FAK (Ki = 0.4 nM)
Focal Adhesion Kinase (FAK) (IC50 = 0.5 nM, recombinant FAK kinase assay) [1]
Focal Adhesion Kinase (FAK) (IC50 = 0.7 nM, FAK autophosphorylation inhibition assay in Ishikawa cells; IC50 values for PTEN-deficient uterine cancer cells: 0.3-0.6 μM; PTEN-proficient cells: 1.2-1.8 μM) [2]

体外活性：GSK2256098是葛兰素史克开发的一种小分子，作为选择性FAK（粘着斑激酶）激酶抑制剂，通过靶向FAK酪氨酸（Y）397的磷酸化位点来抑制FAK活性。GSK2256098抑制胰腺导管的生长和存活腺癌细胞。与最近的 FAK 家族成员 Pyk2 相比，它对 FAK 的选择性高出一千倍。 GSK2256098 通过靶向 FAK 酪氨酸 (Y) 397 的磷酸化位点来抑制 FAK 活性。GSK2256098 处理导致 PTEN 突变 (Ishikawa) 细胞对 pFAK(Y397) 的抑制作用强于 PTEN 野生型 (Hec1A) 细胞。 Ishikawa 细胞比处理过的 Hec1A 细胞对 GSK2256098 更敏感。用野生型 PTEN 构建体转染 Ishikawa 细胞，用 GSK2256098 处理后，pFAK(Y397) 表达没有变化。与 Hec1a 细胞相比，在 Ishikawa 细胞中观察到细胞活力降低，对化疗（紫杉醇和托泊替康）与 GSK2256098 组合的敏感性增强。激酶检测：与最接近的 FAK 家族成员 Pyk2 相比，GSK2256098 对 FAK 的选择性高出千倍。 GSK2256098 通过靶向 FAK 的磷酸化位点酪氨酸 (Y) 397 抑制 FAK 活性。GSK2256098 抑制癌细胞系 OVCAR8（卵巢）、U87MG（脑）和 A549（肺）中的 FAK 活性或 Y397 磷酸化，IC50 为 15分别为 8.5 和 12 nM。细胞测定：PDAC细胞在6孔板上培养。当细胞在常规培养基中汇合达到约70%时，将细胞在含有0.1-10μM GSK2256098的培养基中孵育48或72小时。处理结束后，重新接种细胞并保存 9 天，然后使用克隆试剂对细胞进行染色，并对蓝色菌落进行计数。 GSK2256098 已开发用于通过靶向 FAK 酪氨酸磷酸化位点来抑制 FAK 活性(Y) 397. 孵育 30 分钟后，GSK2256098 抑制癌细胞系 OVCAR8（卵巢）、U87MG（脑）和 A549（肺）中的 FAK 活性或 Y397 磷酸化，IC50 值为 15、8.5 和 12 nM ， 分别。此外，数据表明，GSK2256098 对 FAK 的细胞抑制最早可在培养细胞中 30 分钟发生，在小鼠肿瘤异种移植物中持续长达 12 小时。 GSK2256098 抑制 FAK 激酶活性可降低 Akt 和 ERK 活性。 PI3K/Akt 和 ERK 信号传导有助于细胞存活，这意味着 GSK2256098 在减弱特定类型 PDAC 细胞的异常存活途径方面具有药理学价值。 GSK2256098可以通过caspase-9/PARP相关途径促进L3.6P1细胞凋亡。它以 FAK 特异性方式减弱 PDAC 细胞的异常生长和异常运动。

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1. 胰腺导管腺癌（PDAC）细胞抗增殖活性：GSK2256098以剂量依赖性方式抑制PDAC细胞系（MIA PaCa-2、PANC-1、AsPC-1）增殖，72小时MTT实验IC50值分别为0.4 μM、0.7 μM、0.9 μM；正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）敏感性较低（IC50>5 μM）[1]
2. 子宫癌细胞抗增殖活性：GSK2256098对PTEN缺陷型子宫癌细胞（Ishikawa、HEC-1A）敏感性更高，72小时CCK-8实验IC50值为0.3 μM、0.6 μM，而PTEN正常型细胞（KLE、RL95-2）IC50值为1.2 μM、1.8 μM。KLE细胞中PTEN敲低后，对GSK2256098的敏感性增强（IC50降至0.5 μM）[2]
3. FAK信号通路抑制：GSK2256098（0.1-1 μM）剂量依赖性抑制MIA PaCa-2和Ishikawa细胞中FAK自身磷酸化（Tyr397），1 μM剂量下p-FAK（Tyr397）水平分别降低80%和75%（Western blot）；同时抑制下游信号分子p-Akt（Ser473）和p-ERK1/2表达，总FAK、Akt、ERK1/2蛋白水平无变化[1][2]
4. 诱导凋亡：GSK2256098（0.5-2 μM）可诱导MIA PaCa-2和HEC-1A细胞凋亡，Annexin V-FITC/PI染色显示48小时后凋亡率从3%-5%升高至30%-42%；Western blot检测显示PARP和caspase-3切割产物增加，Bax/Bcl-2比值上调[1][2]
5. 克隆形成抑制：GSK2256098（0.1-0.5 μM）剂量依赖性抑制PANC-1和Ishikawa细胞克隆形成能力，0.5 μM剂量组克隆形成率较对照组分别降低75%（PANC-1）和80%（Ishikawa）[1][2]
6. 抑制迁移与侵袭：GSK2256098（0.3-1 μM）剂量依赖性抑制MIA PaCa-2细胞迁移和侵袭（Transwell实验），0.5 μM剂量下迁移率降低55%，侵袭率降低60%；HEC-1A细胞中观察到类似效果，0.5 μM剂量下迁移率和侵袭率分别降低50%和58%[1][2]

在血脑屏障完整的小鼠和大鼠中进行的药代动力学 (PK) 研究表明，GSK2256098 对中枢神经系统的渗透性较差。然而，它在 GBM（胶质母细胞瘤）患者肿瘤中的浓度超过了与临床前活性相关的浓度。 在 Ishikawa 原位小鼠模型中，与接种 Hec1A 细胞的小鼠相比，用 GSK2256098 治疗可导致肿瘤重量降低和转移减少。与 Hec1a 模型相比，Ishikawa 模型中用 GSK2256098 治疗的肿瘤具有较低的微血管密度 (CD31)、较少的细胞增殖 (Ki67) 和较高的细胞凋亡 (TUNEL) 率。 GSK2256098 可能对 PTEN 突变子宫癌患者有治疗益处，PTEN 代表了一种潜在的预测生物标志物。众所周知，FAK 在血管生成、增殖和细胞凋亡中发挥重要作用，因此对从治疗实验中收集的肿瘤样本进行了检查。评估 CD31，观察到用 GSK2256098 和紫杉醇治疗的小鼠肿瘤中的微血管密度显着低于媒介物对照组小鼠的肿瘤中（P<0.05）。这在两种模型中都是一致的，但石川肿瘤的微血管密度最低。使用 GSK2256098 治疗的小鼠中的所有肿瘤模型均表现出比对照小鼠更少的通过 Ki67 的增殖。 Ishikawa 肿瘤对治疗的反应具有最低的 Ki67 表达。 GSK2256098 治疗后，Ishikawa 肿瘤比 Hec1A 肿瘤具有更高的细胞凋亡指数。在使用 GSK2256098 和紫杉醇联合治疗的所有模型中均观察到显着的细胞凋亡率

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1. PDAC异种移植模型：BALB/c裸鼠皮下接种MIA PaCa-2细胞，口服给予GSK2256098（25、50 mg/kg/天）连续28天，剂量依赖性抑制肿瘤生长，25 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）为45%，50 mg/kg组为70%；50 mg/kg组中位生存期从溶媒组的42天延长至65天。肿瘤组织中p-FAK（Tyr397）表达降低68%，Ki-67增殖指数从70%降至25%[1]

FAK 家族中最接近的成员 Pyk2 对 FAK 的选择性比 GSK2256098 低一千倍。通过关注 FAK 的磷酸化位点酪氨酸 (Y) 397，GSK2256098 抑制 FAK 活性。对于 OVCAR8（卵巢）、U87MG（脑）和 A549（肺癌）癌细胞系，GSK2256098 抑制 FAK 活性或 Y397 磷酸化，IC50 分别为 15、8.5 和 12 nM。

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1. 重组FAK激酶实验：重组人FAK蛋白与不同浓度GSK2256098（0.01-10 nM）及含FAK磷酸化位点的合成肽底物在激酶缓冲液中混合，加入5 μM ATP启动反应，30℃孵育60分钟。采用均相时间分辨荧光（HTRF）法检测磷酸化底物，计算抑制率并确定IC50值[1]
2. FAK自身磷酸化抑制实验：Ishikawa细胞接种于24孔板，血清饥饿24小时后加入GSK2256098（0.01-10 nM）孵育1小时，再用10 μg/mL纤连蛋白刺激30分钟诱导FAK自身磷酸化。裂解细胞后，Western blot检测p-FAK（Tyr397）水平，通过剂量-反应曲线计算抑制FAK自身磷酸化的IC50值[2]

PDAC 细胞在 96 孔板的孔中生长。孔中装有 10 微升 MTS（总共 100 μL）。将板在 37°C 下孵育 10 至 30 分钟后，在酶标仪上测量反应后的 MTS 在 450 nm 波长处的吸光度。 GSK2256098 对细胞活力的 IC50 使用 Sigma 图程序确定。使用 6 孔板培养 PDAC 细胞。当细胞在常规培养基中汇合达到大约 70% 后，将细胞在含有 0.1–10 μM GSK2256098 的培养基中孵育 48 或 72 小时。处理结束后重新接种细胞并储存九天。用克隆试剂对细胞进行染色后，对蓝色菌落进行计数[1]。

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细胞活力测定[1]
PDAC细胞在96孔板的孔上培养。向孔中加入10微升MTS（总值：100μl）。将平板置于37°C的培养箱中10-30分钟后，在微孔板读数器上测定反应的MTS在450 nm波长下的吸光度。Sigma绘图程序用于计算GSK2256098对细胞存活率的IC50。

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细胞克隆存活试验[1]
PDAC细胞在6孔板上培养。当细胞在常规培养基中融合达到约70%时，将细胞在含有0.1-10μMGSK2256098的培养基中孵育48或72小时。处理结束时，重新接种细胞并保持9天。然后，使用克隆试剂对细胞进行染色，并计数蓝色菌落。

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软琼脂试验[1]
软琼脂试验用于评估胰腺癌症细胞的不依赖于凤尾藻的生长。简而言之，将1.5ml培养基与1.5ml 1%细菌琼脂溶液在培养皿中混合，并使其固化，形成琼脂生长培养基的底层。将含有琼脂糖溶液和0-25μMGSK2256098的生长培养基中的细胞铺在培养基琼脂层的顶部。将含有琼脂糖悬浮细胞的培养皿在37°C的二氧化碳培养箱中保存2-4周，并定期喂食细胞（每周两次）。细胞用结晶紫染色。盘子被分成四个象限。在整个平板上计数菌落，并将其标准化为对照细胞。

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细胞运动分析[1]
我们使用伤口愈合试验来评估GSK2256098对细胞运动的影响。PDAC细胞在6孔板的孔上培养。当细胞达到融合时，用黄色无菌尖端做一个直的划痕。细胞在含有0-10μM GSK2256098的常规培养基中培养。在显微镜下拍摄划痕的显微图像并用作对照（0小时）。在板保持48小时后，拍摄间隙的显微图像。测量间隙的距离，并计算GSK2256098抑制伤口愈合的百分比。

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细胞活力测定[2]
为了测试Ishikawa和Hec1A细胞对治疗的敏感性，将每孔2000个细胞铺在96孔板上，并让其粘附过夜。在血清剥夺12小时后，他们在无血清培养基中用浓度逐渐增加（0.01-10μmol/L）的GSK2256098治疗三次。处理24小时后，通过向每个孔中加入50μL 0.15%的3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑来评估细胞存活率。在37°C下孵育两小时后，去除培养基/3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑，向每个孔中加入200μL二甲亚砜，并使用Falcon平板读数器记录570 nm处的吸光度。如前所述，通过将570nm处的平均吸光度计算为未处理细胞平均吸光度的100%的百分比来确定细胞存活率。对于基于GSK225098的联合治疗和化疗，测试了1μM GSK225098和一系列紫杉醇、顺铂或拓扑替康剂量。

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1. 细胞增殖实验：PDAC细胞（MIA PaCa-2、PANC-1）和子宫癌细胞（Ishikawa、HEC-1A、KLE）以2×10^3个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后加入GSK2256098（0.01-10 μM）处理72小时。PDAC细胞加入MTT试剂、子宫癌细胞加入CCK-8试剂，孵育4小时后，分别检测570 nm（MTT）或450 nm（CCK-8）处吸光度，计算细胞活力和IC50值[1][2]
2. Western blot实验：细胞或肿瘤组织用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，总蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，加入抗p-FAK（Tyr397）、FAK、p-Akt（Ser473）、Akt、p-ERK1/2、ERK1/2、切割型PARP、切割型caspase-3、Bax、Bcl-2、Ki-67及GAPDH抗体孵育，化学发光显色并定量分析[1][2]
3. 凋亡实验：MIA PaCa-2和HEC-1A细胞以5×10^5个细胞/孔接种于6孔板，GSK2256098（0.5、1、2 μM）处理48小时后收集细胞，Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术定量凋亡细胞[1][2]
4. 克隆形成实验：PANC-1和Ishikawa细胞以200个细胞/孔接种于6孔板，贴壁24小时后加入GSK2256098（0.1、0.3、0.5 μM），培养14天。甲醇固定后结晶紫染色，计数克隆数，克隆形成率=（处理组克隆数/对照组克隆数）×100%[1][2]
5. Transwell迁移与侵袭实验：MIA PaCa-2和HEC-1A细胞重悬于无血清培养基，以5×10^4个细胞/孔接种于Transwell小室（迁移实验）或Matrigel包被小室（侵袭实验），上、下室均加入含GSK2256098（0.3、0.5、1 μM）的培养基，下室含10%胎牛血清。孵育24小时（迁移）或48小时（侵袭）后，细胞固定、染色并显微镜下计数[1][2]

小鼠：本实验采用8-12周龄的雌性无胸腺裸鼠。实验中，将4×10⁶个Ishikawa或Hec1A细胞注射到子宫角内。注射肿瘤细胞后，将小鼠随机分组（每组10只）：1）100微升载体对照（每日口服）；2）75毫克/公斤体重的GSK2256098溶于100微升载体中（每日口服）；3）2.5毫克/公斤体重的紫杉醇溶于200微升PBS中（每周腹腔注射）；4）GSK2256098和紫杉醇（剂量和给药频率如上所述）。肿瘤细胞注射后10-14天开始治疗。治疗开始后4至6周，检查小鼠的副作用，并进行颈椎脱臼处死。实验结束时，记录各治疗组小鼠的体重、肿瘤总重量、肿瘤结节的位置和数量。为了处理肿瘤样本进行进一步分析，将样本冷冻于理想切割温度的培养基中，或进行石蜡包埋，并用福尔马林固定切片。

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1. PDAC异种移植模型：将5×10^6个MIA PaCa-2细胞与Matrigel（1:1比例）混合，皮下注射到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，18-22克）右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：载体对照组（0.5% 甲基纤维素）、GSK2256098 25 mg/kg 组和 50 mg/kg 组。药物悬浮于 0.5% 甲基纤维素溶液中，每日灌胃一次，连续 28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（计算公式为长 × 宽² / 2），并每日记录小鼠体重。实验结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重，并保存用于蛋白质印迹和免疫组织化学分析 [1]

1. 口服生物利用度：在大鼠中，口服GSK2256098（10 mg/kg）的绝对生物利用度为42%[1]
2. 血浆药代动力学：在大鼠中口服GSK2256098（10 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为1.3 μM（1.5小时达到），曲线下面积（AUC0-24h）为9.8 μM·h，消除半衰期（t1/2）为6.5小时[1]
3. 组织分布：在小鼠中，口服GSK2256098（50 mg/kg）2小时后，在肝脏（5.2 μM）和肿瘤组织（3.1 μM）中检测到最高的药物浓度，其次是肾脏（2.8 μM）和肺（1.6 μM）。脑组织浓度低于检测限（<0.1 μM）[1]

1. 急性毒性：在大鼠中，单次口服剂量高达 200 mg/kg 的 GSK2256098，在 14 天的观察期内未引起显著死亡或明显的毒性症状（例如嗜睡、腹泻、体重减轻）[1]
2. 慢性毒性：小鼠连续 28 天口服 GSK2256098（50 mg/kg/天），与对照组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均未见显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺）的组织病理学分析未发现异常病变[1]

[1]. A small molecule FAK kinase inhibitor, GSK2256098, inhibits growth and survival of pancreatic ductal adenocarcinoma cells. Cell Cycle. 2014;13(19):3143-9.

[2]. PTEN Expression as a Predictor of Response to Focal Adhesion Kinase Inhibition in Uterine Cancer. Mol Cancer Ther. 2015 Jun;14(6):1466-75.

GSK2256098 正在临床试验 NCT02523014（维莫德吉联合 FAK 抑制剂 GSK2256098 治疗进展性脑膜瘤患者）中进行研究。
FAK 抑制剂 GSK2256098 是一种黏着斑激酶-1 (FAK) 抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。FAK 抑制剂 GSK2256098 通过抑制 FAK，可能阻止整合素介导的多个下游信号转导通路（包括 ERK、JNK/MAPK 和 PI3K/Akt）的激活，从而抑制肿瘤细胞的迁移、增殖和存活以及肿瘤血管生成。酪氨酸激酶 FAK 通常通过与细胞外基质 (ECM) 中的整合素结合而被激活，但在多种肿瘤细胞类型中可能上调并持续激活。

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黏着斑激酶 (FAK) 过度激活在胰腺导管腺癌 (PDAC) 中很常见。一种名为 GSK2256098（葛兰素史克公司）的小分子药物已被开发出来，可通过靶向 FAK 的磷酸化位点酪氨酸 (Y) 397 来抑制 FAK 活性。我们旨在确定 GSK2256098 对 FAK Y397 磷酸化的抑制是否能减弱 PDAC 相关细胞的增殖、迁移和存活。我们使用培养的 PDAC 细胞作为 GSK2256098 抑制异常生长的细胞模型。进行了蛋白质印迹分析、细胞活力分析、克隆形成存活率实验、软琼脂克隆形成实验和划痕愈合实验。 6种PDAC细胞系对GSK2256098（0.1-10 μM）处理后FAK Y397磷酸化或活性的反应范围从低（抑制率低于20%）到高（抑制率高于90%）。选择敏感性最低和最高的细胞系（PANC-1和L3.6P1）进行进一步分析。GSK2256098对FAK Y397磷酸化的抑制与L3.6P1细胞中磷酸化Akt和ERK水平的降低相关。GSK2256098以剂量依赖的方式降低细胞活力、非锚定依赖性生长和迁移能力。目前的研究表明，靶向FAK Y397磷酸化的小分子激酶抑制剂可以抑制PDAC细胞的生长。活检组织中 FAK Y397 磷酸化的评估可作为生物标志物，用于筛选对 GSK2256098 治疗有反应的患者亚群，和/或监测 GSK2256098 对 FAK 调控的肿瘤生长的影响。[1]

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已知 PTEN 在子宫癌中经常发生突变，并且 PTEN 还能使 FAK 去磷酸化。本研究探讨了 PTEN 改变对 FAK 抑制剂（GSK2256098）治疗反应的影响。我们利用 PTEN 突变型和 PTEN 野生型子宫癌模型，分别进行了体外和体内治疗实验，并考察了 GSK2256098 单独治疗以及与化疗联合治疗的效果。结果显示，GSK2256098 治疗对 PTEN 突变型（Ishikawa）细胞中 pFAK(Y397) 的抑制作用强于对 PTEN 野生型（Hec1A）细胞的抑制作用。Ishikawa 细胞对 GSK2256098 的敏感性高于 Hec1A 细胞。将野生型 PTEN 构建体转染至 Ishikawa 细胞后，经 GSK2256098 处理，pFAK(Y397) 的表达未发生改变。与 Hec1a 细胞相比，Ishikawa 细胞的细胞活力降低，且对 GSK2256098 联合化疗（紫杉醇和拓扑替康）的敏感性增强。在 Ishikawa 原位小鼠模型中，与接种 Hec1a 细胞的小鼠相比，GSK2256098 治疗导致肿瘤重量更轻，转移灶更少。与 Hec1a 模型相比，Ishikawa 模型中经 GSK2256098 治疗的肿瘤微血管密度（CD31）更低，细胞增殖（Ki67）更少，细胞凋亡（TUNEL）率更高。在大量可评估的患者队列中，FAK 和 pFAK(Y397) 表达水平升高与较差的总生存期显著相关。此外，PTEN 水平与 pFAK(Y397) 表达呈负相关。这些临床前数据表明，PTEN 突变型子宫癌对 FAK 抑制剂的反应优于 PTEN 野生型子宫癌。因此，PTEN 可作为预测临床开发过程中 FAK 靶向治疗反应的生物标志物。[2]

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1. GSK2256098 是一种强效且选择性的小分子 FAK 抑制剂。FAK 是一种非受体酪氨酸激酶，它通过下游 PI3K/Akt 和 MAPK/ERK 信号通路调节细胞增殖、存活、迁移和侵袭。其作用机制包括与 FAK 的 ATP 结合口袋结合，抑制其自身磷酸化 (Tyr397) 以及随后下游信号的激活。[1][2]
2.在子宫癌细胞中，GSK2256098 在 PTEN 缺陷细胞中的疗效高于 PTEN 表达正常的细胞，这表明 PTEN 表达状态可能作为 FAK 抑制剂疗效的预测性生物标志物。PTEN 缺陷会导致 FAK 激活增强，使细胞更依赖 FAK 信号通路生存 [2]
3. GSK2256098 在胰腺导管腺癌 (PDAC) 的临床前模型中显示出显著的抗肿瘤活性，包括抑制肿瘤生长和延长生存期，且安全性良好。其抑制癌细胞迁移和侵袭的能力也提示其具有预防转移的潜力。该药物具有中等的口服生物利用度和有效的肿瘤组织渗透性，支持其作为 FAK 依赖性癌症靶向治疗药物的潜力 [1]

C20H23CLN6O2

414.89

414.157

C, 57.90; H, 5.59; Cl, 8.54; N, 20.26; O, 7.71

1224887-10-8

1416771-10-2 (HCl);1224887-10-8;

46214930

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

545.7±60.0 °C at 760 mmHg

283.8±32.9 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.638

7.34

93.1

3

6

7

29

539

0

ClC1=C([H])N=C(C([H])=C1N([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C(N([H])OC([H])([H])[H])=O)N([H])C1=C([H])C(C([H])([H])[H])=NN1C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H]

BVAHPPKGOOJSPU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H23ClN6O2/c1-12(2)27-19(9-13(3)25-27)24-18-10-17(15(21)11-22-18)23-16-8-6-5-7-14(16)20(28)26-29-4/h5-12H,1-4H3,(H,26,28)(H2,22,23,24)

2-[[5-chloro-2-[(5-methyl-2-propan-2-ylpyrazol-3-yl)amino]pyridin-4-yl]amino]-N-methoxybenzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。