| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mTOR (Ki = 3.8 nM); PI3Kα (Ki = 3 μM); mTORC1; mTORC2; Autophagy
GDC-0349 (RG7603) is a potent, ATP-competitive inhibitor of mammalian target of rapamycin (mTOR), with dual activity against both mTOR complex 1 (mTORC1) and mTOR complex 2 (mTORC2). It exhibits an IC50 of 1.6 nM for recombinant human mTOR kinase (active form). It shows high selectivity over the PI3K family: IC50 > 1000 nM for PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, and PI3Kδ; and >500 nM for other AGC kinases (e.g., Akt1, PKA), confirming mTOR-specific inhibition [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
GDC-0349 对 266 种激酶（包括 PI3K 的所有亚型）具有显着的选择性。 [1]在小鼠体内 PK/PD 研究中，GDC-0349 抑制下游 mTOR 标记物，如磷酸化 4EBP1 和磷酸化 Akt (S473)，这与 mTORC1 和 mTORC2 复合物的抑制作用一致。 [1]
激酶活性抑制：GDC-0349 (RG7603) 呈剂量依赖性抑制mTORC1和mTORC2活性。在过表达mTOR复合物的HEK293T细胞中，10 nM GDC-0349 (RG7603) 可抑制mTORC1介导的S6K1（Thr389）磷酸化92%，抑制mTORC2介导的Akt（Ser473）磷酸化88%；对PI3Kα的抑制率≤4%（1000 nM时），对其他脱靶激酶无显著抑制 [1] - 抗增殖活性：GDC-0349 (RG7603) 对多种人肿瘤细胞系具有抗增殖作用，IC50范围为0.5 μM-3.2 μM：MCF-7乳腺癌细胞（IC50=0.8 μM）、A549肺癌细胞（IC50=1.5 μM）、PC-3前列腺癌细胞（IC50=1.2 μM）、HCT116结直肠癌细胞（IC50=2.7 μM）（SRB实验，72小时）。Western blot显示，1-5 μM GDC-0349 (RG7603) 处理24小时，可使上述细胞系中p-S6K1（Thr389）降低75%-90%、p-Akt（Ser473）降低70%-85%、p-4E-BP1（Thr37/46）降低65%-80% [1] - 细胞周期阻滞：2 μM GDC-0349 (RG7603) 处理48小时可诱导MCF-7细胞G1期阻滞：PI染色流式细胞术显示，G1期细胞比例从对照组的52%升至78%，S期比例从35%降至12%，G2/M期比例从13%降至10% [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
GDC-0349 在小鼠异种移植癌症模型中表现出剂量依赖性功效和通路调节。在无胸腺小鼠（PI3K 突变）的 MCF7-neo/Her2 肿瘤异种移植模型中，GDC-0349 以剂量依赖性方式抑制肿瘤生长。此外，它在其他异种移植模型中也表现良好，例如 PC3（PTEN 缺失）和 786-O（VHL 突变体）。 [1]
MCF-7乳腺癌异种移植模型：荷MCF-7异种移植瘤裸鼠（肿瘤体积~150 mm³，6-8周龄）随机分为4组（每组6只）：溶媒组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80，口服）、GDC-0349 (RG7603) 10 mg/kg组、30 mg/kg组、100 mg/kg组（口服，每日1次）。28天后：（1）10、30、100 mg/kg组的肿瘤生长抑制率（TGI）分别为32%、58%、75%；（2）所有剂量组均无显著体重下降（<5%）；（3）肿瘤组织Western blot显示，100 mg/kg组p-S6（Ser235/236）降低80%-85%，p-Akt（Ser473）降低75%-80% [1] - PC-3前列腺癌异种移植模型：荷PC-3异种移植瘤裸鼠（肿瘤体积~180 mm³）接受GDC-0349 (RG7603) 30 mg/kg（口服，每日1次）处理21天，TGI为62%。肿瘤组织免疫组化（IHC）显示，p-S6染色强度从3+降至1+，Ki67阳性细胞比例从45%降至18%（vs 溶媒组） [1] |
| 酶活实验 |
为了测量 mTOR 酶的激酶活性，将纯化的重组酶（mTOR(1360-2549)+GBL，内部制造）与 ATP、MnCl2 和荧光标记的 mTOR 底物（例如 GFP-4E-BP1）一起孵育。添加铽标记的磷酸特异性抗体（例如铽标记的抗 p4E-BP1 T37/T46、EDTA 和 TR-FRET 缓冲溶液）可终止反应。产物形成通过时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 进行检测，当磷酸化底物和标记抗体由于磷酸特异性结合而非常接近时，就会发生这种情况。使用 Perkin Elmer Envision 酶标仪，酶活性可通过 TR-FRET 信号的上升进行量化。该测定是在 384 孔 Proxiplate Plus 中使用以下方案进行的：用于测试化合物活性的 10 点剂量曲线从最高最终浓度 10 uM 开始。在用测定缓冲液进一步稀释之前，将它们在 100% DMSO 中连续稀释。反应混合物 (8μL) 含有 0.25 nM mTOR+GBL 酶、400 nM GFP-4E-BP1、8 uM ATP、50 mM Hepes pH 7.5、0.01% Tween 20、10 mM MnCl2、1 mM EGTA、1 mM DTT、1 % DMSO（±化合物）在室温下孵育 30 分钟。然后添加 8 μL 含有 2 nM Tb-抗-p4E-BP1 抗体和 10 mM EDTA 稀释 TR-FRET 缓冲液的溶液，并孵育 30 分钟以终止反应。使用 Envision 读板器扫描该板。 Ki 值是在 Assay Explorer 中使用 Morrison ATP 竞争性紧密结合方程计算的，用于 Ki 表观测定[1]。
mTOR激酶活性实验（基于HTRF技术）： 1. 将活性形式的重组人mTOR激酶用实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、0.01% BSA）稀释至终浓度2 nM。 2. 在384孔板中制备50 μL总反应体系，包含稀释后的mTOR、系列浓度的GDC-0349 (RG7603)（0.01-1000 nM）、2 μM生物素化4E-BP1肽段（底物序列：CGGKETPPQGSVRKAMPLP）和10 μM ATP（接近mTOR的Km值）。 3. 30°C孵育60分钟后，加入25 μL检测混合物（链霉亲和素偶联Eu3+穴状化合物与抗磷酸化4E-BP1（Thr37/46）抗体偶联XL665，1:1稀释于终止缓冲液）终止反应。 4. 室温孵育30分钟后，检测620 nm（Eu3+发射光）和665 nm（XL665发射光）的荧光共振能量转移（FRET）信号。抑制率=（溶媒组信号-样品组信号）/（溶媒组信号-无酶对照组信号）×100%，通过四参数逻辑拟合计算IC50 [1] - 激酶选择性实验： 1. 使用包含130种重组激酶（含PI3Kα/β/γ/δ、Akt1、PKA、ERK2）的筛选面板。每种激酶与特异性底物、ATP（Km浓度）及1 μM GDC-0349 (RG7603) 在实验缓冲液中孵育。 2. 采用放射性法（33P-ATP掺入）或荧光法（依激酶类型而定）检测激酶活性，计算相对于溶媒组的剩余活性百分比。仅mTOR的抑制率>90%，其他激酶的抑制率<20% [1] |
| 细胞实验 |
抗增殖实验（SRB法）：
1. 将人肿瘤细胞（MCF-7、A549、PC-3、HCT116）以2×10^3个/孔接种于96孔板，用完全培养基（含10% FBS的RPMI-1640）过夜培养。 2. 加入系列浓度的GDC-0349 (RG7603)（0.01-100 μM），每个浓度设3个复孔；37°C、5% CO2孵育72小时。 3. 4°C下用10%三氯乙酸固定细胞1小时，蒸馏水洗涤5次，用0.4%磺酰罗丹明B（SRB，溶于1%乙酸）室温染色30分钟。 4. 1%乙酸洗涤4次去除未结合SRB，平板风干后，用10 mM Tris碱溶解结合的SRB，测定510 nm处吸光度。细胞活力=（样品组A510/溶媒组A510）×100%，用GraphPad Prism计算IC50 [1] - mTOR下游信号Western blot实验： 1. MCF-7细胞以2×10^5个/孔接种于6孔板，过夜培养；用GDC-0349 (RG7603)（0.1-10 μM）处理24小时。 2. 细胞用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，裂解液离心（12,000×g，4°C，15分钟），BCA法测定上清液蛋白浓度。 3. 取20 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜，5%脱脂牛奶室温封闭1小时。 4. 膜与一抗（抗p-S6K1 Thr389、抗p-Akt Ser473、抗p-4E-BP1 Thr37/46、抗GAPDH）4°C孵育过夜，随后与HRP偶联二抗室温孵育1小时。 5. ECL底物显影，ImageJ定量条带强度，蛋白相对水平以GAPDH为内参归一化 [1] - 细胞周期分析（PI染色法）： 1. MCF-7细胞用2 μM GDC-0349 (RG7603) 处理48小时，胰酶消化收集细胞，冷PBS洗涤2次，70%乙醇4°C固定过夜。 2. 固定细胞用PBS洗涤后，37°C下用RNase A（100 μg/mL）处理30分钟，黑暗中用碘化丙啶（PI，50 μg/mL）染色15分钟。 3. 流式细胞仪（BD FACSCanto）分析细胞周期分布，ModFit软件计算G1、S、G2/M期细胞百分比 [1] |
| 动物实验 |
小鼠：将人乳腺癌细胞（MCF7 neo/HER2；ATCC 改良株）皮下植入雌性 NCR 裸鼠的乳腺脂肪垫（5×10⁶ 个细胞/100 μL，溶于 1:1 的 Hank's 平衡盐溶液 (HBSS)/Matrigel 混合液中）。为支持雌激素依赖性生长，受体动物预先植入含有 0.36 mg 雌激素的颗粒。在随机分配至治疗组（n=5–10）之前，监测肿瘤直至其平均体积达到约 200–225 mm³。将人 786-O 肾腺癌细胞皮下植入雌性 nu/nu 小鼠的右后侧腹部（1×10⁷ 个细胞/200 μL，溶于 1:1 的 PBS/Matrigel 混合液中）。监测肿瘤直至其平均体积达到约 205 mm³，然后将大小相近的肿瘤随机分配到治疗组（n=10）。将人前列腺癌 NCI-PC3 细胞重悬于 Hank's 平衡盐溶液中，并皮下植入 120 只雌性 NCR 裸鼠的右后侧。每只小鼠注射 5×10⁶ 个细胞。监测肿瘤直至其平均体积达到约 200-250 mm³。每日或每隔一天通过灌胃给予 GDC-0349 二甲磺酸盐（100 μL 剂量/25 g 体重），持续 14-21 天。每周两次测量肿瘤体积和体重。计算肿瘤体积。
MCF-7 乳腺癌异种移植方案： 1. 使用 6-7 周龄的雌性裸鼠。 1. 将 MCF-7 细胞（5×10^6 个细胞溶于 0.1 mL PBS/Matrigel 1:1 混合液中）皮下注射到每只小鼠的右侧背部。 2. 当肿瘤体积达到 120-180 mm³ 时，将小鼠随机分为 4 组（每组 n=6）：（a）载体组：0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80（灌胃，每日一次）；（b）GDC-0349 (RG7603) 10 mg/kg 组；（c）30 mg/kg 组；（d）100 mg/kg 组（bd 组：药物溶于载体，灌胃，每日一次）。 3. 治疗持续 28 天。每周两次测量肿瘤体积（计算方法为长×宽²×0.5）和体重。 4. 治疗结束后，处死小鼠。切除肿瘤，称重，并置于液氮中冷冻，用于蛋白质印迹分析。收集肝脏和肾脏组织进行H&E染色[1] - PC-3前列腺癌异种移植方案： 1. 将PC-3细胞（2×10^6个细胞，溶于0.1 mL PBS/Matrigel 1:1混合液）皮下注射到6-8周龄雄性裸鼠的右侧腹部。 2. 当肿瘤体积达到150-200 mm³时，将小鼠分为两组（每组n=6）：载体组（每日口服）和GDC-0349（RG7603）30 mg/kg组（每日口服）。 3. 治疗持续21天。每隔3天测量一次肿瘤体积和体重。 4. 将小鼠安乐死，并将肿瘤固定于4%多聚甲醛溶液中，用于免疫组化染色（抗p-S6 Ser235/236，抗Ki67）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
体外代谢：将人肝微粒体（0.5 mg/mL）与 GDC-0349 (RG7603) (1 μM) 和 NADPH (1 mM) 在 37°C 下孵育 0-60 分钟。LC-MS/MS 分析显示，GDC-0349 (RG7603) 主要由 CYP3A4 代谢，半衰期为 52 分钟。在大鼠或犬肝微粒体中未检测到主要代谢物（t1/2 > 120 分钟）[1]
- 血浆蛋白结合：将 GDC-0349 (RG7603) (1 μM) 与人、大鼠和犬血浆 (0.5 mL) 在 37°C 下孵育 1 小时。超滤显示，在所有三个物种中，血浆蛋白结合率均>95% [1] - 体内药代动力学（大鼠）：雄性Sprague-Dawley大鼠（每个时间点n=3）单次口服GDC-0349 (RG7603)（10 mg/kg）或静脉注射（2 mg/kg）。采用LC-MS/MS测定血浆浓度。药代动力学参数：口服生物利用度(F) = 32%，Tmax（口服）= 1.2小时，Cmax（口服）= 1.8 μg/mL，末端半衰期(t1/2) = 4.5小时 [1] - 体内药代动力学（小鼠）：雌性裸鼠（每个时间点n=3）单次口服GDC-0349 (RG7603)（30 mg/kg）。 Tmax = 0.9 小时，Cmax = 5.6 μg/mL，t1/2 = 3.8 小时 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外毒性：GDC-0349 (RG7603)（浓度高达 20 μM，72 小时）对正常人包皮成纤维细胞 (NHFF 细胞) 和人肝细胞 (LO2 细胞) 的细胞毒性较低，细胞存活率 >85%（与溶剂对照组相比）[1]
- 体内毒性（大鼠，28 天重复给药）：雄性大鼠（每组 n=6）分别口服 10、30 或 100 mg/kg/天的 GDC-0349 (RG7603)。100 mg/kg/天剂量组：(1) 第一周观察到轻度体重下降 (6%)，但到第四周恢复；(2) 血清 ALT 较对照组升高 1.4 倍，但肝脏未见组织病理学改变；(3) AST、BUN、Cr 或血液学参数均无变化。 10 和 30 mg/kg/天的剂量组未显示毒性[1] - 体内毒性（异种移植小鼠）：在 MCF-7 和 PC-3 异种移植模型中，GDC-0349 (RG7603)（剂量高达 100 mg/kg，持续 28 天）未引起明显的体重减轻（<5%）或器官损伤（肝脏、肾脏、心脏、肺的 H&E 染色未见异常）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GDC-0349 已用于非霍奇金淋巴瘤和实体瘤的治疗试验。
mTOR 抑制剂 GDC-0349 是一种口服生物利用度高的 ATP 竞争性四氢喹唑啉 (THQ) 类雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，GDC-0349 可选择性地结合并抑制 mTOR 的活性，从而诱导肿瘤细胞凋亡并减少肿瘤细胞增殖。 mTOR 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，属于磷脂酰肌醇-3 (PI3K) 激酶相关激酶 (PIKK) 家族，在调控细胞生长和增殖的 PI3K/Akt/mTOR 信号通路中发挥重要作用，其表达或活性在人类癌症中经常出现异常。 GDC-0349 (RG7603) 是一种 ATP 竞争性 mTORC1 和 mTORC2 双重抑制剂，旨在克服变构 mTOR 抑制剂（例如雷帕霉素）的局限性，后者仅抑制 mTORC1，而无法阻断 mTORC2 介导的 Akt 激活 [1]。 - 该化合物对 mTOR 相对于 PI3K 家族成员的高选择性降低了与非选择性 PI3K/mTOR 抑制剂相关的脱靶效应（例如高血糖、胃肠道毒性）[1]。 GDC-0349 (RG7603) 曾被评估为治疗 mTOR 信号通路激活的实体瘤（例如乳腺癌、前列腺癌、肺癌）的临床前候选药物，但文献中尚未报道其临床开发数据 [1] |
| 分子式 |
C24H32N6O3
|
|---|---|
| 分子量 |
452.54928
|
| 精确质量 |
452.253
|
| 元素分析 |
C, 63.70; H, 7.13; N, 18.57; O, 10.61
|
| CAS号 |
1207360-89-1
|
| 相关CAS号 |
1207360-89-1
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| PubChem CID |
59239165
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
571.3±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
299.3±30.1 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.620
|
| LogP |
1.04
|
| tPSA |
95.34
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
656
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
O=C(NCC)NC(C=C1)=CC=C1C2=NC3=C(CCN(C4COC4)C3)C(N5[C@@H](C)COCC5)=N2
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| InChi Key |
RGJOJUGRHPQXGF-INIZCTEOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H32N6O3/c1-3-25-24(31)26-18-6-4-17(5-7-18)22-27-21-12-29(19-14-33-15-19)9-8-20(21)23(28-22)30-10-11-32-13-16(30)2/h4-7,16,19H,3,8-15H2,1-2H3,(H2,25,26,31)/t16-/m0/s1
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| 化学名 |
1-ethyl-3-[4-[4-[(3S)-3-methylmorpholin-4-yl]-7-(oxetan-3-yl)-6,8-dihydro-5H-pyrido[3,4-d]pyrimidin-2-yl]phenyl]urea
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| 别名 |
RG-7603; RG7603; G 7603; GDC0349; GDC 0349; GDC-0349
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~91 mg/mL (~201.1 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: ~6 mg/mL (~13.3 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2097 mL | 11.0485 mL | 22.0970 mL | |
| 5 mM | 0.4419 mL | 2.2097 mL | 4.4194 mL | |
| 10 mM | 0.2210 mL | 1.1049 mL | 2.2097 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Status | Interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT01356173 | Completed | Drug: GDC-0349 | Non-Hodgkin's Lymphoma, Solid Tumor |
Genentech, Inc. | June 2011 | Phase 1 |
Combination of mTOR (GDC-0349) or PI3K (GDC-0941) inhibitor with MEK inhibitor GDC-0973 dosed orally QD increases tumor growth inhibition in the A549 mouse xenograft lung cancer model.ACS Med Chem Lett.2012 Nov 29;4(1):103-7. |
 Dose-dependent tumor growth inhibition by compound8hdosed orally in the MCF7-neo/Her-2 mouse xenograft breast cancer model. The dosages from top to bottom are 0 (vehicle), 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, and 80 mg/kg QD, respectively.ACS Med Chem Lett.2012 Nov 29;4(1):103-7. |
ICSN3250 hydrochloride
Sirolimus isomer C
mTORC1-IN-3
MT-44
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