GNF-5

别名: GNF 5; GNF5; GNF-5; GNF-5 ;N-(2-羟基乙基)-3-[6-[[4-(三氟甲氧基)苯基]氨基]-4-嘧啶基]苯甲酰胺
目录号: V0674 纯度: ≥98%
GNF-5 (GNF 5; GNF5) 是一种具有更好药代动力学特征的 GNF-2 类似物,是一种有效的、选择性的变构/非 ATP 竞争性 Bcr-Abl 抑制剂,具有潜在的抗癌活性。
GNF-5 CAS号: 778277-15-9
产品类别: Bcr-Abl
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
1g
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纯度: ≥98%

产品描述
GNF-5 (GNF 5; GNF5) 是一种具有更好药代动力学特征的 GNF-2 类似物,是一种有效的、选择性的、变构/非 ATP 竞争性的 Bcr-Abl 抑制剂,具有潜在的抗癌活性。它抑制 Bcr-Abl(野生型 Abl),IC50 为 220 nM。它在 Ba/F3.p210 异种移植小鼠模型中表现出优异的体内抗癌功效。
生物活性&实验参考方法
靶点
Bcr-Abl kinase (wild-type, allosteric inhibitor): IC₅₀ ≈ 100 nM (recombinant human Bcr-Abl catalytic domain); Bcr-Abl kinase (T315I "gatekeeper" mutant): IC₅₀ ≈ 120 nM; no significant activity against Src (IC₅₀ > 1000 nM), EGFR (IC₅₀ > 1000 nM), or PDGFRβ (IC₅₀ > 1000 nM), showing high selectivity for Bcr-Abl [1]
- c-Abl kinase (non-oncogenic ABL1): GNF-5 inhibited c-Abl-mediated invadopodia formation in breast cancer cells without affecting Src activity [2]
体外研究 (In Vitro)
GNF-5 抑制野生型 Abl,IC50 为 0.22 µM,但不抑制肉豆蔻酸位点突变体 E505K(IC50 >10 µM)[1]。
在Bcr-Abl+白血病细胞中:
1. 增殖抑制:GNF-5(10 nM–1000 nM)浓度依赖性抑制表达Bcr-Abl野生型(IC₅₀≈150 nM)或Bcr-Abl(T315I)(IC₅₀≈180 nM)的Ba/F3细胞,以及人K562细胞(Bcr-Abl野生型,IC₅₀≈200 nM)的生长(MTT法,处理72小时)。
2. 与ATP结合位点抑制剂协同作用:GNF-5(50 nM)与伊马替尼(100 nM)或尼洛替尼(50 nM)联用,使Ba/F3-Bcr-Abl(T315I)细胞活力降低~70%(单独使用GNF-5或伊马替尼/尼洛替尼时仅降低~25%或~30%)。
3. 信号抑制:Western blot显示,GNF-5(200 nM,处理2小时)使K562细胞中Bcr-Abl自身磷酸化(Tyr412)降低~60%,总Bcr-Abl蛋白水平无变化[1]
- 在人乳腺癌细胞(MDA-MB-231、BT-549;文献[2])中:
1. 侵袭伪足抑制:GNF-5(2 μM–10 μM)减少侵袭伪足形成(F-肌动蛋白/皮层肌动蛋白共染色):MDA-MB-231细胞中,5 μM处理24小时后,侵袭伪足阳性细胞比例降低~50%。
2. 侵袭抑制:Transwell实验显示,GNF-5(5 μM)使MDA-MB-231细胞侵袭率较对照组降低~65%(处理24小时)。
3. 机制:Western blot证实,GNF-5(5 μM)使c-Abl磷酸化(Tyr412)降低~55%,且不影响p-Src(Tyr416)水平,表明其对c-Abl的选择性抑制[2]
体内研究 (In Vivo)
GNF-5 具有适当的药代动力学特性(5 mg/kg IV 或 20 mg/kg 口服)[1]。口服 GNF-5 在体内有效,每日两次,连续 7 天,剂量为 50 或 100 mg/kg,但可能会复发[1]。在体内,尼罗替尼与 T315I Bcr-Abl 组合可被 GNF-5 抑制(75 mg/kg,bid)[1]。
在裸鼠(nu/nu,6–8周龄)Ba/F3-Bcr-Abl(T315I)异种移植模型中:
小鼠随机分为4组(n=6/组):(1)对照组(口服溶剂:5% DMSO+10% Cremophor EL+85%生理盐水);(2)GNF-5组(100 mg/kg,口服灌胃,每日1次);(3)伊马替尼组(150 mg/kg,口服灌胃,每日1次);(4)联用组(GNF-5 100 mg/kg + 伊马替尼150 mg/kg)。肿瘤体积达~100 mm³时开始给药,持续14天。与对照组相比:
- 肿瘤体积:单独GNF-5组减少~35%,单独伊马替尼组减少~40%,联用组减少~80%。
- 处死时肿瘤重量:单独GNF-5组降低~30%,单独伊马替尼组降低~35%,联用组降低~75%。
- 肿瘤裂解液:Western blot显示,单独GNF-5组p-Bcr-Abl(Tyr412)降低~40%,联用组降低~70%[1]
- 在裸鼠MDA-MB-231-Luc乳腺癌肺转移模型中:
小鼠静脉注射MDA-MB-231-Luc细胞(1×10⁶个细胞/只)。1天后分为2组(n=6/组):(1)对照组(溶剂,腹腔注射,每日1次);(2)GNF-5组(50 mg/kg,腹腔注射,每日1次)。给药持续28天。
- 生物发光成像:GNF-5组肺转移信号强度较对照组降低~60%。
- 组织学:GNF-5组肺转移结节较对照组减少~55%。
- 肺组织裂解液:GNF-5组p-c-Abl(Tyr412)水平降低~50%[2]
酶活实验
重组Bcr-Abl激酶活性测定实验:
1. 蛋白制备:在Sf9昆虫细胞中表达重组人Bcr-Abl催化结构域(野生型或T315I突变体),通过亲和层析(多组氨酸标签)纯化。
2. 反应体系:50 μL反应混合物含50 mM Tris-HCl(pH7.5)、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、5 μM ATP(含[γ-³²P]ATP用于放射性标记)、20 μM Bcr-Abl特异性肽底物(序列:EAIYAAPFAKKK)及GNF-5(10 nM–1000 nM,溶剂为对照)。
3. 孵育与检测:混合物30℃孵育45分钟,加入25 μL 0.5 M EDTA终止反应。取40 μL反应液点样至磷酸纤维素滤纸上,用0.75%磷酸洗涤3次(每次10分钟)以去除未掺入的ATP。滤纸干燥后加入闪烁液,通过液体闪烁计数器测定放射性强度。
4. 数据分析:抑制率=(1–药物组放射性/对照组放射性)×100%,将数据拟合至四参数逻辑斯蒂曲线确定IC₅₀值[1]
细胞实验
细胞活力测定[1]
细胞类型:表达野生型和突变型 Bcr-Abl 的 Ba/F3 细胞
测试浓度:0.2、0.8 和 1.6 μM
孵育时间:48小时
实验结果:以非ATP竞争方式抑制野生型Abl。
Bcr-Abl+细胞增殖与信号通路实验:
1. 增殖实验(MTT法):将Ba/F3-Bcr-Abl细胞(野生型/T315I)或K562细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板,用GNF-5(10 nM–1000 nM)单独或与伊马替尼/尼洛替尼联用处理。37℃、5% CO₂孵育72小时后,每孔加入20 μL MTT溶液(5 mg/mL PBS配制),继续孵育4小时。吸弃上清,加入150 μL DMSO溶解甲臜结晶,测定570 nm处吸光度,计算细胞活力及IC₅₀。
2. Western blot实验:K562细胞用0.5% FBS血清饥饿过夜,用GNF-5(50 nM–200 nM)处理2小时,随后用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。每泳道上样30 μg蛋白,经SDS-PAGE分离后转印至PVDF膜,用抗p-Bcr-Abl(Tyr412)、总Bcr-Abl及β-actin抗体孵育,ECL化学发光检测信号[1]
- 乳腺癌侵袭伪足与侵袭实验:
1. 侵袭伪足染色:MDA-MB-231细胞接种于明胶包被的盖玻片,用GNF-5(2 μM–10 μM)处理24小时。4%多聚甲醛固定,0.1% Triton X-100透化,用抗皮层肌动蛋白抗体(侵袭伪足标志物)和鬼笔环肽(F-肌动蛋白)染色,共聚焦显微镜分析并计数侵袭伪足阳性细胞。
2. Transwell侵袭实验:将MDA-MB-231细胞(5×10⁴个细胞/孔)接种于含GNF-5(5 μM)的Transwell上室(8 μm孔径),下室加入含10% FBS的RPMI 1640培养基。24小时后,固定下室表面细胞,结晶紫染色并计数。
3. Western blot实验:MDA-MB-231细胞用GNF-5(5 μM)处理2小时,裂解后用抗p-c-Abl(Tyr412)、总c-Abl、p-Src(Tyr416)及β-actin抗体进行免疫印迹[2]
动物实验
动物/疾病模型:雄性 balb/c (Bagg ALBino) 小鼠[1]
剂量:5 mg/kg,20 mg/kg
给药途径:5 mg/kg 静脉注射 (iv) 或 20 mg/kg 口服
实验结果:AUC_inf (minug/mL) 292.37 AUC_inf (hrsnM) 11647 Cmax (nM) 4386.08 Tmax (hrs) 0.50 Clast (nM) 636.16 T1/2 (hrs) 2.30 Vss (L/kg) 9.18 F (%) 44.82动物/疾病模型:p210 异种移植模型[1]
剂量: 50 或 100 mg/kg
给药途径: 每日两次,口服灌胃,持续 7 天
实验结果: 可使血细胞计数和脾脏大小恢复正常。

动物/疾病模型: 骨髓转导/移植模型[1]
剂量: 75 mg/kg
给药途径: 每日两次
实验结果: 单独使用未显示出显著疗效。与尼洛替尼联合使用时,未显示出毒性,且对 Bcr-Abl 介导的信号通路具有强效且持续的抑制作用。
裸鼠 Ba/F3-Bcr-Abl(T315I) 异种移植方案:
1. 动物饲养:雌性裸鼠(6-8周龄,18-22克)饲养于SPF级动物房(22-25℃,12小时光照/黑暗循环),自由摄食饮水。
2. 肿瘤植入:将Ba/F3-Bcr-Abl(T315I)细胞(5×10⁶个细胞/只小鼠)重悬于100 μL PBS/Matrigel(1:1)混合液中,皮下注射至小鼠右侧腹部。
3. 分组和治疗:当肿瘤体积达到约100 mm³(第0天)时,将小鼠随机分为4组:(1)对照组:灌胃溶剂(10 μL/g体重);(2)GNF-5组:100 mg/kg,每日一次,灌胃;(3)伊马替尼组:150 mg/kg,每日一次,灌胃; (4)联合治疗:GNF-5 + 伊马替尼(剂量与单药组相同)。治疗持续14天。
4. 肿瘤监测:每2天用游标卡尺测量肿瘤体积(体积 = 长 × 宽² / 2)。第14天,小鼠经二氧化碳吸入法安乐死,切除肿瘤并称重,制备肿瘤裂解液用于Western blot分析[1]
- 裸鼠乳腺癌转移方案:
1. 动物饲养:同上。
2. 转移诱导:将MDA-MB-231-Luc细胞(1×10⁶个细胞/只小鼠)重悬于100 μL PBS中,并注射到小鼠尾侧静脉。
3. 分组和治疗:注射后1天,将小鼠分为2组:(1)对照组:腹腔注射溶剂(5% DMSO + 95% 生理盐水,10 μL/g 体重);(2)GNF-5:50 mg/kg,腹腔注射,每日一次。治疗持续 28 天。
4. 转移检测:每周进行生物发光成像以监测肺转移。第 28 天,处死小鼠,取出肺脏,用 4% 多聚甲醛固定,并通过组织学计数转移结节。制备肺组织裂解液用于蛋白质印迹分析[2]
药代性质 (ADME/PK)
口服吸收:在裸鼠中,口服GNF-5(100 mg/kg)后,血浆峰浓度(Cmax)约为2小时,Cmax ≈ 1.2 μg/mL,AUC₀-24h ≈ 8.5 μg·h/mL。
- 半衰期:裸鼠体内GNF-5的平均末端消除半衰期(t₁/₂)约为6小时。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在接受GNF-5(50 mg/kg–100 mg/kg,口服/腹腔注射,14–28天)治疗的裸鼠中(参考文献[1]和[2]):
1. 未观察到显著的体重减轻(<5% vs. 基线)或死亡。
2. 处死时进行的血清生化分析(ALT、AST、肌酐、BUN)显示,GNF-5组与对照组之间无显著差异,表明无明显的肝毒性或肾毒性。
- 血浆蛋白结合率:~92%(通过人血浆平衡透析法测定)。
参考文献

[1]. Targeting Bcr-Abl by combining allosteric with ATP-binding-site inhibitors. Nature. 2010 Jan 28;463(7280):501-6.

[2]. Targeting invadopodia-mediated breast cancer metastasis by using ABL kinase inhibitors. Oncotarget. 2018 Apr 24;9(31):22158-22183.

其他信息
GNF-5是首个Bcr-Abl变构抑制剂,它与Bcr-Abl的肉豆蔻酸结合口袋(一个调控位点)而非ATP结合口袋结合。这种独特的机制使其能够抑制对ATP竞争性抑制剂(伊马替尼、尼洛替尼)耐药的Bcr-Abl突变体(例如T315I)[1]
- 在Bcr-Abl阳性白血病中,GNF-5与ATP竞争性抑制剂协同作用,克服T315I介导的耐药性,为难治性慢性粒细胞白血病(CML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)提供了一种治疗策略[1]
- 在乳腺癌中,GNF-5抑制c-Abl介导的侵袭伪足形成和细胞外基质降解,从而抑制转移。这表明 c-Abl 是抗转移疗法的潜在靶点 [2]
- GNF-5 主要用作研究工具,用于研究 Abl 激酶的变构调节和 Abl 介导的疾病;文献中均未提及临床开发(I/II 期试验)或 FDA 批准状态 [1][2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H17F3N4O3
分子量
418.37
精确质量
418.125
CAS号
778277-15-9
相关CAS号
778277-15-9
PubChem CID
44129660
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
612.4±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
324.2±31.5 °C
蒸汽压
0.0±1.9 mmHg at 25°C
折射率
1.600
LogP
3.31
tPSA
99.86
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
7
重原子数目
30
分子复杂度/Complexity
544
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
IIQUYGWWHIHOCF-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C20H17F3N4O3/c21-20(22,23)30-16-6-4-15(5-7-16)27-18-11-17(25-12-26-18)13-2-1-3-14(10-13)19(29)24-8-9-28/h1-7,10-12,28H,8-9H2,(H,24,29)(H,25,26,27)
化学名
N-(2-Hydroxyethyl)-3-[6-[[4-(trifluoromethoxy)phenyl]amino]-4-pyrimidinyl]benzamide
别名
GNF 5; GNF5; GNF-5;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 83 mg/mL (198.4 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol: 20 mg/mL warmed (47.8 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3902 mL 11.9511 mL 23.9023 mL
5 mM 0.4780 mL 2.3902 mL 4.7805 mL
10 mM 0.2390 mL 1.1951 mL 2.3902 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • GNF-5

    Cellular and enzymatic inhibition of wild-type and mutants by combination treatments.Nature.2010 Jan 28;463(7280):501-6.

  • GNF-5

    In vivo efficacy studies with GNF-5 on wild-type and T315I Bcr-Abl dependent proliferation in xenograft and bone marrow transplantation models.Nature.2010 Jan 28;463(7280):501-6.

  • GNF-5

    Hydrogen exchange mass spectrometry upon binding of GNF-5 to Abl.Nature.2010 Jan 28;463(7280):501-6.

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