| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PDK1 (IC50 = 10 nM)
PDK1 (3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1) with IC50 of ~10 nM [1]. PDK1 [3] GSK2334470 targets PDK1 (also known as PDPK1), a master kinase that phosphorylates and activates several AGC-family kinases including AKT, SGK, and PKC isoforms. It is a highly potent and specific small molecule inhibitor of PDK1. The compound inhibits PDK1 with an IC50 of approximately 10 nM in a cell-free assay. GSK2334470 directly competes with ATP for binding to the catalytic site of PDK1. Its exceptional selectivity profile makes it a useful tool for studying PDK1 signaling pathways. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在含有PtdIns(3,4,5)P3的脂质体或缺失PH结构域的Akt1突变体（ΔPH-Akt1）存在的情况下，GSK2334470能以约10 nM的IC50值抑制PDK1激活全长Akt1。同样，GSK2334470也能以低于10 nM的IC50值抑制PDK1磷酸化PDKtide肽底物。在HEK-293细胞中，GSK2334470（0.1 M-0.3 M）能显著且呈剂量依赖性地抑制内源性NDRG1，使其磷酸化水平降低50%以上。在HEK-293细胞中，GSK2334470（30 nM）能显著且呈剂量依赖性地抑制每种SGK亚型的T环磷酸化。 GSK2334470 (30 µM) 可抑制 U46619 诱导的 α-毒素透化兔肺动脉平滑肌细胞的 Ca2+ 敏化收缩力。GSK2334470 (30 µM) 可显著降低 [Ca2+] 刺激引起的收缩力。[2] GSK2334470 (1 μM) 可完全消除 EGF 诱导的 MDA-MB-231 细胞内钙离子升高和肌醇磷酸盐积累。GSK2334470 (1 μM) 可抑制 MDA-MB-231 细胞中 PLCγ1 Tyr783 的磷酸化。 [3]在MK2206耐药的神经母细胞瘤（NB）亚系（LAN-1-MK、KP-N-SIFA-MK、SK-N-DZ-MK）中，GSK2334470单独或与MK2206（5 μM）联合使用，均以剂量依赖的方式抑制细胞生长。耐药亚系的IC50值范围为1.64 μM（SK-N-DZ-MK）至5.1 μM（KP-N-SIFA-MK），低于非耐药细胞（IC50值范围为2.90 μM（SK-N-DZ）至17.4 μM（KP-N-SIFA））。 [1] 5 μM 的 GSK2334470 可诱导 LAN-1 细胞中 G0/G1 期细胞比例增加（从 39.33% 增至 54.52%），在未使用 MK2206 的情况下，LAN-1-MK 细胞中 G0/G1 期细胞比例增加（从 36.10% 增至 44.75%），使用 MK2206 后，GSK2334470 可诱导 LAN-1-MK 细胞中 G0/G1 期细胞比例增加（从 36.10% 增至 44.75%），在已使用 MK2206 的情况下，GSK2334470 可诱导 LAN-1-MK 细胞中 G0/G1 期细胞比例增加（从 40.91% 增至 48.51%）。[1] 5 μM 的 GSK2334470 可降低 MK2206 非耐药和耐药 NB 细胞中 PDK1、mTOR 和 S6K 的磷酸化水平（p-PDK1、p-mTOR 和 p-S6K）。MK2206 耐药亚系中 p-PDK1 的水平高于非耐药细胞。在所有测试的细胞系中，GSK2334470均抑制了p-mTOR和p-S6K的表达。[1] 在LAN-1-MK和NB-19-MK细胞中，GSK2334470抑制了pS9-GSK3β的表达，表明在AKT活性缺失的情况下，PDK1发挥了补偿作用。[1] 在MDA-MB-231乳腺癌细胞中，用PDK1抑制剂GSK2334470（1 μM）处理可完全消除EGF诱导的细胞内钙离子升高和肌醇磷酸盐的积累。[3] 在MDA-MB-231细胞中，GSK2334470（1 μM）抑制了EGF诱导的PLCγ1 Tyr783磷酸化。 [3] 在PC3前列腺癌细胞中，GSK2334470 (1 μM) 可显著抑制EGF诱导的钙离子升高，但对ATP介导的钙离子升高无影响。[3] 在MDA-MB-231和A375M细胞中，GSK2334470 (1 μM) 处理可显著抑制细胞在Matrigel基质胶上的侵袭。[3] 体外实验表明，GSK2334470对PDK1具有强效抑制作用，IC50约为10 nM。它对其他密切相关的AGC激酶无活性。GSK2334470可抑制人PC3细胞中PDK1介导的AKT在Thr308位点的磷酸化，IC50为0.113 μM。它还能抑制PC3细胞中PDK1介导的RSK在Ser221位点的磷酸化，IC50值为0.293 μM。在K562细胞中，该化合物表现出抗增殖活性，IC50值为18 μM。
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| 体内研究 (In Vivo) |
GSK2334470 是一种高特异性且高效的 PDK1 抑制剂。体内研究已利用 GSK2334470 研究了 PDK1 抑制在多种癌症模型中的抗癌作用。研究表明，自噬通量的破坏与 GSK2334470 治疗联合使用可协同抑制肾细胞癌的发生发展。该化合物是研究 PDK1 在 AGC 激酶信号通路中的作用及其在癌症和其他疾病中的意义的重要工具。其高特异性使得对 PDK1 相关效应的解释更加明确。
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| 酶活实验 |
将 0.1 mg 至 1 mg 细胞裂解液与 3 g 至 5 g 指定抗体在 4 °C 下于振荡平台上孵育 2 小时，以免疫沉淀内源性 Akt、S6K 和 RSK。为了测定 SGK 活性，将 150 g 转染细胞裂解液与 5 g 谷胱甘肽-琼脂糖在 4 °C 下孵育 3 小时。然后用激酶缓冲液洗涤免疫沉淀物两次，再用含 0.5 mM NaCl 的裂解缓冲液洗涤两次。反应混合物用于启动激酶反应，最终浓度为 0.1 mM [-32P]ATP (200 cpm/pmol)、5 mM 乙酸镁、0.1% 2-巯基乙醇和 30 mM Crosstide 肽 (GRPRTSSFAEGKK)。
提供的文献中未明确描述 GSK2334470 的上述内容。[1][3] GSK2334470 的非细胞酶活性测定包括使用纯化的 PDK1 酶和适当的底物来测量其对 PDK1 活性的抑制作用。在这些无细胞测定中，该化合物的 IC50 值约为 10 nM。通过测试 GSK2334470 对 93 种其他蛋白激酶（包括 13 种密切相关的 AGC 激酶）的抑制活性来评估其选择性。这些测定证实了该化合物对 PDK1 相对于其他激酶具有极高的特异性。 |
| 细胞实验 |
GSK2334470 溶于 DMSO，使用前用适当的培养基稀释。将 GSK2334470 分别在含或不含 MK-2206 (5 μM) 的 10% FBS 培养基中，分别处理非耐药细胞和耐药亚系 1.5 小时和 12 小时，以研究其对 mTOR-S6K 通路的抑制作用。
使用 MTT 法评估细胞增殖。将细胞 (5×10^3) 接种于 96 孔板中，预培养 6 小时，然后用指定浓度的 GSK2334470 处理 72 小时。加入 MTT (20 μl，5 mg/ml) 孵育 3.5 小时后，移除培养基，加入 DMSO (150 μl)，并在 590 nm 处测量吸光度。 [1] 用/不用GSK2334470处理12小时后进行细胞周期分析。将细胞（2×10^6）在-20°C下用乙醇固定过夜，然后在室温下避光用含RNase A的碘化丙啶（PI）Triton X-100溶液孵育30分钟，最后使用ModFitLT软件通过FACScan流式细胞仪分析DNA含量。[1] 对于Western blotting实验，细胞在无血清培养基中饥饿1小时，然后用/不用GSK2334470（5 μM）处理1.5小时和12小时。将细胞质提取物（40 μg/泳道）进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，并用针对p-PDK1、p-AKT、p-mTOR、p-S6K、GSK3β、p-GSK3β、N-MYC和肌动蛋白的特异性抗体进行检测。[1] 细胞内钙离子浓度测定：细胞在无血清培养基中培养过夜，用Fluo-4-AM（4 μM）在37°C孵育45分钟，然后在脱酯化过程中用GSK2334470（1 μM）处理30分钟。用EGF（20 ng/ml）刺激细胞，并使用共聚焦显微镜测量荧光强度6分钟。[3] 肌醇磷酸盐的积累：用[3H]肌醇标记细胞24小时后进行测定。细胞预先用GSK2334470（1 μM）孵育30分钟，然后用EGF（50 ng/ml）刺激。总肌醇磷酸酯通过阴离子交换色谱法分离。[3] 侵袭实验采用预先包被Matrigel的Transwell小室（孔径8.0 μm）进行。细胞预先用GSK2334470（1 μM）处理30分钟，然后在抑制剂存在下侵袭36小时。侵袭的细胞经固定、结晶紫染色后计数。[3] GSK2334470的体外细胞实验采用PC3和K562等癌细胞系进行。采用 ELISA 法，利用 PC3 细胞评估化合物对 PDK1 介导的 AKT 在 Thr308 位点磷酸化和 RSK 在 Ser221 位点磷酸化的抑制作用。采用 K562 细胞进行增殖实验，以确定化合物的抗增殖活性。通过 CCK-8 法和克隆形成实验评估细胞生长情况。这些实验有助于验证化合物的作用机制及其对癌细胞生物学的影响。 |
| 动物实验 |
为了稀释小鼠，首先将DMSO溶解于PBS或生理盐水中。如前所述，构建BrafV600E::Pten转基因小鼠。每个实验组使用六只小鼠。根据之前的研究[3]，GSK2334470通过腹腔注射（100 mg/kg）给药，每周三次，从局部应用4-羟基他莫昔芬当天开始，直至小鼠收集时结束。GSK2334470的体内动物研究通常在啮齿类癌症模型中进行，以评估其治疗潜力。该化合物可根据实验设计通过口服或其他途径给药。治疗后评估肿瘤生长、细胞增殖和信号通路调控。这些研究对于验证该化合物的体内疗效以及了解PDK1在疾病发病机制中的作用至关重要。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
GSK2334470 在 DMSO 中的溶解度为 93 mg/mL，但不溶于水。其分子量为 462.59 g/mol。该化合物仅供研究使用。其高选择性和高活性使其成为研究 PDK1 生物学的宝贵工具。标准综述中未详细记录半衰期和生物利用度等药代动力学参数，但将在临床前研究中进行评估。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
由于 GSK2334470 主要是一种研究用化合物，因此其全面的毒理学数据有限。该化合物仅供实验室使用，不得用于人体。与所有研究用化学品一样，处理 GSK2334470 时应采取适当的安全预防措施。除在临床前癌症模型中的应用外，其体内安全性尚未得到充分表征。临床开发需要进行标准的毒理学评估。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
(3S,6R)-1-[6-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-2-(甲氨基)-4-嘧啶基]-N-环己基-6-甲基-3-哌啶甲酰胺属于吲唑类化合物。
GSK2334470 是一种 PDK1 抑制剂。与非耐药细胞相比，MK2206 耐药的神经母细胞瘤细胞对 GSK2334470 的 IC50 值更低，表明其依赖于 PDK1-mTOR-S6K 通路。[1] PDK1 调节 PLCγ1 的激活，而 GSK2334470 抑制 EGF 诱导的 PLCγ1 酪氨酸磷酸化和钙信号传导。PDK1-PLCγ1 通路对癌细胞侵袭至关重要。 [3] GSK2334470 是一种高度特异性的 PDK1 抑制剂，IC50 值约为 10 nM。即使在浓度高出 500 倍的情况下，它对其他 93 种蛋白激酶也无活性。该化合物是阐明 PDK1 在生物过程中作用的重要工具。它已被用于研究 PDK1 抑制在肾细胞癌和其他癌症中的抗癌作用。GSK2334470 尚未获批上市，仅作为研究用化合物提供。 |
| 分子式 |
C25H34N8O
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|---|---|---|
| 分子量 |
462.5905
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| 精确质量 |
462.285
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| 元素分析 |
C, 64.91; H, 7.41; N, 24.22; O, 3.46
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| CAS号 |
1227911-45-6
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
46215815
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| 外观&性状 |
white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.667
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| LogP |
2.31
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| tPSA |
132.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
34
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| 分子复杂度/Complexity |
688
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| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
O=C([C@]1([H])C([H])([H])N(C2C([H])=C(C3C([H])=C([H])C4C(N([H])[H])=NN([H])C=4C=3[H])N=C(N([H])C([H])([H])[H])N=2)[C@]([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C1([H])[H])N([H])C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H]
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| InChi Key |
QLPHOXTXAKOFMU-WBVHZDCISA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H34N8O/c1-15-8-9-17(24(34)28-18-6-4-3-5-7-18)14-33(15)22-13-20(29-25(27-2)30-22)16-10-11-19-21(12-16)31-32-23(19)26/h10-13,15,17-18H,3-9,14H2,1-2H3,(H,28,34)(H3,26,31,32)(H,27,29,30)/t15-,17+/m1/s1
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| 化学名 |
(3S,6R)-1-(6-(3-amino-1H-indazol-6-yl)-2-(methylamino)pyrimidin-4-yl)-N-cyclohexyl-6-methylpiperidine-3-carboxamide
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| 别名 |
GSK 2334470; GSK2334470; GSK-2334470
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~90 mg/mL (194.6 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: 90 mg/mL (194.6 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.40 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1617 mL | 10.8087 mL | 21.6174 mL | |
| 5 mM | 0.4323 mL | 2.1617 mL | 4.3235 mL | |
| 10 mM | 0.2162 mL | 1.0809 mL | 2.1617 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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