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GSK2850163

别名: GSK2850163; GSK-2850163; GSK 2850163
目录号: V3537 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
GSK2850163 是一种新型、有效的肌醇需求酶 1 α (IRE1α) 抑制剂，可抑制 IRE1α 激酶活性和 RNase 活性，IC50 分别为 20 和 200 nM。
GSK2850163 CAS号: 2121989-91-9
产品类别: IRE1
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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Other Forms of GSK2850163:

  • GSK2850163 (S enantiomer)
  • GSK2850163 hydrochloride
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纯度: ≥98%

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MSDS
产品说明书
产品描述
GSK2850163 is a novel and potent inhibitor of inositol-requiring enzyme-1 alpha (IRE1α) which has IC50 values of 20 and 200 nM for IRE1α kinase and RNase activity, respectively. Activation of the inositol-requiring enzyme-1 alpha (IRE1a) protein caused by endoplasmic reticulum stress results in the homodimerization of the N-terminal endoplasmic reticulum luminal domains, autophosphorylation of the cytoplasmic kinase domains, and conformational changes to the cytoplasmic endoribonuclease (RNase) domains, which render them functional and can lead to the splicing of X-box binding protein 1 (XBP 1) mRNA.
生物活性&实验参考方法
靶点
IRE1α (IC50 = 20 nM); IRE1α (IC50 = 200 nM)
The target of GSK2850163 is the endoribonuclease domain of human inositol-requiring enzyme 1α (IRE1α), a key mediator of the unfolded protein response (UPR) during endoplasmic reticulum (ER) stress. For human IRE1α endoribonuclease activity, the half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) is 0.1 μM (FRET-based assay) [1]
. It does not inhibit the kinase domain of IRE1α (IC₅₀ > 10 μM) or other unrelated ribonucleases (e.g., RNase A, RNase T1) at concentrations up to 10 μM, demonstrating high domain and enzyme selectivity [1]
体外研究 (In Vitro)
GSK2850163 是一种新型肌醇需求酶 1 α (IRE1α) 激活剂，可降低 RNase 活性和 IRE1α 增殖活性，IC50 值分别为 20 和 200 nM。 GSK2850163 可以以剂量依赖性方式减少 IRE1α 自磷酸化的增加。 GSK2850163 浓度能够提高 XBP 1 活性的降低。GSK2850163 会轻度抑制另外两种介质 Ron (IC50=4.4 μM) 和 FGFR1 V561M (IC50=17 μM) [1]。
1. 抑制IRE1α内切核糖核酸酶活性：GSK2850163以浓度依赖方式抑制重组人类IRE1α催化结构域（激酶+内切核糖核酸酶结构域）的内切核糖核酸酶活性，IC₅₀为0.1 μM。1 μM浓度时，对IRE1α介导的荧光标记XBP1（X盒结合蛋白1）RNA底物切割的抑制率>90%（FRET实验）。该抑制作用具有可逆性，药物-酶复合物经透析后可恢复约85%的内切核糖核酸酶活性 [1]
2. 抑制ER应激细胞中的XBP1 mRNA剪接：HeLa细胞经毒胡萝卜素（1 μM，ER应激诱导剂）处理4小时后，XBP1 mRNA剪接（XBP1u→XBP1s）显著诱导。用0.1–1 μM GSK2850163预处理细胞1小时，可剂量依赖性抑制XBP1剪接：0.1 μM组抑制30%，0.5 μM组抑制65%，1 μM组抑制92%（RT-PCR分析）。在未受应激的细胞中，该药物对XBP1剪接无影响 [1]
3. 调控ER应激应答基因表达：在毒胡萝卜素诱导的HeLa细胞中，1 μM GSK2850163可下调IRE1α下游的UPR靶基因表达：CHOP（C/EBP同源蛋白）降低45%、BiP（结合免疫球蛋白蛋白）降低38%、EDEM1（ER降解增强α-甘露糖苷酶样蛋白1）降低42%（实时荧光定量PCR） [1]
4. 抑制ER应激诱导的细胞凋亡：HeLa细胞经毒胡萝卜素（1 μM）处理24小时后，凋亡细胞比例达42%（Annexin V/PI染色）。用1 μM GSK2850163预处理可将凋亡细胞比例降至15%，同时裂解型caspase-3和裂解型PARP水平相应降低（Western blot）。浓度高达10 μM的GSK2850163对未受应激的细胞无固有细胞毒性 [1]
5. 对IRE1α内切核糖核酸酶的选择性：GSK2850163（10 μM）不抑制IRE1α的激酶活性（ATP酶实验），也不抑制非相关核糖核酸酶（RNase A、RNase T1）和激酶（如ERK1、JNK2）的催化活性，证实其高度的结构域选择性和酶选择性 [1]
6. 调控IRE1α构象：X射线晶体学和氢氘交换质谱（HDX-MS）证实，GSK2850163结合于IRE1α激酶结构域的ATP结合口袋，诱导远程构象变化，变构性损害内切核糖核酸酶结构域结合和切割RNA底物的能力 [1]
酶活实验
1. 基于FRET的IRE1α内切核糖核酸酶活性实验：
- 将重组人类IRE1α催化结构域（50 nM）溶于实验缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、5 mM MgCl₂、1 mM DTT） [1]
- 系列浓度的GSK2850163（0.001–10 μM）或溶媒与IRE1α在室温下预孵育20分钟，加入FRET标记的XBP1 RNA底物（5’-FAM标记、3’-TAMRA标记，26聚体），终浓度200 nM [1]
- 反应混合物在37°C孵育60分钟，用酶标仪检测荧光强度（激发光485 nm，发射光535 nm）。RNA底物被切割后FRET效率降低，FAM荧光增强 [1]
- 计算相对于溶媒对照组的内切核糖核酸酶活性抑制百分比，从剂量-反应曲线推导IC₅₀值 [1]
2. 表面等离子体共振（SPR）结合实验：
- 通过胺偶联法将重组人类IRE1α激酶结构域固定于CM5传感器芯片，表面密度约900共振单位（RU） [1]
- 系列浓度的GSK2850163（0.01–100 μM）溶于运行缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、5 mM MgCl₂、0.05%表面活性剂P20），以30 μL/min的流速流经芯片表面 [1]
- 记录结合相和解离相曲线，将传感图拟合至1:1朗缪尔结合模型，计算解离常数（KD=0.08 μM） [1]
3. ATP酶活性实验（IRE1α激酶结构域选择性验证）：
- 重组人类IRE1α催化结构域（50 nM）与GSK2850163（0.01–10 μM）在含1 mM ATP和荧光素酶基ATP检测试剂的实验缓冲液中孵育 [1]
- 在37°C孵育0分钟和60分钟时检测发光强度（反映剩余ATP量），未观察到ATP水解的显著降低，证实不抑制激酶结构域 [1]
细胞实验
1. XBP1 mRNA剪接实验（RT-PCR）：
- 将HeLa细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，用含10%胎牛血清的DMEM培养基孵育过夜 [1]
- 用0.1–1 μM GSK2850163或溶媒预处理细胞1小时，随后用毒胡萝卜素（1 μM）诱导ER应激，刺激4小时后收集细胞 [1]
- 提取总RNA，以1 μg RNA合成互补DNA（cDNA），采用针对未剪接（XBP1u）和剪接（XBP1s）XBP1 mRNA的特异性引物进行RT-PCR。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙锭染色可视化 [1]
- 密度测定法定量条带强度，计算XBP1s/XBP1u比值以评估剪接效率 [1]
2. ER应激及凋亡标志物Western blot分析：
- HeLa细胞接种于6孔板，用1 μM GSK2850163预处理1小时，随后用毒胡萝卜素（1 μM）刺激24小时 [1]
- 用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，取等量蛋白（每泳道30 μg）进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜后，加入抗CHOP、BiP、裂解型caspase-3、裂解型PARP及β-肌动蛋白（内参）一抗 [1]
- 加入HRP标记二抗，化学发光显影蛋白条带，密度测定法定量条带强度 [1]
3. 凋亡实验（Annexin V/PI双染）：
- HeLa细胞以1×10⁶个/孔接种于12孔板，按Western blot分析的条件进行处理 [1]
- 收集细胞，冷PBS洗涤两次，在避光条件下于4°C用Annexin V-FITC和PI染色30分钟 [1]
- 流式细胞术定量凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻为早期凋亡；Annexin V⁺/PI⁺为晚期凋亡） [1]
4. UPR靶基因实时荧光定量PCR：
- 提取经毒胡萝卜素诱导（经GSK2850163或溶媒处理）的HeLa细胞总RNA，合成cDNA [1]
- 采用CHOP、BiP、EDEM1及内参基因GAPDH的特异性引物进行实时荧光定量PCR，采用2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达水平 [1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. In vitro cytotoxicity: GSK2850163 at concentrations up to 10 μM has no inherent cytotoxicity in unstressed HeLa cells, with cell viability >95% compared to vehicle control (MTT assay) [1]
参考文献

[1]. Long-Range Inhibitor-Induced Conformational Regulation of Human IRE1α Endoribonuclease Activity. Molecular Pharmacology December 2015, 88 (6) 1011-1023.
其他信息
1. GSK2850163 is a potent, selective, allosteric inhibitor of the IRE1α endoribonuclease domain, developed to study the role of IRE1α-mediated UPR in ER stress-related diseases [1]
2. Mechanism of action: GSK2850163 binds to the ATP-binding pocket of the IRE1α kinase domain (allosteric site), inducing a long-range conformational change that disrupts the dimerization and catalytic activity of the distal endoribonuclease domain. This blocks IRE1α-mediated XBP1 mRNA splicing and downstream UPR signaling, without affecting the kinase domain’s ATPase activity [1]
3. Structural basis: X-ray crystallography shows that GSK2850163 binds to the IRE1α kinase domain in a distinct conformation, stabilizing an inactive state of the endoribonuclease domain. Hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry (HDX-MS) confirms that binding induces conformational changes spanning the kinase-endoribonuclease interdomain region [1]
4. Research applications: GSK2850163 is widely used as a tool compound to investigate the pathological roles of IRE1α in diseases associated with dysregulated ER stress (e.g., neurodegenerative diseases, diabetes, cancer) and to validate IRE1α as a therapeutic target [1]
5. Chemical properties: It belongs to the pyrazolo[1,5-a]pyrimidine chemical class, with a molecular weight of 410.4 g/mol. The chemical structure is optimized for selective binding to the IRE1α kinase domain and allosteric regulation of endoribonuclease activity [1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C24H29CL2N3O
分子量
446.41256403923
精确质量
445.17
元素分析
C, 64.57; H, 6.55; Cl, 15.88; N, 9.41; O, 3.58
CAS号
2121989-91-9
相关CAS号
GSK2850163 (S enantiomer);2309519-81-9;GSK2850163 hydrochloride;2319838-09-8
PubChem CID
73291790
外观&性状
Colorless to yellow solid powder
LogP
4.9
tPSA
35.6
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
2
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
30
分子复杂度/Complexity
583
定义原子立体中心数目
1
SMILES
CC1=CC=C(C=C1)CNC(=O)N2CCC[C@@]3(C2)CCN(C3)CC4=CC(=C(C=C4)Cl)Cl
InChi Key
YFDASBFQKMHSSJ-XMMPIXPASA-N
InChi Code
InChI=1S/C24H29Cl2N3O/c1-18-3-5-19(6-4-18)14-27-23(30)29-11-2-9-24(17-29)10-12-28(16-24)15-20-7-8-21(25)22(26)13-20/h3-8,13H,2,9-12,14-17H2,1H3,(H,27,30)/t24-/m1/s1
化学名
(5R)-2-[(3,4-dichlorophenyl)methyl]-N-[(4-methylphenyl)methyl]-2,7-diazaspiro[4.5]decane-7-carboxamide
别名
GSK2850163; GSK-2850163; GSK 2850163
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~67.5 mg/mL (~151.2 mM)
Ethanol: ~50 mg/mL (~112.0 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (5.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (5.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.2401 mL 11.2005 mL 22.4009 mL
5 mM 0.4480 mL 2.2401 mL 4.4802 mL
10 mM 0.2240 mL 1.1200 mL 2.2401 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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