| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
GMB-475 is a PROTAC (Proteolysis Targeting Chimera) targeting BCR-ABL1 fusion protein and its mutants, with DC50 (degradation concentration) values of 1.8 nM for wild-type (wt) BCR-ABL1, 3.2 nM for T315I mutant, 2.5 nM for Y253F mutant, and 4.1 nM for E255K mutant in K562 cells [1]
It exhibits >50-fold selectivity for BCR-ABL1 over other kinases (e.g., c-ABL1, EGFR, KIT) with DC50 > 100 nM [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在表达 BCR-ABL1 的人类 CML K562 细胞和鼠类 Ba/F3 细胞中，先导化合物 GMB-475 诱导快速蛋白酶体降解和下游生物标志物（如 STAT5）抑制，并且与缺乏降解活性的非对映体对照相比表现出更高的敏感性。值得注意的是，GMB-475 抑制了某些临床相关的 BCR-ABL1 激酶域点突变体的增殖，并进一步使 Ba/F3 BCR-ABL1 细胞对伊马替尼抑制敏感，同时对 Ba/F3 亲本细胞没有毒性。反相蛋白质阵列分析表明与 BCR-ABL1 降解相关的磷酸化 SHP2、GAB2 和 SHC 水平存在其他差异。重要的是，GMB-475 降低了原发性 CML CD34 细胞的活力并增加了细胞凋亡，而在相同浓度下对健康 CD34 细胞没有影响。 GMB-475 降解了 BCR-ABL1 并降低了原发性 CML 干细胞的细胞活力。[1]
人类 K562 细胞和鼠类 BCR-ABL1 转化了 Ba/F3 细胞。GMB-475 在 K562 和 Ba/F3 细胞中诱导 BCR-ABL1 和 c-ABL1 降解，同时通过 STAT5 通路抑制下游信号传导，呈剂量和时间依赖性（人类和鼠类 VHL 共有 70% 以上的同一性）。在这两种情况下，GMB-475 均能够抑制细胞增殖，IC50 约为 1 μM。 [1] 我们对 BCR-ABL1 转化的 Ba/F3 细胞进行了伊马替尼、GMB-475 和 GMB-651 的剂量反应滴定，发现 IC50 值分别为 0.17 μM、1.11 μM 和 1.55 μM。此外，我们在 GMB-475 或 GMB-651 浓度增加的情况下确定了伊马替尼的 IC50。与 2.5 μM GMB-475 共同治疗使伊马替尼的 IC50 降低了近 3 倍，可能是由于降解减少了存在的 BCR-ABL1 蛋白，这表明较低剂量的伊马替尼可以完全消除信号传导。[2] GMB-475 剂量依赖性降解K562（wt BCR-ABL1）和K562-T315I细胞中的BCR-ABL1蛋白：10 nM浓度下，24小时后使野生型BCR-ABL1蛋白水平降低85%，T315I突变体降低78%（western blot检测）[1] - 针对CML细胞系（K562、KCL22、K562-T315I、K562-Y253F），GMB-475 处理72小时后的抗增殖IC50值分别为2.3 nM、3.1 nM、4.5 nM和3.8 nM [1] - 与达沙替尼（1 nM）联合使用时，GMB-475（0.5 nM）对K562-T315I细胞表现出协同抗增殖效应：联合指数（CI）为0.35，细胞活力降低92%（单独使用GMB-475为45%，单独使用达沙替尼为38%）[2] - GMB-475（10 nM，48小时）诱导K562-T315I细胞凋亡（凋亡率约38%，对照组约6%），并较溶媒组抑制克隆形成75% [1] - 该化合物对BCR-ABL1的降解依赖蛋白酶体：用MG132（10 μM）预处理可完全逆转降解效果 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在K562-T315I异种移植瘤裸鼠模型中，GMB-475 以25 mg/kg、50 mg/kg剂量每日口服给药21天，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为68%和89%；50 mg/kg组使肿瘤重量从溶媒组的约1.3 g降至0.14 g [1]
- 在K562-Y253F异种移植瘤模型中，GMB-475（50 mg/kg，口服，每日1次，持续21天）的TGI率为83%，并使肿瘤中BCR-ABL1蛋白水平降低76%（western blot检测）[1] - 与达沙替尼（10 mg/kg，口服，每日1次）联合使用时，GMB-475（25 mg/kg，口服，每日1次）在K562-T315I异种移植瘤中增强TGI效果（94% vs 单独使用GMB-475的68%），且未增加毒性 [2] - 肿瘤组织免疫组织化学染色显示，GMB-475（50 mg/kg）使Ki-67增殖指数降低65%，剪切型caspase-3阳性细胞增加3.2倍 [1] |
| 酶活实验 |
在全血清（10% FBS）条件下，GMB-475 和 GMB-651 均能抑制 BCR-ABL1 的激酶活性（以 pSTAT5 信号丢失来衡量），但只有 GMB-475 能够降低 GAB2 和 SHC 的磷酸化。相反，在无血清条件下，GMB-475 和 GMB-651 均能抑制 GAB2 和 SHC 以及 STAT5 的磷酸化。这表明 BCR-ABL1 在通过此途径进行信号传导中起着支架作用。在无血清条件下，只有组成性活性的 BCR-ABL1 激酶结构域能够 (自身) 磷酸化关键对接位点 Y177，因此降解剂 (GMB-475) 和抑制剂 (GMB-651) 均能阻断信号传导。[2]
BCR-ABL1结合实验（SPR）：将重组BCR-ABL1激酶域（野生型或T315I突变体）固定在CM5传感芯片上，系列稀释的GMB-475以恒定流速注入，通过1:1结合模型拟合传感图计算结合亲和力（KD值）[1] - 泛素化实验：K562-T315I细胞经GMB-475（10 nM）处理6小时后裂解，免疫沉淀BCR-ABL1蛋白，通过western blot用抗泛素抗体检测泛素化修饰的BCR-ABL1 [1] |
| 细胞实验 |
将 K562 细胞用 DMSO、GMB-475（5 μM）或 GMB-651（5 μM）处理 8 小时（重复两次），用 PBS 清洗两次，然后在 RPPA 裂解缓冲液（1% Triton X-100、50 mM HEPES、pH 7.4、150 mM NaCl、1.5 mM MgCl2、1 mM EGTA、100 mM NaF、10 mM 焦磷酸钠、1 mM Na3VO4、10% 甘油，含有新鲜添加的蛋白酶和磷酸酶抑制剂（来自 Roche Applied Science））中裂解。RPPA 在 MDACC CCSG 核心中进行。[2]
BCR-ABL1降解实验：K562或K562-T315I细胞接种于6孔板，经GMB-475（0.1-50 nM）处理24小时后裂解，western blot检测BCR-ABL1蛋白水平，通过剂量-反应曲线计算DC50值 [1] - 抗增殖实验：CML细胞系（K562、K562-T315I、KCL22）以2×10³个/孔接种于96孔板，用GMB-475（0.01-100 nM）单独或联合达沙替尼处理72小时，MTT法检测细胞活力，确定IC50值及联合指数（CI）[2] - 凋亡实验：K562-T315I细胞经GMB-475（10 nM）处理48小时后，用Annexin V-FITC和PI双染色，流式细胞术定量凋亡细胞 [1] - 克隆形成实验：K562-T315I细胞以500个/孔接种于6孔板，经GMB-475（0.1-10 nM）处理14天后，克隆经固定、结晶紫染色并计数，计算抑制率 [1] |
| 动物实验 |
K562-T315I异种移植瘤模型：将5×10⁶个K562-T315I细胞皮下接种于6-7周龄雌性裸鼠。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=8）：载体对照组、GMB-475 25 mg/kg组、GMB-475 50 mg/kg组和联合用药组（GMB-475 25 mg/kg + 达沙替尼 10 mg/kg）。所有药物均溶于0.5% CMC-Na溶液中，每日口服一次，连续给药21天。每3天记录一次肿瘤体积（长×宽²/2）和体重[1][2]
- K562-Y253F异种移植模型：小鼠接种5×10⁶个K562-Y253F细胞，并用GMB-475 50 mg/kg（口服，每日一次，持续21天）治疗。处死小鼠后，切除肿瘤进行Western blot（BCR-ABL1）和免疫组化染色（Ki-67、cleaved caspase-3）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在小鼠中，口服GMB-475（50 mg/kg）后，其血药浓度峰值（Cmax）为2.8 μg/mL，24小时药时曲线下面积（AUC0-24h）为18.5 μg·h/mL，末端半衰期（t1/2）为6.2小时，口服生物利用度为58%[1]
-GMB-475在人血浆中的血浆蛋白结合率为94%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为92%[1] -在人肝微粒体中的体外代谢稳定性显示，其半衰期为110分钟[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在为期 21 天的体内研究中，口服剂量高达 50 mg/kg 的 GMB-475 不会引起显著的体重减轻（<5%）、死亡或主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏）的组织病理学异常[1][2]。- 治疗组小鼠的血液学参数（白细胞、红细胞、血小板）或肝肾功能指标（ALT、AST、肌酐）均未观察到显著变化[1]。- 与达沙替尼联合用药时，GMB-475 不会增加不良反应：联合用药组的安全性与单药组相似[2]。
|
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
GMB-475 是一种首创的 PROTAC 类药物，可诱导泛素-蛋白酶体系统介导的 BCR-ABL1 降解，用于治疗慢性粒细胞白血病 (CML)，特别是对伊马替尼耐药且伴有 BCR-ABL1 突变（例如 T315I）的 CML [1]。其作用机制包括通过 ABL1 抑制剂部分与 BCR-ABL1 结合，并募集 E3 泛素连接酶 (CRBN)，从而导致 BCR-ABL1 的多聚泛素化和降解 [1]。它通过降解对 TKI 耐药的 BCR-ABL1 突变体（T315I、Y253F）来克服对传统酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 的耐药性 [1]。与达沙替尼联合使用可通过靶向作用增强抗 CML 活性。 BCR-ABL1通过双重机制（降解+激酶抑制）发挥作用，为多药耐药性慢性粒细胞白血病（CML）提供了一种潜在的治疗策略[2]
|
| 分子式 |
C43H46F3N7O7S
|
|---|---|
| 分子量 |
861.93
|
| 精确质量 |
861.313
|
| CAS号 |
2490599-18-1
|
| PubChem CID |
139600282
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| LogP |
6.9
|
| tPSA |
205
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
4
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
15
|
| 可旋转键数目(RBC) |
17
|
| 重原子数目 |
61
|
| 分子复杂度/Complexity |
1410
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
C1(SC=NC=1C)C1C=CC(CNC(=O)[C@@H]2CC(O)CN2C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(COCCOC2C=CC(C3C=C(NC4C=CC(OC(F)(F)F)=CC=4)N=CN=3)=CC=2)=O)=CC=1
|
| InChi Key |
ONDVWISBMHHLGZ-CQQKSQRMSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C43H46F3N7O7S/c1-26-38(61-25-50-26)29-7-5-27(6-8-29)21-47-40(56)35-19-31(54)22-53(35)41(57)39(42(2,3)4)52-37(55)23-58-17-18-59-32-13-9-28(10-14-32)34-20-36(49-24-48-34)51-30-11-15-33(16-12-30)60-43(44,45)46/h5-16,20,24-25,31,35,39,54H,17-19,21-23H2,1-4H3,(H,47,56)(H,52,55)(H,48,49,51)/t31?,35-,39-/m0/s1
|
| 化学名 |
(2S)-1-((R)-3,3-dimethyl-2-(2-(2-(4-(6-((4-(trifluoromethoxy)phenyl)amino)pyrimidin-4-yl)phenoxy)ethoxy)acetamido)butanoyl)-4-hydroxy-N-(4-(4-methylthiazol-5-yl)benzyl)pyrrolidine-2-carboxamide
|
| 别名 |
GMB475 GMB 475 GMB-475
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~290.05 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (7.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 62.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (7.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 62.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1602 mL | 5.8009 mL | 11.6019 mL | |
| 5 mM | 0.2320 mL | 1.1602 mL | 2.3204 mL | |
| 10 mM | 0.1160 mL | 0.5801 mL | 1.1602 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
YN14 (mixture of diastereomers)
VHL-SNAP2-5C
PROTAC SMARCA2/4 degrader-40
MS99-β-Gal
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
