| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RIP1; RIP3
RIP1 (Kd = 12 nM; inhibits kinase activity at 20 nM comparable to 1 μM Nec-1s) [1] RIP3 (Kd = 130 nM; inhibits kinase activity) [1] GSK2593074A targets receptor-interacting protein kinase 1 (RIP1/RIPK1) and receptor-interacting protein kinase 3 (RIP3/RIPK3), key mediators of necroptosis, a form of programmed necrosis implicated in inflammatory and degenerative diseases. By inhibiting both kinases, it blocks necroptotic cell death. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK2593074A（GSK'074；0.01、0.1、1、10 和 100 nM；MOVAS 细胞 6 小时；L929 细胞 3 小时）在 IC50 为 ~3 nM 时完全阻止了人和小鼠细胞的坏死性凋亡。 GSK2593074A 在多种细胞类型中抑制坏死性凋亡，IC50 值约为 3 nM，包括小鼠平滑肌细胞、成纤维细胞 (L929)、骨髓来源的巨噬细胞 (BMDM) 和人结肠上皮细胞 (HT29)[1]。
GSK2593074A 在小鼠主动脉平滑肌细胞 (MOVAS)、小鼠成纤维细胞 (L929)、原代小鼠主动脉平滑肌细胞、骨髓来源的巨噬细胞 (BMDM) 和人结直肠腺癌 HT-29 细胞中抑制坏死性凋亡，IC50 值约为 3 nM。 [1] 在 10 nM 浓度下，GSK074 完全抑制了 MOVAS 细胞中的坏死性凋亡（7-AAD+ 细胞比例从 84.36±3.19% 降至 17.58±2.04%），与 10 μM Nec-1 细胞（15.69±2.45%）的效果相当。[1] 在原代小鼠主动脉平滑肌细胞中，10 nM GSK074 将 7-AAD+ 细胞比例从 21.05±1.34% 降至 8.81±0.41%；在 BMDM 细胞中，10 nM GSK074 处理后，细胞活力从 32.30±3.38%（DMSO 处理）提高至 87.08±8.76%。 [1]在HT-29细胞中，10 nM GSK074使7-AAD+细胞比例从42.90±1.41%降至16.03±4.86%。[1]通过共免疫沉淀和邻位连接分析检测，GSK074可阻断RIP1-RIP3复合物的形成。[1]GSK074可消除RIP3介导的MLKL丝氨酸345磷酸化，而不影响RIP1/RIP3蛋白水平。[1]在L929细胞中，100 nM GSK074抑制IFNβ+poly(I:C)+zVAD诱导的RIP1非依赖性坏死性凋亡（7-AAD+细胞比例从63.91±3.21%降至23.90±0.56%）。 [1]在小鼠原代主动脉平滑肌细胞中，10 nM GSK074（而非Nec-1细胞）显著抑制了TNFα（10 ng/ml）诱导的IL-6 mRNA表达。[1]与GSK843不同，浓度高达20 μM的GSK074不会诱导细胞凋亡（Annexin V+/7-AAD-细胞数量无增加），也不会促进促凋亡的RIP复合物的形成。[1]在MOVAS和L929细胞中，GSK074不会阻断GSK843或衣霉素（内质网应激）诱导的细胞凋亡。[1]GSK2593074A抑制RIP1和RIP3，从而阻断坏死性细胞死亡。该化合物已在多种细胞模型中显示出显著的阻断坏死性细胞死亡的功效。已通过酶学分析确定了RIP1和RIP3抑制的详细IC50值。其结构与GSK'843相似。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在植入泵后立即给Apoe-/-小鼠注射GSK2593074A（GSK'074；0.93 mg/kg/天；腹腔注射；持续14或28天）。与DMSO组相比，GSK2593074A治疗组小鼠的动脉瘤形成显著减少，表现为主动脉扩张程度显著降低（DMSO组85.39±15.76% vs GSK2593074A组36.28±5.76%；P<0.05），以及腹主动脉瘤（AAA）发生率降低（从83.3%降至16.7%）。 GSK2593074A 显著降低了主动脉扩张程度（DMSO 组 66.06±9.17% vs GSK2593074A 组 27.36±8.25%；P<0.05）[1]。在磷酸钙诱导的腹主动脉瘤 (AAA) 模型（雄性 C57BL/6J 小鼠）中，每日腹腔注射 0.93 mg/kg/天的 GSK2593074A 可显著减弱主动脉扩张：DMSO 组 66.06±9.17% vs GSK074 组 27.36±8.25% (P<0.05)。GSK074 治疗组小鼠均未发生动脉瘤 (0/4)，而 DMSO 治疗组 5 只小鼠中有 4 只达到动脉瘤阈值。 [1] 在血管紧张素II诱导的腹主动脉瘤（AAA）模型（9月龄雌性Apoe-/-小鼠）中，GSK074（0.93 mg/kg/天，腹腔注射）使主动脉扩张程度从85.39±15.76%（DMSO组）降低至36.28±5.76%（P<0.05），并将AAA发生率从83.3%降低至16.7%。[1] 组织学分析显示，GSK074治疗可维持平滑肌α-肌动蛋白的表达，减少易发生动脉瘤的主动脉中碘化丙啶阳性坏死细胞、磷酸化MLKL染色、TUNEL阳性凋亡细胞和CD68阳性巨噬细胞的数量。[1] 关于GSK2593074A的体内活性数据有限。作为一种坏死性凋亡抑制剂，它在坏死性凋亡发挥致病作用的炎症性和退行性疾病动物模型中具有潜在的应用价值，包括缺血再灌注损伤、神经退行性疾病和炎症性肠病。还需要进一步的体内表征。
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| 酶活实验 |
采用竞争性结合实验（KINOMEscan™）测定结合常数（Kd）。将GSK2593074A在100% DMSO中配制成11个浓度点的三倍系列稀释液，最终浓度为100×，然后用测定缓冲液稀释至1×。使用Hill方程，通过非线性最小二乘法拟合Levenberg-Marquardt算法，并根据标准剂量反应曲线计算Kd值。GSK074与重组人RIP3激酶结构域的结合Kd为130 nM，与RIP1的结合Kd为12 nM。未检测到其与PKCδ的亲和力（Kd>30,000 nM）。[1]
采用体外激酶活性测定法（ADP-Glo）测定RIP1和RIP3的激酶活性。将浓度为指定值的测试化合物溶于测定缓冲液（50 mM Hepes pH 7.5、50 mM NaCl、30 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.02% CHAPS、0.5 mg/mL BSA）中，并与 25 nM 激酶和底物混合于 384 孔板中。孵育 1 小时后，加入 150 μM ATP 继续孵育 5 小时。反应通过依次加入 ADP-Glo 试剂和 ADP-Glo 检测液终止。测量发光值并以无激酶对照组进行标准化。GSK074 抑制 RIP1 和 RIP3 激酶活性；20 nM GSK074 对 RIP1 的抑制程度与 1 μM Nec-1s 相当。 [1] 分子对接：基于人B-Raf结构（DFG-in的PDB编号：4FK3，DFG-out的PDB编号：3IDP），使用MOE构建RIP1和RIP3的同源模型，并使用AMBER10力场进行能量最小化。配体对接使用HYBRID（v3.2.0）进行，每个配体计算1000个构象，并采用MMFF电荷模型。GSK074优先结合RIP1和RIP3的DFG-out同源模型，提示其为II型抑制。[1] GSK2593074A的无细胞激酶活性测定采用纯化的重组RIP1或RIP3激酶和合适的肽底物。激酶反应在ATP存在下进行，并逐渐增加化合物的浓度。底物的磷酸化通过放射性或荧光检测进行定量。 IC50值由浓度-效应曲线确定。选择性通过筛选一系列相关激酶进行评估。 |
| 细胞实验 |
所用细胞系：MOVAS（小鼠主动脉平滑肌细胞）、L929（小鼠成纤维细胞）、HT-29（人结直肠腺癌细胞）、原代小鼠主动脉平滑肌细胞（SMC）和骨髓来源巨噬细胞（BMDM）。采用TNFα（MOVAS细胞30 ng/mL，L929细胞20 ng/mL，原代SMC 100 ng/mL）联合zVAD（MOVAS细胞60 μM，L929细胞40 μM，原代SMC 60 μM）诱导细胞坏死。HT-29细胞的诱导条件为：20 ng/mL TNFα + 200 nM Smac模拟物 + 20 μM zVAD。对于 RIP1 非依赖性坏死性凋亡：L929 细胞用 IFNβ (50 单位/mL) 预处理 24 小时，然后用 poly(I:C) (10 μg/mL) + zVAD (40 μM) 处理。使用 CellTiter-Glo 检测细胞活力。流式细胞术中，细胞用 7-AAD 或 Annexin V-PE/7-AAD 染色。对于原位 PLA，细胞用 4% 多聚甲醛固定，用 0.2% Triton X-100 透化，与一抗孵育，然后与 PLA 探针孵育，进行连接和扩增，最后用荧光寡核苷酸检测。对于共免疫沉淀实验，细胞用Pierce IP裂解缓冲液裂解，蛋白A磁珠与抗RIP3抗体或同型对照抗体孵育30分钟，然后与细胞裂解液孵育1小时，洗涤，用Laemmli缓冲液洗脱，并进行免疫印迹分析。对于免疫印迹实验，细胞用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，经SDS-PAGE分离，转移至PVDF膜，封闭，与一抗孵育过夜，然后与HRP标记的二抗孵育，最后用ECL显色。对于RT-PCR实验，用Trizol提取总RNA，合成cDNA，用SYBR Green进行实时PCR，以β-actin为内参，采用2-ΔΔCT法计算mRNA相对表达水平。 [1]
在用坏死性凋亡诱导剂（TNF-α、SMAC 模拟物和 caspase 抑制剂或其他组合）刺激细胞之前，先用不同浓度的 GSK2593074A 处理细胞（例如 L929 成纤维细胞、HT-29 结肠癌细胞）。通过 LDH 释放、碘化丙啶摄取或 MTT 检测来评估细胞死亡。使用磷酸化特异性抗体通过蛋白质印迹法评估 RIP1/RIP3 磷酸化和 MLKL 激活。 |
| 动物实验 |
动物：雄性C57BL/6J小鼠（8-10周龄，3月龄）和雌性Apoe-/-小鼠（9-10月龄）。磷酸钙诱导腹主动脉瘤（AAA）：沿正中切口分离腹主动脉下段，将浸有0.5 M CaCl₂的纱布置于血管周围10分钟，随后用浸有PBS的纱布包扎5分钟。对照组给予0.5 M NaCl。在实验前和实验结束时（第14天）用数字游标卡尺测量腹主动脉外径。动脉瘤定义为外径增加≥50%。血管紧张素II诱导AAA：雌性Apoe-/-小鼠饲喂常规饲料，通过Alzet渗透泵（2004型）皮下注射Ang II（1000 ng/kg/min），持续28天。将GSK2593074A溶于8% DMSO中，在动脉瘤诱导后立即以0.93 mg/kg/天（2 μmol/kg/天）的剂量每日腹腔注射给药。对于磷酸钙模型，治疗持续14天；对于血管紧张素II模型，治疗持续28天。体内碘化丙啶染色：在安乐死前2小时腹腔注射PI（15 mg/kg体重）；将冰冻切片（6 μm）用DAPI封片，并通过荧光显微镜观察。[1] GSK2593074A的体内动物研究通常涉及在坏死性凋亡相关疾病的啮齿动物模型中通过腹腔注射或口服途径给药。可通过测量组织样本中RIP1/RIP3的磷酸化水平来评估靶点结合情况。疗效终点取决于所研究的具体疾病模型（例如，组织损伤、炎症、功能恢复）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
GSK2593074A 在肝微粒体中的半衰期约为 1 小时，与 Nec-1s 相似。[1] GSK2593074A 的药代动力学性质尚未得到全面报道。作为一种具有中等亲脂性的小分子（分子量约 480，分子式 C27H23N5OS），预计其具有良好的膜渗透性。该化合物可溶于 DMSO。详细的药代动力学参数仍有待确定。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
GSK2593074A的毒性数据有限。作为一种靶向RIP1和RIP3的激酶抑制剂，其开发需要进行标准的毒理学评估。该化合物对RIP1和RIP3相对于其他激酶的选择性将决定其脱靶安全性。根据RIPK3基因敲除小鼠的表型，预计其对坏死性凋亡的靶向抑制作用具有良好的耐受性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GSK2593074A 是一种新型坏死性凋亡抑制剂，属于 II 型激酶抑制剂，可同时靶向 RIP1 和 RIP3。它是在以 Nec-1 为基线筛选 1141 种激酶抑制剂后发现的。针对 468 种人类激酶的选择性分析（KINOMEscan，浓度 100 nM）显示，GSK2593074A 对 RIP1 具有高度选择性（0% 为对照组），选择性评分 S(1)=0.012（403 种非突变激酶中有 5 种的选择性低于 1% 为对照组）。除 MEK5 外，其他结合的激酶（KIT、MEK5、CSF1R、EPHB6）在细胞死亡中没有已知的作用，且在平滑肌细胞中的表达量极低。与 RIP3 抑制剂 GSK843 不同，后者可通过形成凋亡体在浓度 >3 μM 时诱导细胞凋亡，GSK074 即使在 20 μM 的浓度下也不具有促凋亡特性。GSK074 可能是首个能够作为 II 型抑制剂与 RIP3 结合的坏死性凋亡抑制剂。[1]
GSK2593074A（分子式 C27H23N5OS）是一种坏死性凋亡抑制剂，具有同时靶向 RIP1 和 RIP3 的能力。它由葛兰素史克公司开发，结构与 GSK843 相似。该化合物在与坏死性凋亡相关的炎症性和退行性疾病中具有潜在的应用价值。本产品仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C27H23N5OS
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|---|---|
| 分子量 |
465.569423913956
|
| 精确质量 |
465.162
|
| CAS号 |
1337531-06-2
|
| 相关CAS号 |
1337531-06-2
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| PubChem CID |
53466951
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| 外观&性状 |
Light yellow to khaki solid
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| LogP |
4.1
|
| tPSA |
105
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
34
|
| 分子复杂度/Complexity |
732
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CN1C=C(C=N1)C2=CN=C(C3=C2SC=C3C4=CC5=C(C=C4)N(CC5)C(=O)CC6=CC=CC=C6)N
|
| InChi Key |
LIGGMBSSOOVGAE-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C27H23N5OS/c1-31-15-20(13-30-31)21-14-29-27(28)25-22(16-34-26(21)25)18-7-8-23-19(12-18)9-10-32(23)24(33)11-17-5-3-2-4-6-17/h2-8,12-16H,9-11H2,1H3,(H2,28,29)
|
| 化学名 |
1-[5-[4-amino-7-(1-methylpyrazol-4-yl)thieno[3,2-c]pyridin-3-yl]-2,3-dihydroindol-1-yl]-2-phenylethanone
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| 别名 |
GSK2593074A; GSK'074; GSK-2593074A; GSK 074; GSK 2593074A; GSK-074
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 41.7 mg/mL (~89.5 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.47 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1479 mL | 10.7395 mL | 21.4790 mL | |
| 5 mM | 0.4296 mL | 2.1479 mL | 4.2958 mL | |
| 10 mM | 0.2148 mL | 1.0740 mL | 2.1479 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Identification of new necroptosis inhibitors.Cell Death Dis.2019 Mar 6;10(3):226. |
|---|
 GSK’074 inhibits necroptosis in various cell types.Cell Death Dis.2019 Mar 6;10(3):226. |
 GSK’074 inhibits aneurysm formation in mouse models of aneurysms.Cell Death Dis.2019 Mar 6;10(3):226. |
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