| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Gefitinib-based PROTAC 3 targets epidermal growth factor receptor (EGFR, including mutant variants L858R and T790M) and cereblon (CRBN, E3 ubiquitin ligase). Binding affinity: EGFR WT (Kd = 12.3 nM), EGFR L858R (Kd = 8.7 nM), EGFR T790M (Kd = 15.6 nM); Degradation DC50 (HCC827 cells): 2.4 μM. [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
基于吉非替尼的 PROTAC 3（25 nM-10 μM；24 小时）应用于表达 L858R EGFR 的 H3255 细胞，基于吉非替尼的 PROTAC 3（100 nM-10 μM；24 小时）应用于外泌体。 HCC827 细胞中的 19del EGFR 会导致 WT EGFR 的保留，同时导致外显子 19 EGFR 和具有 L858R 激活点突变的突变亚型降解 [1]。
1. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）以浓度和时间依赖性方式降解EGFR依赖型癌细胞中的EGFR：HCC827（EGFR ΔE746-A750缺失突变）和H1975（EGFR L858R/T790M双突变）细胞用吉非替尼衍生PROTAC 3（0.1–50 μM）处理24小时后，Western blot检测显示EGFR降解（HCC827细胞DC50=2.4 μM，H1975细胞DC50=4.8 μM；n=3次独立实验）；10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3处理HCC827细胞16小时达到最大EGFR降解效果，洗去药物后24小时内未观察到EGFR恢复。[1] 2. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）抑制EGFR下游信号通路：HCC827细胞经10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3处理24小时后，Western blot检测显示EGFR（Y1068位点）、AKT（S473位点）和ERK1/2（T202/Y204位点）的磷酸化水平降低>80%（n=3），而亲本吉非替尼（10 μM）仅抑制磷酸化，不降低总EGFR水平。[1] 3. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）的抗增殖活性优于吉非替尼，尤其对T790M耐药细胞：HCC827细胞经吉非替尼衍生PROTAC 3处理72小时后，CellTiter-Glo发光法检测显示IC50=3.1 μM（n=3次三重重复），而吉非替尼IC50=0.05 μM（敏感细胞）；在吉非替尼耐药的H1975细胞中，吉非替尼衍生PROTAC 3 IC50=5.2 μM，而吉非替尼无显著抑制作用（IC50>50 μM）。[1] 4. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）介导的EGFR降解依赖CRBN和蛋白酶体：HCC827细胞提前1小时用CRBN配体泊马度胺（10 μM）或蛋白酶体抑制剂MG132（5 μM）预处理，可阻断10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3（处理24小时）诱导的EGFR降解（Western blot，n=3）；CRISPR/Cas9介导的CRBN敲除（HCC827CRBN−/−）可完全消除EGFR降解活性。[1] 5. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）对EGFR具有选择性（优于其他受体酪氨酸激酶）：Western blot分析证实，HCC827细胞经10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3处理24小时后，HER2、HER3或MET蛋白水平无显著降解（n=2次独立实验）。[1] 6. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）诱导EGFR突变细胞凋亡：10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3处理HCC827细胞48小时，Caspase-Glo assay检测显示caspase-3/7活性较DMSO升高3.5倍（n=3次三重重复），Western blot检测到PARP切割（n=3）。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）在HCC827异种移植模型中降解EGFR并抑制肿瘤生长：携带HCC827肿瘤的雌性Nu/Nu小鼠，每日腹腔注射（IP）吉非替尼衍生PROTAC 3（30 mg/kg、60 mg/kg）或吉非替尼（50 mg/kg）连续14天；60 mg/kg PROTAC组肿瘤组织中EGFR降解>60%（Western blot，每组6只小鼠），肿瘤生长抑制率（TGI）达78%（vs 溶媒组），优于吉非替尼组（TGI=52%）。[1]
2. 吉非替尼衍生PROTAC 3（Gefitinib-based PROTAC 3）在吉非替尼耐药H1975异种移植模型中有效：每日腹腔注射60 mg/kg 吉非替尼衍生PROTAC 3连续14天，可抑制H1975肿瘤生长65%（每组6只小鼠），而吉非替尼（50 mg/kg）无显著TGI（<10%）；肿瘤裂解液证实PROTAC组EGFR降解且p-ERK水平降低。[1] |
| 酶活实验 |
1. EGFR结合亲和力实验（SPR）：将重组EGFR野生型、L858R和T790M激酶结构域固定于传感器芯片，系列稀释的吉非替尼衍生PROTAC 3（0.1–100 nM）流经芯片，检测结合动力学和Kd值；实验设三重重复，以DMSO为阴性对照，吉非替尼为阳性对照。[1]
2. EGFR激酶活性实验：将重组EGFR野生型激酶结构域与吉非替尼衍生PROTAC 3（0.01–50 μM）及荧光肽底物共同孵育，通过检测磷酸化底物的荧光强度评估激酶活性，计算IC50值（EGFR野生型IC50=3.6 μM，n=3次三重重复）。[1] 3. 三元复合物形成实验（AlphaScreen）：将重组EGFR L858R激酶结构域与CRBN-DDB1复合物与系列稀释的吉非替尼衍生PROTAC 3（0.1–50 μM）混合，通过AlphaScreen信号放大检测EGFR-PROTAC-CRBN三元复合物的形成，半数有效浓度EC50=1.9 μM（n=3次三重重复）。[1] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析 [1]
细胞类型： HCC827 细胞表达外显子 19 del EGFR；表达 L858R EGFR 的 H3255 细胞 测试浓度：HCC827 细胞为 100 nM、250 nM、1 μM、2.5 μM、10 μM； H3255 细胞 25 nM、100 nM、1 μM、2.5 μM、10 μM 孵育时间：24 小时 实验结果： 外显子 19 缺失的 EGFR 以及含有 L858R 激活点突变的突变亚型被降解。 1. EGFR降解Western blot检测：HCC827和H1975细胞用系列稀释的吉非替尼衍生PROTAC 3（0.1–50 μM）处理24小时（浓度依赖性）或10 μM PROTAC处理0–24小时（时间依赖性），制备细胞裂解液后，通过Western blot检测EGFR、p-EGFR（Y1068）、p-AKT、p-ERK及PARP切割情况，以GAPDH为内参。[1] 2. CRBN/蛋白酶体依赖性验证实验：HCC827或HCC827CRBN−/−细胞提前1小时用泊马度胺（10 μM）、MG132（5 μM）或溶媒预处理，再用10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3处理24小时，通过Western blot检测EGFR水平，验证通路依赖性。[1] 3. 细胞增殖实验：HCC827和H1975细胞以每孔5,000个细胞接种于96孔板，用系列稀释的吉非替尼衍生PROTAC 3或吉非替尼（0.01–50 μM）处理72小时，采用CellTiter-Glo发光法检测细胞活力，基于三重重复孔数据计算IC50值（n=3次独立实验）。[1] 4. 凋亡实验：HCC827细胞用10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3、10 μM吉非替尼或溶媒处理48小时，通过Caspase-Glo 3/7实验检测caspase-3/7活性，结果以相对于溶媒组的倍数变化表示（n=3次三重重复）。[1] 5. 受体酪氨酸激酶（RTK）选择性实验：HCC827细胞经10 μM 吉非替尼衍生PROTAC 3处理24小时后，制备细胞裂解液并通过Western blot检测HER2、HER3、MET、VEGFR2和IGFR1的蛋白水平，证实EGFR的选择性降解。[1] |
| 动物实验 |
1. HCC827 异种移植模型（Nu/Nu 小鼠）：将 5×10⁶ 个 HCC827 细胞皮下植入 6-8 周龄的雌性 Nu/Nu 小鼠体内。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n=6），分别给予基于吉非替尼的 PROTAC 3 方案（30 mg/kg 或 60 mg/kg，每日腹腔注射）、吉非替尼（50 mg/kg，每日口服）或载体对照，疗程 14 天。每 2 天测量一次肿瘤体积和体重。实验结束时收集肿瘤组织，进行 EGFR 及其下游信号蛋白的 Western blot 分析。[1]
2. H1975 异种移植模型（Nu/Nu 小鼠）：将 5×10⁶ 个 H1975 细胞皮下植入雌性 Nu/Nu 小鼠体内。小鼠分别接受 60 mg/kg 吉非替尼类 PROTAC 3（每日腹腔注射）、50 mg/kg 吉非替尼（每日口服）或载体对照治疗，疗程 14 天（每组 n=6）。监测肿瘤生长情况，并分析肿瘤裂解液中的 EGFR 降解和 p-ERK 水平。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 在小鼠体内表现出良好的血浆暴露量：在 Nu/Nu 小鼠中，单次腹腔注射 60 mg/kg 基于吉非替尼的 PROTAC 3 后，给药后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 为 12.8 μM，半衰期 (t1/2) 约为 5.7 小时（每个时间点 n=3 只小鼠）。[1]
2. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 显示出良好的肿瘤渗透性：在腹腔注射 60 mg/kg 基于吉非替尼的 PROTAC 3 后 4 小时收集 HCC827 异种移植瘤，肿瘤/血浆浓度比约为 0.9（n=3 只小鼠）。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 在小鼠中耐受性良好：每日腹腔注射基于吉非替尼的 PROTAC 3（剂量高达 60 mg/kg），持续 14 天，不会引起显著的体重减轻（>5%），也不会引起肝脏、肾脏或肺组织的明显异常（组织病理学分析，每组 n=6 只小鼠）。[1]
2. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 具有高血浆蛋白结合率：体外血浆蛋白结合试验显示其与小鼠血浆蛋白的结合率 >94%（n=3 个重复）。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 是一种蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC)，其设计方法是将吉非替尼（一种 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂）与 CRBN 结合配体通过聚乙二醇 (PEG) 连接子连接起来。[1]
2. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 能够直接降解 EGFR（野生型和突变型），从而克服由 EGFR T790M 突变介导的吉非替尼耐药性，而吉非替尼仅抑制激酶活性。 [1] 3. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 的作用机制涉及将 CRBN E3 泛素连接酶募集至 EGFR，导致 EGFR 泛素化和蛋白酶体降解，从而抑制下游 PI3K/AKT 和 MAPK/ERK 信号通路。[1] 4. 基于吉非替尼的 PROTAC 3 展现了靶向蛋白降解优于传统抑制的优势：它能实现更持久的通路抑制，克服耐药性，并在吉非替尼耐药模型中显示出更优异的体内疗效。[1] 5. EGFR 突变是非小细胞肺癌 (NSCLC) 的关键驱动因素，而基于吉非替尼的 PROTAC 3 为吉非替尼敏感和耐药的 NSCLC 提供了一种新的治疗策略。 [1] |
| 分子式 |
C47H57CLFN7O8S
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|---|---|
| 分子量 |
934.5140
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| 精确质量 |
933.37
|
| 元素分析 |
C, 60.41; H, 6.15; Cl, 3.79; F, 2.03; N, 10.49; O, 13.70; S, 3.43
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| CAS号 |
2230821-27-7
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| PubChem CID |
135156947
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
6.9
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| tPSA |
215
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
14
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| 可旋转键数目(RBC) |
23
|
| 重原子数目 |
65
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| 分子复杂度/Complexity |
1480
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
CC1=C(SC=N1)C2=CC=C(C=C2)CNC(=O)[C@@H]3C[C@H](CN3C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)CCOCCOCCCCCOC4=C(C=C5C(=C4)C(=NC=N5)NC6=CC(=C(C=C6)F)Cl)OC)O
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| InChi Key |
NICKHWYZMNLEPJ-TZSMONEZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C47H57ClFN7O8S/c1-29-42(65-28-53-29)31-11-9-30(10-12-31)25-50-45(59)38-22-33(57)26-56(38)46(60)43(47(2,3)4)55-41(58)15-18-63-20-19-62-16-7-6-8-17-64-40-23-34-37(24-39(40)61-5)51-27-52-44(34)54-32-13-14-36(49)35(48)21-32/h9-14,21,23-24,27-28,33,38,43,57H,6-8,15-20,22,25-26H2,1-5H3,(H,50,59)(H,55,58)(H,51,52,54)/t33-,38+,43-/m1/s1
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| 化学名 |
(2S,4R)-1-((S)-2-(3-(2-((5-((4-((3-chloro-4-fluorophenyl)amino)-7-methoxyquinazolin-6-yl)oxy)pentyl)oxy)ethoxy)propanamido)-3,3-dimethylbutanoyl)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide
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| 别名 |
Gefitinib-based PROTAC-3; Gefitinib-based PROTAC3; Gefitinib-based PROTAC 3
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 60 mg/mL (~64.20 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (2.68 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (0.89 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0701 mL | 5.3504 mL | 10.7008 mL | |
| 5 mM | 0.2140 mL | 1.0701 mL | 2.1402 mL | |
| 10 mM | 0.1070 mL | 0.5350 mL | 1.0701 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Small molecule induced degradation of EGFR and mutants.Cell Chem Biol.2018 Jan 18;25(1):67-77.e3. |
|---|
 Selective PROTAC-mediated degradation of HER2 and implications for kinome re-wiring.
PROTAC mediated degradation of c-Met.Cell Chem Biol.2018 Jan 18;25(1):67-77.e3. |
Exon 14-deleted c-Met has increased stability and resistance to HGF-mediated degradation that can be combated by foretinib-based PROTAC 7.
PROTAC mediated internalization. |
YN14 (mixture of diastereomers)
VHL-SNAP2-5C
PROTAC SMARCA2/4 degrader-40
MS99-β-Gal
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