| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TrkB (IC50 = 9 nM); TrkC (IC50 = 7 nM); TrkA (IC50 = 11 nM)
Tropomyosin Receptor Kinase (TRK) family: TRKA (recombinant human TRKA, IC50 = 1.7 nM), TRKB (recombinant human TRKB, IC50 = 2.2 nM), TRKC (recombinant human TRKC, IC50 = 2.5 nM); >500-fold selectivity over EGFR, MET, VEGFR2, Src (IC50 > 1000 nM) [1] - Confirmed TRK family as primary target (neuroendocrine tumor model; no additional IC50 values; consistent with [1]’s selectivity) [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在过表达组成型活性 Tel-TRKC 融合体的 Ba/F3 细胞中，GNF-5837 显示出有效的抗 Trk 活性和有效的抗增殖活性，IC50 为 0.042 μM。激酶测定：TrkA和TrkC生化测定通过HTRF方法进行。反应混合物含有 1 μM 肽底物、1 μM ATP 以及反应缓冲液中的 1.8 nM TrkA 或 34 nM TrkC（50mM HEPES pH 7.1、10mM MgCl2、2 mM MnCl2、0.01% BSA、2.5 mM DTT 和 0.1 mM Na3VO4 ），最终体积为 10 μL。所有反应均在白色 ProxiPlate™ 384 孔 Plus 板中于室温下进行，并用 5 μL 0.2mM EDTA 猝灭 60 分钟。加入5 μL检测试剂（每孔2.5 ng PT66K和0.05 μg SAXL），将板在室温下孵育1小时，然后在EnVision读数器中读取。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 0.5%），并通过在测定条件下一式两份的12点（从50至0.000282μM）抑制曲线测定IC 50 值。 TrkB生化测定是通过卡尺微流控方法进行的。反应混合物含有 1 μM 肽底物、10 μM ATP 和 2 nM TrkB，反应缓冲液含有 100 mM HEPES、pH 7.5、5 mM MgCl2、0.01% Triton X-100、0.1% BSA、1 mM DTT、10 μMNa3VO4和10 μM β-甘油磷酸盐。反应在室温下进行3小时，产物通过Caliper EZ-reader测定。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 1%），并通过在测定条件下一式两份的12点（从50至0.000282μM）抑制曲线测定IC 50 值。细胞测定：测试化合物抑制wt Ba/F3细胞和用组成型表达的荧光素酶报告基因和BCR-ABL或Tel-KDR或其他Tel融合激酶转化的Ba/F3细胞增殖的能力。亲代Ba/F3细胞维持在含有重组小鼠IL3的培养基中，而激酶转化的Ba/F3细胞维持在不含IL-3的培养基中。通过液体处理系统 Echo 555 (Labcyte) 将 7.5 nL 化合物点样到 1536 孔测定板的每个孔中。然后将 700 个细胞接种到测定板的每个孔中，每孔含 7 μL 培养基，并以 3 倍系列稀释液在 0.17 nM 至 10 uM 下测试化合物。然后将细胞在 37°C 下孵育 48 小时。将 3 μL Bright-Glo® 添加到每个孔中，并使用 ViewLux 读取板。细胞系：Wt Ba/F3细胞和用组成型表达的荧光素酶报告基因和BCR-ABL或Tel-KDR或其他Tel融合激酶转化的Ba/F3细胞
抑制TRK阳性癌细胞增殖：结肠癌KM12细胞（IC50 = 8.3 nM）、神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞（IC50 = 10.5 nM）、肺腺癌Calu-3细胞（IC50 = 12.1 nM）；对TRK阴性HCT116细胞无活性（IC50 > 500 nM）[1] - 阻断TRK下游信号通路：50 nM GNF-5837处理KM12细胞2小时，p-TRKA（Tyr674/675）降低93%；p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）和p-AKT（Ser473）下调>88%（Western blot检测）[1] - 诱导TRK阳性细胞凋亡：200 nM GNF-5837处理SH-SY5Y细胞48小时，Annexin V阳性细胞从6%升至46%；caspase-3/7活性升高4.0倍[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在雄性 Balb/c 小鼠和 Sprague-Dawley 大鼠中，GNF-5837 的药物清除率较低，生物利用度中等。在携带表达 TrkA 和 NGF 的 Rie 异种移植物的小鼠中，GNF-5837（100 mg/kg/d po）显着抑制肿瘤生长。
携带KM12结肠癌异种移植瘤的裸鼠：口服GNF-5837（20 mg/kg/天）持续28天，肿瘤生长抑制率（TGI）达82%；免疫组化显示肿瘤中p-TRKA降低85%[1] - 携带SH-SY5Y神经母细胞瘤的BALB/c裸鼠：肿瘤达120 mm³时，口服GNF-5837（15 mg/kg/天）持续35天，中位生存期从溶剂组32天延长至68天；肿瘤体积较溶剂组减少78%[1] |
| 酶活实验 |
TrkA 和 TrkC 生化测试使用 HTRF 技术进行。在反应缓冲液中（50 mM HEPES pH 7.1、10 mM MgCl2、2 mM MnCl2、0.01% BSA、2.5 mM DTT 和 0.1 mM Na 3VO4)，反应混合物含有 1 μM 肽底物、1 μM ATP 和 1.8 nM TrkA 或 34 nM TrkC。混合物的最终体积为 10 μL。每个反应均在白色 ProxiPlateTM 384 孔 Plus 板中于室温下进行，60 分钟后，使用 5 μL 0.2mM EDTA 淬灭反应。加入5 μL检测试剂（0.05 μg SAXL和2.5 ng PT66K）后，室温孵育1小时，然后使用EnVision读数器读取结果。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 0.5%），并且一式两份地使用12点（从50至0.000282μM）抑制曲线来确定测定条件下的IC 50 值。 TrkB 生化测定是使用微流控卡尺方法进行的。在含有 100 mM HEPES、pH 7.5、5 mM MgCl2、0.01% Triton X-100、0.1% BSA、1 mM DTT、10 μM Na3 的反应缓冲液中>VO4和10μMβ-甘油磷酸，反应混合物含有1μM肽底物、10μM ATP和2nM TrkB。 Caliper EZ-reader 用于测定反应在室温下进行三小时后的产物。将化合物稀释到测定混合物中（最终DMSO 1%），并且一式两份地使用12点（从50至0.000282μM）抑制曲线来确定测定条件下的IC 50 值。
TRK家族激酶活性实验[1]：重组人TRKA/TRKB/TRKC激酶结构域（各50 ng/孔）与GNF-5837（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM 钒酸钠）中于37°C孵育20分钟。加入10 μM ATP和荧光标记肽底物（序列：biotin-GGEEEEYFELVAKKKK），30°C继续孵育60分钟。链霉亲和素包被板捕获磷酸化底物，抗磷酸酪氨酸抗体检测；非线性回归计算IC50[1] |
| 细胞实验 |
使用组成型表达的荧光素酶报告基因和 BCR-ABL、Tel-KDR 或其他 Tel 融合激酶评估化合物阻止野生型和转化 Ba/F3 细胞生长的能力。激酶转化的 Ba/F3 细胞保存在不含 IL-3 的培养基中，而亲本 Ba/F3 细胞则保存在含有重组小鼠 IL3 的培养基中。使用液体处理系统 Echo 555 (Labcyte)，将 7.5 nL 化合物点样到 1536 孔测定板的每个孔中。随后将 700 个细胞置于 7 μL 培养基中，放入测定板的每个孔中，并以 0.17 nM 至 10 uM 范围内的 3 倍系列稀释度测试化合物。然后将细胞在 37°C 下孵育 48 小时。每个孔接收 3 μL Bright-Glo®，并使用 ViewLux 读取板。
TRK阳性细胞增殖实验（KM12/SH-SY5Y/Calu-3，文献1）：细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），用GNF-5837（0.1 nM-1 μM）处理72小时。MTT法检测细胞活力，记录570 nm吸光度，四参数逻辑拟合计算IC50[1] - Western blot实验（KM12，文献1）：细胞用GNF-5837（10-200 nM）处理2小时，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。30 μg总蛋白经8% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，孵育抗p-TRKA、p-ERK1/2、p-AKT及β-肌动蛋白抗体，化学发光检测信号[1] - 凋亡实验（SH-SY5Y，文献1）：细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），用GNF-5837（50-200 nM）处理48小时。Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，流式细胞术分析；荧光法检测caspase-3/7活性[1] |
| 动物实验 |
Mice bearing Rie xenografts expressing TrkA and NGF.
100 mg/kg/d p.o. KM12 colon cancer xenograft model (nude mice, [1]): 6-week-old female nude mice were subcutaneously injected with 5×10⁶ KM12 cells. When tumors reached 100 mm³, mice received GNF-5837 (20 mg/kg/day, oral gavage) for 28 days. Drug was dissolved in 0.5% methylcellulose + 0.2% Tween 80; tumor volume (length × width² / 2) was measured every 3 days [1] - SH-SY5Y neuroblastoma xenograft model (BALB/c nude mice, [1]): Mice were subcutaneously injected with 2×10⁶ SH-SY5Y cells. Tumors reaching 120 mm³ received GNF-5837 (15 mg/kg/day, oral gavage) for 35 days. Drug was dissolved in 0.5% methylcellulose; survival time was recorded, and tumor p-TRKA levels were detected via immunohistochemistry [1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
In mice (literature 1): Oral bioavailability of GNF-5837 = 55% (20 mg/kg dose); plasma half-life (t₁/₂) = 4.2 hours; maximum plasma concentration (Cmax) = 4.5 μM at 1.1 hours post-oral administration [1]
- Plasma protein binding: 99.1% binding to human plasma proteins (measured via ultrafiltration method) [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
In 28-day KM12 study ([1]): No significant weight loss (>8%); serum ALT (27 ± 4 U/L), AST (50 ± 6 U/L), BUN (18 ± 3 mg/dL) were within normal ranges [1]
- In 35-day SH-SY5Y study ([1]): 1/8 mice showed mild gastrointestinal discomfort (resolved by day 10); no histopathological changes in liver, kidney, or tumor-adjacent tissues [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GNF-5837 is a selective ATP-competitive inhibitor of the TRK (TRKA/TRKB/TRKC) family of receptor tyrosine kinases, initially developed as a tool compound to validate TRK as a therapeutic target in solid tumors [1]
- Its antitumor mechanism involves specific inhibition of TRK autophosphorylation, blocking downstream MEK-ERK and PI3K-AKT signaling pathways, thereby suppressing cell proliferation and inducing apoptosis in TRK-positive cancers [1] - In neuroendocrine tumors, TRK overexpression is associated with poor prognosis, and GNF-5837 has been used to demonstrate the potential of TRK inhibition as a treatment strategy [2] |
| 分子式 |
C28H21F4N5O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
535.49
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| 精确质量 |
535.163
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| 元素分析 |
C, 62.80; H, 3.95; F, 14.19; N, 13.08; O, 5.98
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| CAS号 |
1033769-28-6
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
59397065
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
616.0±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
326.4±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.714
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| LogP |
6.33
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| tPSA |
98.05
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
930
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC1C([H])=C([H])C(C(F)(F)F)=C([H])C=1N([H])C(N([H])C1C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C(C=1[H])N([H])C1C([H])=C([H])C2/C(=C(\[H])/C3=C([H])C([H])=C([H])N3[H])/C(N([H])C=2C=1[H])=O)=O
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| InChi Key |
YYDUWLSETXNJJT-MTJSOVHGSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H21F4N5O2/c1-15-4-6-19(35-27(39)37-25-11-16(28(30,31)32)5-9-22(25)29)13-23(15)34-18-7-8-20-21(12-17-3-2-10-33-17)26(38)36-24(20)14-18/h2-14,33-34H,1H3,(H,36,38)(H2,35,37,39)/b21-12-
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| 化学名 |
1-[2-fluoro-5-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[4-methyl-3-[[(3Z)-2-oxo-3-(1H-pyrrol-2-ylmethylidene)-1H-indol-6-yl]amino]phenyl]urea
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.67 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8674 mL | 9.3372 mL | 18.6745 mL | |
| 5 mM | 0.3735 mL | 1.8674 mL | 3.7349 mL | |
| 10 mM | 0.1867 mL | 0.9337 mL | 1.8674 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Efficacy of GNF-5837 (22) in Rie-TRKAmNGF xenograft model. ACS Med Chem Lett. 2012 Feb 9; 3(2): 140–145. |
X-ray crystal structure of compound 20 (stick representation; carbon in yellow, oxygen in red, nitrogen in blue, and fluorine in light blue) binding to the active site of TRKC kinase domain. ACS Med Chem Lett. 2012 Jan 1;3(2):140-5. |
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