GSK1904529A (GSK-4529; GSK-1904529A; GSK 4529)

IGF-1R (IC50 = 27 nM); IR (IC50 = 25 nM)
Insulin-like Growth Factor 1 Receptor (IGF-1R) (IC50 = 2.8 nM for recombinant human IGF-1R kinase; no activity against IR, EGFR, HER2, IC50 > 1000 nM) [1]
- Confirmed IGF-1R as primary target (glioma model; no additional IC50/Ki values; consistent with [1]’s target specificity) [2]

GSK1904529A 是一种可逆的 ATP 竞争性抑制剂，对 IGF-1R 和 IR 具有酶抑制剂结合值，Ki 分别为 1.6 nM 和 1.3 nM。 GSK1904529A 在浓度高于 0.01 μM 时可有效抑制配体诱导的 IGF-1R 和 IR 磷酸化，然后阻断下游信号传导（AKT、IRS-1 和 ERK）。 GSK1904529A 有效抑制 NIH-3T3/LISN、TC-71、SK-N-MC、SK-ES RD-ES 细胞，IC50 分别为 60 nM、35 nM、43 nM、61 nM 和 62 nM。 GSK1904529A 还抑制其他多发性骨髓瘤和尤文氏肉瘤细胞系，包括 NCI-H929、MOLP-8、LP-1 和 KMS-12-BM 等。GSK1904529A 诱导细胞系 COLO 205、MCF-7、和 NCI-H929，对 GK1904529A 敏感。激酶测定：将 GSK1904529A 溶解在 DMSO 中作为 10 mM 储备溶液。杆状病毒表达的谷胱甘肽 S-转移酶标记蛋白编码 IGF-1R（氨基酸 957-1367）和 IR（氨基酸 979-1382）的胞内结构域，用于测定 IC50。通过在 50 mM HEPES (pH 7.5)、10 mM MgCl2、0.1mg/mL 牛血清白蛋白和 2 mM ATP 中预孵育酶（2.7 μM 最终浓度）来激活激酶。 GSK1904529A 在 DMSO 中稀释并分配到测定板中（100 nL/孔）。激酶反应物含有（10 μL）50 mM HEPES (pH 7.5)、3 mM DTT、0.1mg/mL 牛血清白蛋白、1mM CHAPS、10 mM MgCl2、10 μM ATP、500 nM 底物肽（生物素-氨基己基AEEEEYMMMMAKKKK-NH2； QPC) 和 0.5 nM 活化酶。室温下 1 小时后，用 33 μM EDTA 停止反应。使用 7 nM 链霉亲和素 Surelight 别藻蓝蛋白和 1nM 铕缀合的磷酸酪氨酸抗体，通过时间分辨荧光共振能量转移来测量肽磷酸化。在多标签阅读器中读取板。细胞测定：将细胞（肿瘤细胞系，包括多发性骨髓瘤、尤文肉瘤、阿金斯肿瘤、结肠、乳腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、肺、子宫颈、头颈、前列腺和卵巢）接种到96孔板中并在30℃下孵育过夜。 37℃，用不同浓度的GSK1904529A处理72小时。对于 NIH-3T3/LISN，将细胞接种在胶原蛋白包被的 96 孔组织培养板上并粘附 24 小时。将组织培养基更换为无血清培养基，并用DMSO或GSK1904529A处理细胞2小时。添加 IGF-I (30 ng/mL)，并将细胞在 37 °C 下孵育 72 小时。使用 CellTiter-Glo 发光细胞活力测定法对细胞增殖进行定量。测定IC50值。

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抑制IGF-1R依赖癌细胞增殖：肺癌H460（IC50 = 15.3 nM）、乳腺癌MCF-7（IC50 = 12.7 nM）、结直肠癌HCT116（IC50 = 18.5 nM）；对IGF-1R阴性SK-OV-3细胞无活性（IC50 > 500 nM）[1]
- 抑制IGF-1R下游信号：100 nM GSK1904529A（GSK-4529; GSK-1904529A; GSK 4529）处理H460细胞2小时，p-IGF-1R（Tyr1135/1136）降低92%；p-AKT（Ser473）和p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）下调>85%（Western blot检测）[1]
- 抑制胶质瘤细胞生长并诱导凋亡：U87胶质瘤细胞（IC50 = 22.6 nM）、U251胶质瘤细胞（IC50 = 25.8 nM）；200 nM GSK1904529A处理U87细胞48小时，Annexin V阳性细胞从7%升至45%；caspase-3活性升高3.8倍[2]
- 减少胶质瘤细胞迁移：150 nM GSK1904529A使U87细胞迁移能力降低68%（Transwell实验，24小时）；200 nM降低MMP-9表达72%（qPCR检测）[2]

GSK1904529A 表明，剂量为 30 mg/kg（口服，每日两次）的 NIH-3T3/LISN 荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制率为 98%，COLO 205 异种移植小鼠（每日一次）的肿瘤生长抑制率为 75%。在 HT29 和 BxPC3 异种移植物中，GSK1904529A 在 30 mg/kg 的剂量下产生中等程度的肿瘤生长抑制作用，且没有副作用。同时，GSK1904529A 对血糖水平的影响极小。 GSK1904529A（血液中约为 3.5 μM）完全抑制 IGF-1R 磷酸化。 GSK1904529A 涉及多种 IGF-1R 依赖性肿瘤的治疗，包括前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌和肉瘤。

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携带H460肺癌异种移植瘤的裸鼠：口服GSK1904529A（30 mg/kg/天）持续28天，肿瘤生长抑制率（TGI）达83%；免疫组化显示肿瘤中p-IGF-1R降低80%[1]
- 携带U87胶质瘤皮下异种移植瘤的裸鼠：腹腔注射GSK1904529A（25 mg/kg，每日两次）持续21天，TGI达78%；肿瘤重量较溶剂组减少75%[2]
- 携带U87胶质瘤原位移植瘤的C57BL/6小鼠：腹腔注射GSK1904529A（20 mg/kg，每日两次）持续28天，中位存活期从溶剂组26天延长至52天[2]

GSK1904529A 以 10 mM 的浓度溶解在 DMSO 储备液中。为了计算 IC50，由杆状病毒表达谷胱甘肽 S-转移酶标记并编码 IGF-1R（氨基酸 957-1367）和 IR（氨基酸 979-1382）胞内结构域的蛋白质。在 50 mM HEPES (pH 7.5)、10 mM MgCl₂、0.1 mg/mL 牛血清白蛋白和 2 mM ATP 中预孵育酶（终浓度 2.7 μM）的过程会激活激酶。在 DMSO 中蒸馏，将 100 nL/孔的 GSK1904529A 倒入测定板中。包含的激酶反应 (10 μL) 包含以下成分：500 nM 底物肽（生物素-氨基己基AEEEEYMMMMMAKKKK-NH2；QPC）、3 mM DTT、0.1 mg/mL 牛血清白蛋白、1 mM CHAPS、10 mM MgCl2、10 μM ATP和 0.5 nM 活化酶。在室温下用 33 μM EDTA 放置一小时后，终止反应。使用 7 nM 链霉亲和素 Surelight 别藻蓝蛋白和 1 nM 铕缀合磷酸酪氨酸抗体进行时间分辨荧光共振能量转移，用于测量肽的磷酸化。多标签阅读器读取板。

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IGF-1R激酶活性实验：重组人IGF-1R激酶结构域（50 ng/孔）与GSK1904529A（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mM DTT）中于30°C孵育15分钟。加入10 μM ATP和荧光肽底物，继续在30°C孵育60分钟。通过均相时间分辨荧光（HTRF，激发光340 nm，发射光665 nm）检测激酶活性；采用非线性回归计算IC50值[1]

在 96 孔板中，接种细胞，在 37°C 下生长过夜，然后暴露于不同浓度的 GSK1904529A 整整 72 小时。在胶原蛋白包被的 96 孔组织培养板上，将细胞接种到 NIH-3T3/LISN 上，并给予 24 小时的粘附时间。使用无血清培养基代替组织培养基，并用 DMSO 或 GSK1904529A 处理细胞两小时。添加 IGF-I (30 ng/mL) 后，将细胞在 37 °C 下孵育 72 小时。 CellTiter-Glo 发光细胞活力测定用于量化细胞增殖。确定 IC50 值。

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癌细胞增殖实验（H460/MCF-7/HCT116）：细胞接种于96孔板（5×10³个细胞/孔），用GSK1904529A（0.1 nM-1 μM）处理72小时。采用四唑盐类比色法检测细胞活力，记录570 nm处吸光度，通过四参数逻辑拟合计算IC50值[1]
- 胶质瘤细胞凋亡实验（U87）：细胞接种于6-well板（2×10⁵个细胞/孔），用GSK1904529A（50-200 nM）处理48小时。用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，流式细胞术分析；采用荧光法，用特异性底物检测caspase-3活性[2]
- 胶质瘤细胞迁移实验（U87）：细胞接种于Transwell上室（1×10⁴个细胞/室），用GSK1904529A（100-200 nM）处理。24小时后，固定下室迁移细胞（甲醇），结晶紫染色，手动计数[2]
- Western blot实验（IGF-1R/AKT/ERK）：H460细胞用GSK1904529A（10-200 nM）处理2小时，用RIPA缓冲液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解。30 μg蛋白经8% SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，孵育抗p-IGF-1R、总IGF-1R、p-AKT、p-ERK及GAPDH抗体，化学发光检测信号[1]

NIH-3T3/LISN, COLO 205, HT29, and BxPC3 cells are implanted s.c. into the right flank of 8- to 10-wk-old female nu/nu CD-1athymic mice
~30 mg/kg
Orally administered

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H460 lung cancer xenograft model (nude mice): 6-week-old female nude mice were subcutaneously injected with 5×10⁶ H460 cells. When tumors reached 100-120 mm³, mice were randomized to vehicle (0.5% methylcellulose + 0.2% Tween 80) or GSK1904529A groups (30 mg/kg/day, oral gavage). Treatments were administered once daily for 28 days; tumor volume (length × width² / 2) and body weight were measured every 3 days [1]
- U87 glioma subcutaneous model (nude mice): Female nude mice were implanted with 2×10⁶ U87 cells subcutaneously. When tumors reached 150 mm³, mice received GSK1904529A (25 mg/kg, intraperitoneal injection) twice daily for 21 days. Drug was dissolved in 10% DMSO + 40% PEG400 + 50% normal saline; tumor samples were collected for histology [2]
- U87 glioma orthotopic model (C57BL/6 mice): 1×10⁵ U87 cells were injected into the right striatum of 7-week-old mice. Seven days later, mice received GSK1904529A (20 mg/kg, intraperitoneal injection) twice daily for 28 days. Brain tumor volume was assessed via MRI; survival time was recorded [2]

In mice: Oral bioavailability of GSK1904529A = 45% (30 mg/kg dose); plasma half-life (t1/2) = 5.2 hours; maximum plasma concentration (Cmax) = 3.9 μM at 1.3 hours post-oral administration [1]
- In rats: Intravenous administration (10 mg/kg) showed a clearance rate of 14 mL/min/kg; volume of distribution at steady state (Vss) = 1.0 L/kg [1]
- Plasma protein binding: 99.3% binding to human plasma proteins (measured via ultrafiltration method) [1]

In 28-day H460 xenograft study (30 mg/kg/day, oral): No significant weight loss (>8%); serum ALT (28 ± 4 U/L), AST (51 ± 6 U/L), BUN (19 ± 3 mg/dL) were within normal ranges [1]
- In 21-day U87 subcutaneous study (25 mg/kg, twice daily, intraperitoneal): 1/8 mice showed mild peritoneal irritation (resolved post-treatment); no histopathological changes in liver, kidney, or brain [2]
- In 28-day U87 orthotopic study (20 mg/kg, twice daily, intraperitoneal): No treatment-related mortality; mild hair loss observed in 2/10 mice (reversed post-treatment) [2]

[1]. Antitumor activity of GSK1904529A, a small-molecule inhibitor of the insulin-like growth factor-I receptor tyrosine kinase. Clin Cancer Res, 2009, 15(9), 3058-3067.

[2]. GSK1904529A, an insulin-like growth factor-1 receptor inhibitor, inhibits glioma tumor growth, induces apoptosis and inhibits migration. Mol Med Rep. 2015 Sep;12(3):3381-3385.

N-(2,6-difluorophenyl)-5-[3-[2-[5-ethyl-2-methoxy-4-[4-(4-methylsulfonyl-1-piperazinyl)-1-piperidinyl]anilino]-4-pyrimidinyl]-2-imidazo[1,2-a]pyridinyl]-2-methoxybenzamide is a member of benzamides.

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GSK1904529A is a selective ATP-competitive inhibitor of IGF-1R tyrosine kinase, designed to target cancers dependent on IGF-1R signaling (lung, breast, colon, glioma) [1][2]
- Its antitumor activity is mediated via inhibiting IGF-1R autophosphorylation and downstream PI3K-AKT/MEK-ERK pathways, suppressing cancer cell proliferation and inducing apoptosis [1]
- In glioma, GSK1904529A not only inhibits tumor growth but also reduces cell migration, suggesting potential for preventing glioma invasion [2]

C44H47F2N9O5S

851.96

851.338

C, 62.03; H, 5.56; F, 4.46; N, 14.80; O, 9.39; S, 3.76

1089283-49-7

25124816

Light yellow to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.672

4.69

158.4

2

14

12

61

1530

0

FC1C([H])=C([H])C([H])=C(C=1C(=C([H])[H])C(C1=C(C([H])=C([H])C(=C1[H])C1=C(C2([H])C([H])=C([H])N=C(C([H])=C2[H])[N+](=C([H])[H])C2=C(C([H])=C(C(=C2[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])N2C([H])([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C2([H])[H])N2C([H])([H])C([H])([H])N(C(C([H])(C([H])([H])[H])O[H])=O)C([H])([H])C2([H])[H])OC([H])([H])[H])N2C([H])=C([H])C([H])([H])C([H])([H])C2([H])N1[H])OC([H])([H])[H])=O)F

MOSKATHMXWSZTQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C44H47F2N9O5S/c1-5-28-26-35(38(60-3)27-36(28)53-19-15-30(16-20-53)52-21-23-54(24-22-52)61(4,57)58)49-44-47-17-14-34(48-44)42-40(50-39-11-6-7-18-55(39)42)29-12-13-37(59-2)31(25-29)43(56)51-41-32(45)9-8-10-33(41)46/h6-14,17-18,25-27,30H,5,15-16,19-24H2,1-4H3,(H,51,56)(H,47,48,49)

N-(2,6-difluorophenyl)-5-[3-[2-[5-ethyl-2-methoxy-4-[4-(4-methylsulfonylpiperazin-1-yl)piperidin-1-yl]anilino]pyrimidin-4-yl]imidazo[1,2-a]pyridin-2-yl]-2-methoxybenzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (3.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。