| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TrkB (IC50 = 9 nM); TrkC (IC50 = 7 nM); TrkA (IC50 = 11 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：在过表达组成型活性 Tel-TRKC 融合体的 Ba/F3 细胞中，GNF-5837 显示出有效的抗 Trk 活性和有效的抗增殖活性，IC50 为 0.042 μM。激酶测定：TrkA和TrkC生化测定通过HTRF方法进行。反应混合物含有 1 μM 肽底物、1 μM ATP 以及反应缓冲液中的 1.8 nM TrkA 或 34 nM TrkC（50mM HEPES pH 7.1、10mM MgCl2、2 mM MnCl2、0.01% BSA、2.5 mM DTT 和 0.1 mM Na3VO4 ），最终体积为 10 μL。所有反应均在白色 ProxiPlate™ 384 孔 Plus 板中于室温下进行，并用 5 μL 0.2mM EDTA 猝灭 60 分钟。加入5 μL检测试剂（每孔2.5 ng PT66K和0.05 μg SAXL），将板在室温下孵育1小时，然后在EnVision读数器中读取。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 0.5%），并通过在测定条件下一式两份的12点（从50至0.000282μM）抑制曲线测定IC 50 值。 TrkB生化测定是通过卡尺微流控方法进行的。反应混合物含有 1 μM 肽底物、10 μM ATP 和 2 nM TrkB，反应缓冲液含有 100 mM HEPES、pH 7.5、5 mM MgCl2、0.01% Triton X-100、0.1% BSA、1 mM DTT、10 μMNa3VO4和10 μM β-甘油磷酸盐。反应在室温下进行3小时，产物通过Caliper EZ-reader测定。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 1%），并通过在测定条件下一式两份的12点（从50至0.000282μM）抑制曲线测定IC 50 值。细胞测定：测试化合物抑制wt Ba/F3细胞和用组成型表达的荧光素酶报告基因和BCR-ABL或Tel-KDR或其他Tel融合激酶转化的Ba/F3细胞增殖的能力。亲代Ba/F3细胞维持在含有重组小鼠IL3的培养基中，而激酶转化的Ba/F3细胞维持在不含IL-3的培养基中。通过液体处理系统 Echo 555 (Labcyte) 将 7.5 nL 化合物点样到 1536 孔测定板的每个孔中。然后将 700 个细胞接种到测定板的每个孔中，每孔含 7 μL 培养基，并以 3 倍系列稀释液在 0.17 nM 至 10 uM 下测试化合物。然后将细胞在 37°C 下孵育 48 小时。将 3 μL Bright-Glo® 添加到每个孔中，并使用 ViewLux 读取板。细胞系：Wt Ba/F3细胞和用组成型表达的荧光素酶报告基因和BCR-ABL或Tel-KDR或其他Tel融合激酶转化的Ba/F3细胞
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| 体内研究 (In Vivo) |
在雄性 Balb/c 小鼠和 Sprague-Dawley 大鼠中，GNF-5837 的药物清除率较低，生物利用度中等。在携带表达 TrkA 和 NGF 的 Rie 异种移植物的小鼠中，GNF-5837（100 mg/kg/d po）显着抑制肿瘤生长。
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| 酶活实验 |
TrkA 和 TrkC 生化测试使用 HTRF 技术进行。在反应缓冲液中（50 mM HEPES pH 7.1、10 mM MgCl2、2 mM MnCl2、0.01% BSA、2.5 mM DTT 和 0.1 mM Na 3VO4)，反应混合物含有 1 μM 肽底物、1 μM ATP 和 1.8 nM TrkA 或 34 nM TrkC。混合物的最终体积为 10 μL。每个反应均在白色 ProxiPlateTM 384 孔 Plus 板中于室温下进行，60 分钟后，使用 5 μL 0.2mM EDTA 淬灭反应。加入5 μL检测试剂（0.05 μg SAXL和2.5 ng PT66K）后，室温孵育1小时，然后使用EnVision读数器读取结果。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 0.5%），并且一式两份地使用12点（从50至0.000282μM）抑制曲线来确定测定条件下的IC 50 值。 TrkB 生化测定是使用微流控卡尺方法进行的。在含有 100 mM HEPES、pH 7.5、5 mM MgCl2、0.01% Triton X-100、0.1% BSA、1 mM DTT、10 μM Na3 的反应缓冲液中>VO4和10μMβ-甘油磷酸，反应混合物含有1μM肽底物、10μM ATP和2nM TrkB。 Caliper EZ-reader 用于测定反应在室温下进行三小时后的产物。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 1%），并且一式两份地使用12点（从50至0.000282μM）抑制曲线来确定测定条件下的IC 50 值。
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| 细胞实验 |
使用组成型表达的荧光素酶报告基因和 BCR-ABL、Tel-KDR 或其他 Tel 融合激酶评估化合物阻止野生型和转化 Ba/F3 细胞生长的能力。激酶转化的 Ba/F3 细胞保存在不含 IL-3 的培养基中，而亲本 Ba/F3 细胞则保存在含有重组小鼠 IL3 的培养基中。使用液体处理系统 Echo 555 (Labcyte)，将 7.5 nL 化合物点样到 1536 孔测定板的每个孔中。随后将 700 个细胞置于 7 μL 培养基中，放入测定板的每个孔中，并以 0.17 nM 至 10 uM 范围内的 3 倍系列稀释度测试化合物。然后将细胞在 37°C 下孵育 48 小时。每个孔接收 3 μL Bright-Glo®，并使用 ViewLux 读取板。
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| 动物实验 |
Mice bearing Rie xenografts expressing TrkA and NGF.
100 mg/kg/d p.o. |
| 参考文献 |
| 分子式 |
C28H21F4N5O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
535.49
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| 精确质量 |
535.16
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| 元素分析 |
C, 62.80; H, 3.95; F, 14.19; N, 13.08; O, 5.98
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| CAS号 |
1033769-28-6
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| 相关CAS号 |
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| SMILES |
CC1=C(C=C(C=C1)NC(=O)NC2=C(C=CC(=C2)C(F)(F)F)F)NC3=CC4=C(C=C3)/C(=C/C5=CC=CN5)/C(=O)N4
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| InChi Key |
YYDUWLSETXNJJT-MTJSOVHGSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H21F4N5O2/c1-15-4-6-19(35-27(39)37-25-11-16(28(30,31)32)5-9-22(25)29)13-23(15)34-18-7-8-20-21(12-17-3-2-10-33-17)26(38)36-24(20)14-18/h2-14,33-34H,1H3,(H,36,38)(H2,35,37,39)/b21-12-
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| 化学名 |
1-[2-fluoro-5-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[4-methyl-3-[[(3Z)-2-oxo-3-(1H-pyrrol-2-ylmethylidene)-1H-indol-6-yl]amino]phenyl]urea
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外) |
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| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8674 mL | 9.3372 mL | 18.6745 mL | |
| 5 mM | 0.3735 mL | 1.8674 mL | 3.7349 mL | |
| 10 mM | 0.1867 mL | 0.9337 mL | 1.8674 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Efficacy of GNF-5837 (22) in Rie-TRKAmNGF xenograft model. ACS Med Chem Lett. 2012 Feb 9; 3(2): 140–145. |
X-ray crystal structure of compound 20 (stick representation; carbon in yellow, oxygen in red, nitrogen in blue, and fluorine in light blue) binding to the active site of TRKC kinase domain. ACS Med Chem Lett. 2012 Jan 1;3(2):140-5. |
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