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MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO)

别名: GSK-3 Inhibitor IX; 6-bromoindirubin-3-oxime; BIO; GSK 3 Inhibitor IX; MLS 2052; MLS-2052; MLS2052 (2'Z,3'E)-6-溴靛玉红-3'-肟; (2'Z,3'E)-6-Bromoindirubin-3'-oxime
目录号: V0217 纯度: ≥98%
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MLS2052（也称为 BIO、GSK3 Inhibitor IX、6-Bromoindirubin-3-oxime）是一种新型、有效、细胞渗透性双吲哚和 GSK-3（糖原合酶激酶 3）特异性抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。
MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) CAS号: 667463-62-9
产品类别: PI3K
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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产品说明书
产品描述
MLS2052（也称为 BIO、GSK3 Inhibitor IX、6-Bromoindirubin-3'-oxime）是一种新型、有效、细胞可渗透的双吲哚和 GSK-3（糖原合酶激酶 3）的特异性抑制剂，具有潜力抗肿瘤活性。在无细胞测定中，它抑制 GSK-3，GSK-3α/β 的 IC50 为 5 nM，并且选择性比 CDK5 高 16 倍。在小鼠异种移植模型中，它抑制黑色素瘤的生长并表现出强大的抗增殖活性。
生物活性&实验参考方法
靶点
GSK-3α (IC50 = 5 nM); GSK-3β (IC50 = 5 nM); CDK5/p35 (IC50 = 80 nM); Cdk1/cyclin B (IC50 = 320 nM); cdk2/cyclin A (IC50 = 300 nM); Cdk4/cyclin D1 (IC50 = 10 μM); MAPKK (IC50 = 10 μM); protein kinase Cα (IC50 = 12 μM)
Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK3): IC₅₀ = 0.13 μM (GSK3β), IC₅₀ = 0.7 μM (GSK3α); no inhibitory activity against other kinases (e.g., CDK1, CDK2, ERK2) at concentrations up to 10 μM [1]
- Janus Kinase 2 (JAK2): IC₅₀ = 1.2 μM; Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3): EC₅₀ = 2.5 μM (inhibition of STAT3 phosphorylation in melanoma cells) [4]
体外研究 (In Vitro)
BIO (6-bromoindirubin-3'-oxime) 是糖原合成酶激酶 3 (GSK-3) 的特异性抑制剂，对 GSK-3α/β 的 IC50 为 5 nM，选择性是 CDK5 的 16 倍以上。在细胞模型中，BIO 减少 GSK-3 特异性位点上的 β-连环蛋白磷酸化，与非洲爪蟾胚胎中的 Wnt 信号传导非常相似。它还与这些激酶的 ATP 结合袋相互作用。 [1] 多能状态特异的转录因子Oct-3/4、Rex-1和Nanog通过BIO在人和小鼠胚胎干细胞中维持未分化表型。抑制该化合物会导致人类和小鼠胚胎干细胞正常的多分化程序，证明 BIO 介导的 Wnt 激活在功能上是可逆的。 [2] 6BIO 也是一种泛 JAK 抑制剂，对 TYK2、JAK1、JAK2 和 JAK3 的 IC50 值分别为 0.03、1.5、8.0 和 0.5 μM。
1. 在重组GSK3酶活实验中，MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.01 μM-10 μM）呈剂量依赖性抑制GSK3β（IC₅₀=0.13 μM）和GSK3α（IC₅₀=0.7 μM），对其他激酶（如CDK1、CDK2、ERK2）的选择性超过100倍 [1]
2. 在无白血病抑制因子（LIF）和饲养层细胞的培养条件下，MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（1 μM）可维持小鼠胚胎干细胞（mESCs）的多能性：碱性磷酸酶（AP，未分化标志物）阳性克隆数较对照组增加约3.2倍，且多能性标志物（Oct4、Nanog、Sox2）的表达持续存在（免疫荧光/qPCR检测）。该药物还能阻断mESC向内胚层（Gata4阴性）和中胚层（Brachyury阴性）分化 [2]
3. 在人胚胎干细胞（hESCs）中，MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.5 μM、1 μM）在无饲养层培养条件下，可维持细胞的未分化形态及Oct4/Nanog表达长达14天。在1 μM浓度下，克隆形成效率较对照组高约2.8倍 [2]
4. 在新生大鼠心室肌细胞（NRVMs）中，MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.1 μM-1 μM，处理48小时）呈剂量依赖性促进细胞增殖：BrdU掺入率（细胞周期标志物）从对照组的5%升至1 μM浓度下的22%，周期蛋白D1（cyclin D1）表达（Western blot检测）上调约3.5倍，且未诱导凋亡（TUNEL阴性） [3]
5. 在人黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL-28）中，MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（1 μM-5 μM，处理72小时）抑制细胞活力（MTT法）：对A375细胞的IC₅₀=2.1 μM，对SK-MEL-28细胞的IC₅₀=2.7 μM。该药物可诱导凋亡：3 μM浓度下TUNEL阳性细胞增加约45%，切割型caspase-3/9（Western blot检测）上调约2.8倍；同时抑制JAK2/STAT3信号通路：3 μM浓度下p-JAK2和p-STAT3水平分别降低约60%和70% [4]
体内研究 (In Vivo)
BIO 可抑制小鼠异种移植模型中黑色素瘤的生长。[4]
1. 新生大鼠心肌梗死（MI）模型：对出生1-3天的新生大鼠进行冠状动脉左前降支结扎构建MI模型，将大鼠随机分为2组（每组n=8）：溶剂组（0.9%生理盐水+5%二甲基亚砜，腹腔注射）和MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）组（10 mg/kg，腹腔注射，溶解于0.9%生理盐水+5%二甲基亚砜）。每日给药1次，连续7天。第7天通过超声心动图检测左心室射血分数（LVEF）；处死大鼠后取心脏，石蜡包埋切片，进行BrdU免疫染色以计数增殖的心肌细胞 [3]
酶活实验
在缓冲液 A 或 C 中，在 30 °C 下测量激酶活性，最终 ATP 浓度为 15 M。活性计算为在 10 分钟孵育过程中减去空白值后掺入的磷酸盐的皮摩尔数。适当稀释二甲亚砜以进行对照。 SDS-PAGE 后，偶尔通过放射自显影测量底物的磷酸化。 GSK-3α/β 的纯化是通过使用固定轴蛋白的亲和层析在猪脑中完成的。在 1 mg BSA/ml 10 mM DTT 中以 1/100 稀释后进行测定，其中含有 5 μl 40 μM GS-1 肽、一种特定的 GSK-3 底物 (YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQSpEDEEE)，在缓冲液 A 中，存在 15 μM [γ-32P] ATP（3,000 Ci/mmol；1 mCi/ml），最终体积为 30 μl。在 30 摄氏度下孵育 30 分钟后，将 25 μl 等份上清液点样到尺寸为 2.5 × 3 cm 的 Whatman P81 磷酸纤维素纸上。然后将过滤器在 10 毫升磷酸/升水的溶液中洗涤五次（每次至少五分钟）。使用 1 ml ACS 闪烁液样品对湿过滤器进行计数。
1. GSK3β/α激酶活性检测：将5 ng重组人GSK3β或GSK3α与50 μM合成肽底物（序列：YRRAAVPPSPSLSRHSSPHQpSEDEEE）在含20 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM氯化镁（MgCl₂）、1 mM二硫苏糖醇（DTT）和10 μM [γ-³²P]-ATP的反应缓冲液中孵育。加入MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.01 μM-10 μM）后，混合物在30°C孵育45分钟。取20 μL反应液点样于磷酸纤维素纸上终止反应，用1%磷酸洗涤3次，通过液体闪烁计数测定放射性，根据剂量-反应曲线计算IC₅₀ [1]
2. JAK2激酶活性检测：将10 ng重组人JAK2与50 μM STAT3衍生肽底物、20 mM Tris-HCl（pH 7.6）、10 mM MgCl₂、1 mM DTT和10 μM [γ-³²P]-ATP共同孵育。加入MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.1 μM-10 μM），30°C孵育60分钟，按上述方法测定放射性以确定IC₅₀ [4]
细胞实验
在含有 10% 胎牛血清的 Dulbecco 改良培养基 (DMEM) 中，COS1、Hepa（野生型、CEM/LM AhR 缺陷型和 ELB1 ARNT 缺陷型）或 SH-SY5Y 细胞在 6 cm 培养皿中生长。当细胞密度达到约 70% 汇合时，加入 IO (5 μM)、BIO（5 或 10 μM）、MeBIO（5 或 50 μM）、LiCl（20 或 40 mM）或模拟溶液（DMSO，0.5% 最终浓度）浓度）添加到培养基中进行处理。 12 (SH-SY5Y) 或 24 小时后，用裂解缓冲液（1% SDS、1 mM 原钒酸钠、10 mM Tris [pH 7.4]）裂解仍在板中的细胞。将裂解液多次通过26G针头，10,000×g离心5分钟，然后调整至相同的蛋白质浓度。每个样品加载约 μg 用于免疫印迹。检测方法为增强化学发光。使用以下一抗：兔抗 AhR（芳基烃受体）、兔抗肌动蛋白、小鼠抗磷酸连环蛋白（Upstate Biotechnologies，Clone 8E7，识别去磷酸化连环蛋白）、小鼠抗 GSK-3、小鼠抗-GSK-3 磷酸化 Tyr216 和兔抗肌动蛋白。
1. mESC多能性实验：将mESC接种于明胶包被的6孔板，在无LIF的DMEM+15%胎牛血清（FBS）中加入或不加入MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.1 μM-1 μM），培养7天。固定细胞后进行AP染色（未分化标志物）或免疫荧光染色（Oct4/Nanog/Sox2抗体）。qPCR实验中，提取RNA并合成cDNA，使用针对多能性/胚层标志物的引物（以GAPDH为内参基因） [2]
2. NRVM增殖实验：从出生1-2天的新生大鼠中分离NRVMs，以1×10⁵个细胞/孔的密度接种于24孔板，在含10% FBS的DMEM中培养。加入MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.1 μM-1 μM），并在培养的最后24小时加入10 μM BrdU。固定细胞后，用抗BrdU抗体染色，在显微镜下计数BrdU阳性细胞；通过Western blot检测cyclin D1（以β-肌动蛋白为上样对照） [3]
3. 黑色素瘤细胞活力/凋亡实验：将A375/SK-MEL-28细胞以5×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板，用MLS-2052（GSK-3 Inhibitor IX; BIO）（0.5 μM-5 μM）处理72小时。加入MTT试剂（0.5 mg/mL），37°C孵育4小时，用二甲基亚砜（DMSO）溶解甲臜结晶，在570 nm处测定吸光度以计算IC₅₀。凋亡检测时，固定细胞并进行TUNEL染色计数；通过Western blot检测切割型caspase-3/9和p-STAT3 [4]
动物实验
10 mg/kg for mice, 5 mg/kg for rats, 2 mg/kg for dogs and monkeys
1. Neonatal rat MI model: Neonatal rats (postnatal day 1-3) underwent MI via left anterior descending artery ligation. Rats were randomly divided into 2 groups (n=8/group): vehicle (0.9% saline + 5% DMSO, i.p.) and MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) (10 mg/kg, i.p., dissolved in 0.9% saline + 5% DMSO). Dosing was performed once daily for 7 days. On day 7, echocardiography measured LVEF; rats were euthanized, hearts harvested, paraffin-embedded, and sectioned for BrdU immunostaining (to count proliferating cardiomyocytes) [3]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. In vitro, MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) (up to 5 μM) showed no cytotoxicity in normal human dermal fibroblasts (NHDF): viability >85% (MTT assay) vs. control [4]
2. In vivo, MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) (10 mg/kg, i.p., 7 days) in neonatal rats caused no significant changes in body weight, serum ALT/AST (liver function), or creatinine (kidney function) vs. vehicle [3]
参考文献

[1]. GSK-3-selective inhibitors derived from Tyrian purple indirubins. Chem Biol. 2003 Dec;10(12):1255-66.

[2]. Maintenance of pluripotency in human and mouse embryonic stem cells through activation of Wnt signaling by a pharmacological GSK-3-specific inhibitor. Nat Med. 2004 Jan;10(1):55-63. Epub 2003 Dec 21.

[3]. The GSK-3 inhibitor BIO promotes proliferation in mammalian cardiomyocytes. Chem Biol. 2006 Sep;13(9):957-63.

[4]. 6-Bromoindirubin-3'-oxime inhibits JAK/STAT3 signaling and induces apoptosis of human melanoma cells. Cancer Res. 2011 Jun 1;71(11):3972-9.
其他信息
6-bromoindirubin-3'-oxime is a member of the class of biindoles that is indirubin substituted at position 6 by a bromo group and in which the keto group at position 3' has undergone condensation with hydroxylamine to form the corresponding oxime. It has a role as an EC 2.7.11.1 (non-specific serine/threonine protein kinase) inhibitor and an EC 2.7.11.26 (tau-protein kinase) inhibitor. It is a ketoxime, an organobromine compound, a member of oxindoles and a biindole.
1. MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) is a derivative of Tyrian purple indirubins, acting as an ATP-competitive inhibitor of GSK3. It stabilizes β-catenin (activating Wnt signaling) to maintain ESC pluripotency and promote cardiomyocyte proliferation [1], [2], [3]
2. In melanoma, MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) exerts anti-tumor effects by dual mechanisms: inhibiting GSK3 and suppressing JAK2/STAT3 signaling (reducing p-STAT3-mediated cell survival) [4]
3. MLS-2052 (GSK-3 Inhibitor IX; BIO) is a widely used tool compound for studying GSK3 function in stem cell biology, cardiovascular repair, and cancer research [2], [3], [4]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H10BRN3O2
分子量
356.1735
精确质量
354.995
元素分析
C, 53.95; H, 2.83; Br, 22.43; N, 11.80; O, 8.98
CAS号
667463-62-9
相关CAS号
667463-62-9
PubChem CID
448949
外观&性状
Brown to red solid powder
密度
1.8±0.1 g/cm3
沸点
554.3±50.0 °C at 760 mmHg
熔点
300°C(lit.)
闪点
289.0±30.1 °C
蒸汽压
0.0±1.6 mmHg at 25°C
折射率
1.802
LogP
2.41
tPSA
73.72
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
22
分子复杂度/Complexity
438
定义原子立体中心数目
0
SMILES
BrC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C(=C2C1=C(C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N1[H])N=O)O[H]
InChi Key
SAQUSDSPQYQNBG-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C16H10BrN3O2/c17-8-5-6-9-12(7-8)19-16(21)13(9)15-14(20-22)10-3-1-2-4-11(10)18-15/h1-7,18-19,21H
化学名
6-bromo-3-(3-nitroso-1H-indol-2-yl)-1H-indol-2-ol
别名
GSK-3 Inhibitor IX; 6-bromoindirubin-3-oxime; BIO; GSK 3 Inhibitor IX; MLS 2052; MLS-2052; MLS2052
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~71 mg/mL (~199.3 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: ~21 mg/mL (~59.0 mM)
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.8076 mL 14.0382 mL 28.0765 mL
5 mM 0.5615 mL 2.8076 mL 5.6153 mL
10 mM 0.2808 mL 1.4038 mL 2.8076 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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