| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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描述：Geneticin G418（G-418 二硫酸盐）是一种强效的氨基糖苷类抗生素，属于庆大霉素 B1 类，它通过抑制原核细胞和真核细胞中多肽链的延伸步骤来阻断多肽合成。
| 靶点 |
Aminoglycoside
Protein synthesis machinery (inhibition of protein synthesis). [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
一种名为硫酸G418的氨基糖苷类新霉素类似物可抑制蛋白质合成，并广泛用于筛选具有新霉素抗性（NR）的哺乳动物细胞系。在真核生物载体中，新霉素抗性（neo）基因通常用作显性选择基因。唾液酸糖蛋白（AsOR）和G418可共价结合形成一种对肝细胞具有毒性和特异性的缀合物[2]。
将人GD3合成酶cDNA转染至MDA-MB231细胞，并使用G-418进行群体筛选，以筛选出稳定过表达该酶的细胞[2]。 已证实，浓度范围为1至300微克/毫升的氨基糖苷类抗生素G418可抑制多种原核生物和真核生物[4]。 |
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| 体内研究 (In Vivo) |
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| 细胞实验 |
棘阿米巴是一种分布广泛的机会性寄生虫，可引起危及视力的角膜炎和危及生命的脑炎。这种阿米巴的包囊期对目前使用的疗法具有极强的耐药性，因此迫切需要寻找替代药物。越来越多的证据表明棘阿米巴存在程序性细胞死亡（PCD）系统，虽然其某些特征与高等真核细胞相似，但也存在差异。我们希望通过了解这些差异，能够将其作为新型药物干预的靶点，从而激活阿米巴中的PCD通路，而不会影响受感染的人体组织。本文中，我们使用氨基糖苷类抗生素G418来激活棘阿米巴中的PCD。该药物导致受试阿米巴的形态发生改变。细胞变圆并收缩，6小时后观察到类似于脊椎动物细胞“凋亡小体”的细胞碎片。 G418 处理 6 小时后，细胞内钙离子浓度从静息水平 24 nM 升高至 60 nM。通过 ΔΨm 报告染料 JC-1 和氧化还原染料 CTC 检测发现，线粒体功能在处理过程中受到抑制，并且我们发现细胞色素 c 从线粒体释放。Hoechst 染色显示，G418 处理后细胞首先出现染色质结构改变，随后出现细胞核囊泡化，尽管在程序性细胞死亡 (PCD) 的早期阶段我们未观察到基因组 DNA 的明显断裂 [5]。
转染后，每个孔用无血清培养基冲洗，然后更换为含有 400 μg/ml 遗传霉素 G-418（一种新霉素类似物）的培养基 D，以筛选转化细胞。 [2] 用于转化细胞（OKTr-1 和 OKTr-23）的培养基中添加了 400 μg/ml G-418。细胞在各种培养基（L-15、Medium 199、RPMI-1640、Grace's 昆虫培养基、Mitsuhashi 和 Maramorosch 昆虫培养基）中培养，每种培养基均含有 20% FBS、8% 虾提取物、青霉素/链霉素、表皮生长因子、白细胞介素-2、用于调节渗透压的盐溶液以及 400 μg/ml G-418。[2] 在含有 G-418 的培养基中，于软琼脂糖（0.5%）中测定转化细胞的克隆效率。[2] |
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| 动物实验 |
小鼠RML和22L朊病毒接种物取自RML或22L感染的CAD5细胞(34)。将细胞培养至汇合，用1 ml PBS（每10 cm培养皿）刮取细胞，然后使用Minilys珠式匀浆器和CK14匀浆管（Bertin）进行匀浆。向刮取的培养物中加入Benzonase（50单位/ml；EMD Millipore #70746-4），然后以最高速度匀浆3次，每次30秒，共进行3个循环，每个循环之间冰浴5分钟。细胞匀浆液储存于−80 °C。叙利亚仓鼠263K朊病毒接种物采用类似方法制备，取自稳定表达HaPrP的263K感染的CAD5-PrP−/−细胞。[6]
选择性培养基的制备：在50-55°C下倾注G-418至标准线虫生长培养基（NGM）中。将培养基置于室温（20-22°C）下培养1天。由于在G-418存在下无法形成菌苔，因此使用5倍浓缩的大肠杆菌OP50培养物进行接种（13 cm培养皿1 ml，5 cm培养皿300 μl，2.5 cm培养皿50 μl）。接种前，将培养皿在无菌操作台下干燥，并储存于20-22°C以备立即使用，或在15°C下保存长达3周。 [1] - 野生型线虫敏感性测试：将10条幼虫或10条妊娠成虫置于5厘米选择性培养皿中，培养皿中G-418浓度范围为0.01 mg/ml至2 mg/ml。监测其生长情况长达1个月。临界浓度定义为幼虫死亡而幼成虫存活并能产卵的G-418浓度。[1] - 富集实验步骤：将3条线虫转移至5厘米选择性培养皿（或作为对照的非选择性NGM培养皿）中，并在20°C下培养增殖。待细菌耗尽后，分析混合发育阶段的线虫群体。对于散点图，将3条线虫转移至13厘米选择性培养皿或非选择性培养皿中，并在20°C下培养增殖。 [1] - 液体培养基富集：将用次氯酸盐处理妊娠成虫，并将释放的卵在M9缓冲液中过夜孵育，获得同步化的L1幼虫。将L1幼虫与10条携带单拷贝转基因的L1幼虫混合于添加了0.4 mg/ml G-418的M9培养基中（不添加食物）。将线虫在20℃下振荡培养。[1] - MosSCI生物热休克处理：将主要含有幼成虫的选择性培养皿置于33℃水浴中热休克1小时，然后在15℃下恢复1小时，再次在33℃下热休克1小时。在15℃下培养过夜后，将20条幼成虫分批转移至新的选择性培养皿中，并在20-22℃下进行增殖。[1] |
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
五种线虫的幼虫在暴露于临界浓度的G-418后数日内死亡，而成虫则存活并能产卵。临界浓度因物种而异（例如，秀丽隐杆线虫和布氏隐杆线虫的临界浓度为0.4 mg/ml）。[1]
- 在0.01 mg/ml至2 mg/ml的浓度范围内，幼虫在临界浓度下死亡，而成虫则存活。[1] - 选择性培养基上不允许存在细菌污染，因为耐药菌似乎会降解G-418并保护线虫免受药物侵害。[1] |
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| 参考文献 |
[1]. An antibiotic selection marker for nematode transgenesis. Nat Methods. 2010;7(9):721-723. [5]. G418 induces programmed cell death in Acanthamoeba through the elevation of intracellular calcium and cytochrome c translocation. Parasitol Res. 2019 Feb;118(2):641-651.[6]. J Biol Chem. 2021 Sep;297(3):101073. doi: 10.1016/j.jbc.2021.101073. Epub 2021 Aug 12. |
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| 其他信息 |
朊病毒在培养细胞中的复制能力极大地促进了朊病毒研究和朊病毒疾病候选疗法的发现。在内源性朊病毒蛋白（PrP）表达水平低或不表达的细胞中表达不同种类的朊病毒蛋白，扩大了可增殖朊病毒株的范围。在这些系统中，稳定表达目标PrP的细胞通常是通过共表达选择标记物并用抗生素处理获得的。本文报道了一项意外发现：氨基糖苷类抗生素G418（庆大霉素）会干扰稳定转染的培养细胞感染朊病毒的能力。在G418耐药的N2a或CAD5细胞系中，G418的存在降低了用RML或22L小鼠朊病毒株感染后产生的蛋白酶抗性PrP的水平。G418还会干扰表达仓鼠PrP的细胞感染263K仓鼠朊病毒株。有趣的是，G418 对已感染朊病毒的细胞中蛋白酶抗性 PrP 水平几乎没有影响，这表明 G418 选择性地干扰了朊病毒的初始感染。由于 G418 处理对细胞内 PrP 水平或其定位没有显著影响，这提示 G418 可能特异性地靶向朊病毒组装或参与朊病毒感染的早期阶段。[6]
G-418 抗性由细菌新霉素抗性基因 (NeoR) 赋予，该基因广泛用于赋予真核细胞 G-418 抗性。本研究构建了一种线虫转化载体 (pDD04Neo)，该载体携带 NeoR，其表达受秀丽隐杆线虫核糖体蛋白基因 rps-27 的普遍启动子控制。[1] - 该抗生素选择系统允许在选择性培养基上对携带非整合转基因的转基因线虫进行无需人工干预的维持和富集。该方法可直接用于任何品系，无需引入突变型unc-119背景。[1] - 该标记也可用于野生型遗传背景下Mos1介导的单拷贝插入（MosSCI-biotic）。热休克诱导转座酶表达后，通过在咽部表达GFP但缺乏DsRed2表达的G-418抗性个体鉴定整合事件。单拷贝插入通过定量PCR得到证实。[1] - 用于线虫转基因的抗生素抗性标记有望扩展到其他药物，从而实现广泛的应用。[1] |
| 分子式 |
C20H44N4O18S2
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|---|---|
| 分子量 |
692.71
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| 精确质量 |
692.209
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| 元素分析 |
C, 34.68; H, 6.40; N, 8.09; O, 41.57; S, 9.26
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| CAS号 |
108321-42-2
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| 相关CAS号 |
G-418;49863-47-0; 49863-47-0; 108321-42-2 (sulfate)
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| PubChem CID |
206347
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 沸点 |
1012.1ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
565.9ºC
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| 蒸汽压 |
0mmHg at 25°C
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| 来源 |
Micromonospora rhodorangea
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| tPSA |
414.35
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| 氢键供体(HBD)数目 |
14
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| 氢键受体(HBA)数目 |
22
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
44
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| 分子复杂度/Complexity |
763
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| 定义原子立体中心数目 |
15
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| SMILES |
S(=O)(=O)(O[H])O[H].S(=O)(=O)(O[H])O[H].O([C@@]1([H])C([H])(C([H])(C([H])([C@]([H])(C([H])(C([H])([H])[H])O[H])O1)O[H])O[H])N([H])[H])C1([H])C([H])(C([H])([H])C([H])(C([H])(C1([H])O[H])O[C@@]1([H])C([H])(C([H])([C@](C([H])([H])[H])(C([H])([H])O1)O[H])N([H])C([H])([H])[H])O[H])N([H])[H])N([H])[H]
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| InChi Key |
UHEPSJJJMTWUCP-DHDYTCSHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H40N4O10.2H2O4S/c1-6(25)14-11(27)10(26)9(23)18(32-14)33-15-7(21)4-8(22)16(12(15)28)34-19-13(29)17(24-3)20(2,30)5-31-19;2*1-5(2,3)4/h6-19,24-30H,4-5,21-23H2,1-3H3;2*(H2,1,2,3,4)/t6-,7+,8-,9-,10-,11+,12+,13-,14-,15-,16+,17-,18-,19-,20+;;/m1../s1
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| 化学名 |
(2R,3S,4R,5R,6S)-5-amino-6-(((1R,2S,3S,4R,6S)-4,6-diamino-3-(((2R,3R,4R,5R)-3,5-dihydroxy-5-methyl-4-(methylamino)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-2-hydroxycyclohexyl)oxy)-2-((R)-1-hydroxyethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4-diol bis(sulfate)
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| 别名 |
Geneticin G418; Geneticin G-418; Geneticin G 418; Antibiotic G418;
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| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Water : 100~125 mg/mL(~180.45 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (72.18 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
配方 2 中的溶解度: Saline: 30mg/ml (43.31mM) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4436 mL | 7.2180 mL | 14.4361 mL | |
| 5 mM | 0.2887 mL | 1.4436 mL | 2.8872 mL | |
| 10 mM | 0.1444 mL | 0.7218 mL | 1.4436 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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Antibacterial agent 166
LasB-IN-1
Ticarcillin monosodium
G0775
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
