GDC-0349 (RG7603)

mTOR (Ki = 3.8 nM); PI3Kα (Ki = 3 μM); mTORC1; mTORC2; Autophagy

GDC-0349 对 266 种激酶（包括 PI3K 的所有亚型）具有显着的选择性。 [1]在小鼠体内 PK/PD 研究中，GDC-0349 抑制下游 mTOR 标记物，如磷酸化 4EBP1 和磷酸化 Akt (S473)，这与 mTORC1 和 mTORC2 复合物的抑制作用一致。 [1]

GDC-0349 在小鼠异种移植癌症模型中表现出剂量依赖性功效和通路调节。在无胸腺小鼠（PI3K 突变）的 MCF7-neo/Her2 肿瘤异种移植模型中，GDC-0349 以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长。此外，它在其他异种移植模型中也表现良好，例如 PC3（PTEN 缺失）和 786-O（VHL 突变体）。 [1]

为了测量 mTOR 酶的激酶活性，将纯化的重组酶（mTOR(1360-2549)+GBL，内部制造）与 ATP、MnCl2 和荧光标记的 mTOR 底物（例如 GFP-4E-BP1）一起孵育。添加铽标记的磷酸特异性抗体（例如铽标记的抗 p4E-BP1 T37/T46、EDTA 和 TR-FRET 缓冲溶液）可终止反应。产物形成通过时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 进行检测，当磷酸化底物和标记抗体由于磷酸特异性结合而非常接近时，就会发生这种情况。使用 Perkin Elmer Envision 酶标仪，酶活性可通过 TR-FRET 信号的上升进行量化。该测定是在 384 孔 Proxiplate Plus 中使用以下方案进行的：用于测试化合物活性的 10 点剂量曲线从最高最终浓度 10 uM 开始。在用测定缓冲液进一步稀释之前，将它们在 100% DMSO 中连续稀释。反应混合物 (8μL) 含有 0.25 nM mTOR+GBL 酶、400 nM GFP-4E-BP1、8 uM ATP、50 mM Hepes pH 7.5、0.01% Tween 20、10 mM MnCl2、1 mM EGTA、1 mM DTT、1 % DMSO（±化合物）在室温下孵育 30 分钟。然后添加 8 μL 含有 2 nM Tb-抗-p4E-BP1 抗体和 10 mM EDTA 稀释 TR-FRET 缓冲液的溶液，并孵育 30 分钟以终止反应。使用 Envision 读板器扫描该板。 Ki 值是在 Assay Explorer 中使用 Morrison ATP 竞争性紧密结合方程计算的，用于 Ki 表观测定[1]。

Mice: Human breast cancer cells (MCF7 neo/HER2; modified ATCC variant) are implanted subcutaneously into the mammary fat pad of female NCR nude mice (5×106 cells/100 uL of 1:1 mixture of Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS)/Matrigel). Animal recipients are pre-implanted with pellets containing 0.36 mg of estrogen to support estrogen-dependent growth. Prior to being randomly assigned to treatment cohorts (n=5–10), tumors are monitored until they reach a mean tumor volume of roughly 200–225 mm3. Human 786-O renal adenocarcinoma cells are implanted subcutaneously into the right hind flank of female nu/nu mice (1×107 cells/200 uL in 1:1 PBS/Matrigel). Tumors are monitored until they reached a mean tumor volume of approximately 205 mm3, then similarly sized tumors are randomly assigned to treatment cohorts (n=10). Human prostate cancer NCI-PC3 cells are resuspended in Hank’s Balanced Salt Solution and implanted subcutaneously into the right hind flanks of 120 female NCR nude mice. Each mouse is injected with 5×106 cells. Tumors are monitored until they reached a mean tumor volume of approximately 200-250 mm3. The dimesylate salt of GDC-0349 is dosed daily or every third day by oral gavage (100 uL dose /25 gm animal) for 14-21 days.Tumor volume and body weight measurements are collected twice weekly. Tumor volumes are calculated.

[1]. J Med Chem . 2013 Apr 11;56(7):3090-101.

C24H32N6O3

452.54928

452.25359

C, 63.70; H, 7.13; N, 18.57; O, 10.61

1207360-89-1

1207360-89-1

Solid powder

O=C(NCC)NC(C=C1)=CC=C1C2=NC3=C(CCN(C4COC4)C3)C(N5[C@@H](C)COCC5)=N2

RGJOJUGRHPQXGF-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C24H32N6O3/c1-3-25-24(31)26-18-6-4-17(5-7-18)22-27-21-12-29(19-14-33-15-19)9-8-20(21)23(28-22)30-10-11-32-13-16(30)2/h4-7,16,19H,3,8-15H2,1-2H3,(H2,25,26,31)/t16-/m0/s1

1-ethyl-3-[4-[4-[(3S)-3-methylmorpholin-4-yl]-7-(oxetan-3-yl)-6,8-dihydro-5H-pyrido[3,4-d]pyrimidin-2-yl]phenyl]urea

RG-7603; RG7603; G 7603; GDC0349; GDC 0349; GDC-0349

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~91 mg/mL (~201.1 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~6 mg/mL (~13.3 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。