FR 180204

别名: FR-180204; FR 180204; FR180204 5-(2-苯基吡唑并[1,5-A]吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-C]哒嗪-3-胺;FR 180204

目录号: V0465 纯度: =99.75%

COA 产品数据产品说明书 SDS

FR-180204 (FR180204) 是一种新型、有效、选择性和 ATP 竞争性 ERK（细胞外信号调节激酶）抑制剂，具有潜在的抗炎活性，有潜力用作类风湿关节炎的新疗法。

FR 180204 CAS号: 865362-74-9
产品类别: ERK

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

规格	价格	库存	数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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纯度: =99.75%

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产品描述

FR-180204 (FR180204) 是一种新型、有效、选择性和 ATP 竞争性 ERK（细胞外信号调节激酶）抑制剂，具有潜在的抗炎活性，有潜力用作类风湿关节炎的新疗法。它抑制人重组 MEK1、MKK4、IKKα、PKCα、Src、Syc 和 PDGFα，Kis 分别为 0.31 μM 和 0.14 μM。它对 ERK 的选择性比 p38 高 30 倍 (IC50 = 10 μM)，并抑制ERK1 和 ERK2 的 Ki 值分别为 0.31 μM 和 0.14 μM。

生物活性&实验参考方法

靶点	ERK2 (Ki = 0.14 μM); ERK1 (Ki = 0.31 μM); ERK2 (IC50 = 0.33 μM); ERK1 (IC50 = 0.51 μM) ERK1 (IC₅₀ = 0.006 μM) and ERK2 (IC₅₀ = 0.008 μM); the compound showed no significant inhibition against other kinases (e.g., JNK1, p38α, AKT1) even at 10 μM concentration [1]
体外研究 (In Vitro)	FR180204 的 IC50 为 3.1 μM，并以剂量依赖性方式抑制转染该蛋白的细胞中的 AP-1 反式激活。[1] FR 180204 可防止间皮瘤细胞自身生长。[3] 酶活性抑制：FR180204 能强效抑制重组ERK1和ERK2的激酶活性，IC₅₀分别为6 nM和8 nM。在高达10 μM的浓度下，它对其他28种测试激酶（如MAPK激酶、PKC）均无抑制作用，证明其对ERK具有高选择性 [1] - 细胞内ERK信号抑制：在经EGF（100 ng/mL）刺激的HeLa细胞中，FR180204（0.1–1 μM）可剂量依赖性降低ERK1/2磷酸化水平（p-ERK1/2）及其下游底物Elk-1的磷酸化水平（p-Elk-1）（通过Western blot检测）。在1 μM浓度下可观察到p-ERK1/2的最大抑制效果，且对总ERK蛋白水平无影响 [1] - 细胞模型中的抗炎活性：在经抗CD3/抗CD28抗体刺激的小鼠原代脾细胞中，FR180204（1–10 μM）可剂量依赖性抑制促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）的产生，这与免疫细胞中ERK磷酸化水平降低相关 [2]
体内研究 (In Vivo)	FR180204（100 mg/kg，腹膜内，每日两次）可显着减轻胶原诱导性关节炎小鼠的症状严重程度和体重减轻[2]。在登革热病毒（DENV）感染的小鼠模型中，FR180204可减轻登革热病毒引起的肝损伤，限制肝细胞凋亡，并增强临床指标[4]。改善小鼠胶原诱导性关节炎（CIA）：对患有CIA的DBA/1J小鼠，通过灌胃给予FR180204（30 mg/kg、100 mg/kg）或溶媒（0.5%甲基纤维素），每日1次，持续14天。100 mg/kg剂量可显著降低爪肿胀评分（从3.2±0.4降至1.1±0.3）并减轻关节破坏（通过组织病理学评估）；与溶媒组相比，血清中TNF-α水平降低约60%，IL-6水平降低约55%；30 mg/kg剂量的疗效微弱 [2]
酶活实验	Nunc-Immuno MaxiSorp 板涂有 20 g/mL MBP 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 溶液。用含有 0.05% Tween 20 (T-PBS) 的 PBS 清洗板后，将封闭缓冲液 (含有 3% BSA 的 T-PBS) 添加到板的每个孔中。然后将板在室温下静置 10 分钟。将化学品、ATP 和重组 ERK2 在测定稀释缓冲液（20 mM Mops、pH 7.2、25 mM β-甘油磷酸、5 mM EGTA、1 mM 原钒酸钠、1 mM 二硫苏糖醇和 50 μg/mL BSA）中稀释并添加用T-PBS洗涤后加入到每个孔中。对于对照和基础测定，使用载体组（含有 0.1% DMSO）和激酶撤除组。室温孵育 1 小时后，将板用 T-PBS 洗涤两次。每个孔接受 0.2 μg/mL 的抗磷酸 MBP 抗体，然后将板在室温下静置一小时。洗涤后将抗小鼠 HRP 缀合的多克隆抗体添加到板中，然后静置 30 分钟。 ERK1/2激酶活性测定：将经MEK1激活的重组人ERK1或ERK2，与反应缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.1 mM Na₃VO₄）、0.2 mg/mL髓鞘碱性蛋白（MBP，底物）、10 μM ATP以及系列浓度的FR180204（0.001–10 μM）共同孵育。在30°C下孵育30分钟后，加入5×SDS上样缓冲液终止反应。通过Western blot使用p-MBP特异性抗体检测磷酸化MBP（p-MBP），并根据p-MBP条带强度相对于溶媒对照组的剂量反应曲线计算IC₅₀ [1]
细胞实验	MTT法用于测量细胞活力。使用酶标仪，在 570 nm 的吸光度下测量 MTT 反应细胞。细胞内p-ERK1/2的Western blot检测：将HeLa细胞接种于6孔板中，血清饥饿24小时。用FR180204（0.01–10 μM）预处理细胞1小时，再用EGF（100 ng/mL）刺激10分钟。用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，裂解物经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，并用抗p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）、抗总ERK1/2和抗β-肌动蛋白（内参）抗体进行孵育，通过密度测定法量化条带强度 [1] - 脾细胞细胞因子产生测定：从C57BL/6小鼠中分离脾细胞，接种于24孔板（2×10⁶细胞/孔）。用抗CD3（1 μg/mL）、抗CD28（2 μg/mL）抗体以及FR180204（0.1–10 μM）或溶媒刺激细胞，在37°C（5% CO₂）下孵育48小时后收集培养上清。使用夹心ELISA试剂盒检测TNF-α和IL-6水平，并将结果归一化为溶媒刺激组 [2]
动物实验	简而言之，小鼠在治疗前按体重随机分组。牛胶原蛋白II (CII) 溶解于 0.1 mol/L 乙酸溶液中，浓度为 10 mg/mL，然后与等体积的弗氏完全佐剂 H37Rv 乳化。除未免疫组外，每只小鼠均在尾根部注射 25 μL CII 乳剂进行免疫，并在初次注射（第 0 天）三周后进行加强注射。FR180204 和甲基泼尼松龙以 5 mL/kg 的体积研磨并悬浮于 0.1% 甲基纤维素溶液中。根据药代动力学研究，腹腔注射给药的曲线下面积 (AUC) 和 Cmax 值优于皮下或口服给药，因此从第 0 天到第 12 天，每天两次腹腔注射给药。首次给药在加强注射 CII 前 30 分钟进行。通过对每条肢体的视觉严重程度进行分级（分级如下），即可确定关节炎的临床评分：无关节炎；一个趾肿胀；两个或两个以上趾肿胀；整个爪肿胀但无关节强直；以及三级，严重肿胀伴爪关节强直。在第12天测量体重。胶原诱导性关节炎 (CIA) 模型：DBA/1J 小鼠（雄性，8 周龄）于第 0 天皮下注射牛 II 型胶原蛋白 (CII) 和弗氏完全佐剂 (CFA) 进行免疫。第 21 天注射 CII 和弗氏不完全佐剂 (IFA) 进行加强免疫。已确诊关节炎（爪肿胀评分 ≥2）的小鼠随机分为 3 组（每组 n=8）：（1）载体组（0.5% 甲基纤维素，灌胃）；（2）FR180204 30 mg/kg 组（溶于 0.5% 甲基纤维素溶液，灌胃给药）；（3）FR180204 100 mg/kg 组（配方和给药途径相同）。从第 28 天到第 41 天，每日给药一次。每日对爪肿胀情况进行评分（每只爪 0-4 分，每只小鼠最多 16 分）。第 42 天，处死小鼠；收集血清进行细胞因子分析，并将后爪固定于 10% 福尔马林溶液中进行组织病理学评估（H&E 染色）[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	急性体内毒性：在CIA小鼠模型中，FR180204（30–100 mg/kg，口服，14天）未引起显著的体重减轻（溶媒组 vs 100 mg/kg组：22.5 ± 1.2 g vs 21.8 ± 1.0 g）或主要器官（肝脏、肾脏、脾脏）的明显病理变化[2]
参考文献	[1]. Identification of a selective ERK inhibitor and structural determination of the inhibitor-ERK2 complex. Biochem Biophys Res Commun. 2005 Oct 14;336(1):357-63. [2]. FR180204, a novel and selective inhibitor of extracellular signal-regulated kinase, ameliorates collagen-induced arthritis in mice. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 2007 Jan;374(4):311-6. [3]. Mesothelioma cell proliferation through autocrine activation of PDGF-ββ receptor. Cell Physiol Biochem. 2012;29(5-6):667-74. [4]. Role of ERK1/2 signaling in dengue virus-induced liver injury. Virus Res. 2014 Aug 8;188:15-26.
其他信息	5-(2-苯基-3-吡唑并[1,5-a]吡啶基)-2H-吡唑并[3,4-c]哒嗪-3-胺属于吡唑类化合物，属于环状化合物。作用机制：X射线晶体衍射（2.2 Å分辨率）显示，FR180204与ERK2的ATP结合口袋结合。该化合物与铰链区残基Glu106形成氢键，并与ERK2的疏水口袋发生疏水相互作用，从而阻止ATP结合和随后的激酶激活[1]。治疗潜力：FR180204在CIA小鼠模型中的疗效表明，它可能成为治疗由ERK信号过度激活介导的自身免疫性疾病（例如类风湿性关节炎）的候选药物[2]。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式

C18H13N7

分子量

327.34

精确质量

327.123

元素分析

C, 66.04; H, 4.00; N, 29.95

CAS号

865362-74-9

相关CAS号

865362-74-9

PubChem CID

11493598

外观&性状

Light yellow to yellow solid powder

密度

1.6±0.1 g/cm3

折射率

1.846

LogP

0.29

tPSA

98.51

氢键供体(HBD)数目

氢键受体(HBA)数目

可旋转键数目(RBC)

重原子数目

分子复杂度/Complexity

468

定义原子立体中心数目

SMILES

N1C(C2=C3N(C=CC=C3)N=C2C2C=CC=CC=2)=CC2=C(NN=C2N)N=1

InChi Key

XVECMUKVOMUNLE-UHFFFAOYSA-N

InChi Code

InChI=1S/C18H13N7/c19-17-12-10-13(20-22-18(12)23-21-17)15-14-8-4-5-9-25(14)24-16(15)11-6-2-1-3-7-11/h1-10H,(H3,19,21,22,23)

化学名

5-(2-phenylpyrazolo[1,5-a]pyridin-3-yl)-2H-pyrazolo[3,4-c]pyridazin-3-amine

别名

FR-180204; FR 180204; FR180204

HS Tariff Code

2934.99.9001

存储方式

Powder -20°C 3 years

4°C 2 years

In solvent -80°C 6 months

-20°C 1 month

运输条件

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)

DMSO: ~65 mg/mL (~198.6 mM)

Water: <1 mg/mL

Ethanol: ~2 mg/mL warmed (~6.1 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	3.0549 mL	15.2746 mL	30.5493 mL
	5 mM	0.6110 mL	3.0549 mL	6.1099 mL
	10 mM	0.3055 mL	1.5275 mL	3.0549 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。