的设计、合成和活性评价。大多数目标化合物的抑制活性与氟非尼酮相当或更优。值得注意的是,化合物19a对NIH 3T3细胞表现出最高的细胞抑制活性(IC50 = 0.17 mM)。[2]总之,我们报道了一些糖基修饰的1-(取代芳基)-5-三氟甲基-2(1H)吡啶酮的设计、合成和生物学评价。我们的研究表明,用糖基修饰吡非尼酮类似物似乎可以增强其对NIH 3T3细胞增殖的抑制活性。在所测试的化合物中,由吡非尼酮类似物 19 与葡萄糖修饰合成的化合物 19a 表现出最高的细胞抑制活性(IC50 = 0.17 mM)。[2]
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| 分子式 |
C12H10FNO
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|---|---|
| 分子量 |
203.2164
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| 精确质量 |
203.075
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| 元素分析 |
C, 70.93; H, 4.96; F, 9.35; N, 6.89; O, 7.87
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| CAS号 |
848353-85-5
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| 相关CAS号 |
Fluorofenidone-d3
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| PubChem CID |
11851183
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
2.285
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| tPSA |
22
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
15
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| 分子复杂度/Complexity |
322
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1N(C2C=C(F)C=CC=2)C=C(C)C=C1
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| InChi Key |
JDZYVVUJIQYGRX-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H10FNO/c1-9-5-6-12(15)14(8-9)11-4-2-3-10(13)7-11/h2-8H,1H3
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| 化学名 |
1-(3-fluorophenyl)-5-methylpyridin-2-one
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| 别名 |
AKF-PDAKFPD; AKF PD; FLUOROFENIDONE; 848353-85-5; 2(1H)-Pyridinone, 1-(3-fluorophenyl)-5-methyl-; 1-(3-Fluorophenyl)-5-methylpyridin-2(1H)-one; 1-(3-fluorophenyl)-5-methylpyridin-2-one; AKF-PD; Fluorofenidone?; 1-(3-fluorophenyl)-5-methyl-pyridin-2-one; AMR69 analog; Fluorofenidone
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~140 mg/mL (~688.9 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.33 mg/mL (11.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 23.3 mg/mL的澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中并混合均匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.33 mg/mL (11.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 23.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.33 mg/mL (11.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.9208 mL | 24.6039 mL | 49.2078 mL | |
| 5 mM | 0.9842 mL | 4.9208 mL | 9.8416 mL | |
| 10 mM | 0.4921 mL | 2.4604 mL | 4.9208 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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