| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RIP1 kinase (IC50 = 6.3 nM)
GSK3145095 has excellent activity in blocking RIP1 kinasedependent cellular responses and potently binds to RIP1 with exquisite kinase specificity. The inhibitor is also capable of encouraging a tumor suppressive T cell phenotype in pancreatic adenocarcinoma organ cultures, highlighting its potential as a novel cancer therapy. [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
GSK3145095 在阻断 RIP1 激酶依赖性细胞反应方面具有出色的活性，并以精致的激酶特异性与 RIP1 有效结合。该抑制剂还能够在胰腺腺癌器官培养物中促进肿瘤抑制性 T 细胞表型，凸显其作为新型癌症疗法的潜力。 [1]
GSK3145095 能有效抑制人单核细胞 U937 细胞中 RIP1 激酶依赖的坏死性凋亡通路 (IC50 = 6.3 nM) [1]。 在从全血中分离的原代人中性粒细胞中，使用 TNF、caspase 抑制剂 (QVD-Oph) 和 SMAC 模拟物 (RMT 5265) 刺激，GSK3145095 能有效阻断细胞反应：抑制总体细胞活力（通过ATP水平测定，IC50 = 1.6 nM）、抑制细胞死亡（通过LDH释放测定，IC50 = 0.5 nM）、以及抑制 RIP1 依赖性炎性细胞因子 MIP-1β 的产生（在蛋白水平或mRNA表达水平测定，IC50 = 0.4 nM）[1]。 在人全血刺激实验（TNF + QVD-Oph/zVAD.fmk + RMT 5265）中，GSK3145095 抑制细胞因子 MIP-1β 产生的 IC50 为 5 nM。在类似的食蟹猴全血实验中，IC50 为 16 nM [1]。 GSK3145095 表现出高度的激酶选择性。在针对 359 种激酶的 P33 放射性标记实验和针对 456 种激酶的竞争性结合实验 (KINOMEscan) 中，以 10 µM 浓度测试，除 RIP1 外未显示对任何其他激酶的抑制，基于其 RIP1 效力，选择性窗口 >1500 倍 [1]。 GSK3145095 对非灵长类 RIP1 的效力显著降低。在生化实验中，其对非灵长类 RIP1 的效力比灵长类 RIP1 低 380 倍以上。相应地，在细胞实验中，其抑制小鼠 L929 细胞坏死性死亡（IC50 = 1.3 µM）的效力比抑制人 U937 细胞（IC50 = 6.3 nM）低 340 倍 [1]。 在使用来自胰腺腺癌、结直肠癌、乳腺癌和胃癌患者的患者源性器官型球状体 (PDOTS) 的离体实验中，用 0.5 nM 的 GSK3145095 处理 3 天后，通过流式细胞术分析显示，与载体处理的样品相比，效应记忆 T 细胞 (CD44+) 和免疫原性 CD4+ T 细胞 (IFNγ+) 显著增加。同时观察到 CD8+ 细胞毒性 T 细胞和 TNFα 表达增加的趋势 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
GSK3145095也提高了存活率（50%），但低于RI-962。RI-962或GSK3145095治疗显著降低了TNFα诱导的小鼠体温损失（图8b）和促炎细胞因子（IL-1β和IL-6）的浓度[2]
DSS治疗导致小鼠体重从第5天到第11天的快速下降，并且用RI-962或GSK3145095治疗有力地改善了这种体重下降。此外，用RI-962或GSK3145095治疗显著减少了DSS诱导的结肠长度缩短（图9b，c）。组织病理学分析显示，RI-962显著降低了DSS处理的小鼠结肠中的组织损伤（图第9d段）。在DSS诱导的结肠炎中，大量S100a9阳性细胞（炎症标志物）渗透到受损结肠的粘膜和上皮层中（图9e），而在用RI-962处理的小鼠的结肠中没有观察到S100a9%阳性细胞的渗透（图9e）。更重要的是，用RI-962或GSK3145095治疗显著提高了DSS治疗小鼠的存活率（图9f；40 mg/kg RI-962和GSK3145095的存活率，100%vs载体：16.7%）[2]。 GSK3145095 对小鼠 RIP1 的效力降低，阻碍了其在啮齿类动物肿瘤模型中的评估。因此，本文献未报告其在动物模型中的体内功效数据 [1]。 基于药代动力学/药效学 (PK/PD) 模型进行了人体内预测。预计每日一次 273 mg 或每日两次 40 mg 的剂量可使血药浓度在 24 小时内维持在高于人全血 IC90 的水平，实现 90% 的 RIP1 抑制 [1]。 |
| 酶活实验 |
ADP-Glo活性测定。[1]
RIP1的催化活性使用Promega ADP-Glo激酶试剂盒进行定量，如前所述（Harris等人，2016），使用四参数曲线拟合或紧密结合曲线拟合效力低于测定检测限（约为酶浓度的一半）的化合物。数据表示为至少n=2次测定的平均IC50[1] 化合物6（GSK3145095）激酶选择性和物种选择性图谱[1]。 对反应生物学公司（RBC）激酶组的酶抑制百分比[1] 在反应生物学公司（RBC）激酶组中，化合物6在10μM下对359种激酶进行重复测试。对照化合物在10剂量IC50模式下进行测试，从20μM开始进行3倍连续稀释。在10μM ATP下进行反应。完整的协议详细信息可在http://www.reactionbiology.com.数据在表S1中报告为%酶活性（相对于DMSO对照）。观察到ABL1、ABL2/ARG、BLK、c-Src、DDR2、EPHA5、EPHB2、FGR、FRK/PTK5、FYN、LYN、LYB、PEAK1和YES/YES1的活性<50%（平均n=2）。然而，这14种激酶在最高浓度为30μM时对化合物6的全曲线分析（见表S2）未发现抑制作用，表明最初的单浓度结果为假阳性。激酶组不包括RIP1。 使用生化 ADP-Glo 实验测量 RIP1 激酶抑制效力，得出 GSK3145095 的 IC50 为 6.3 nM [1]。 使用两个独立的筛选平台进行激酶选择性分析：针对 359 种激酶的 P33 放射性标记实验筛选和针对 456 种激酶的竞争性结合实验 (KINOMEscan)。GSK3145095 在两种实验中的测试浓度均为 10 µM [1]。 测量了结合动力学。通过停流动力学测定的结合速率常数 (k_on) 为 2.5 x 10^4 M^-1 s^-1。通过荧光偏振竞争结合测定的解离速率常数 (k_off) 为 1.2 x 10^-4 s^-1，对应的解离半衰期 (t_1/2) 为 99 分钟 [1]。 该化合物表现出 ATP 竞争性抑制，因为它占据了 ATP α-磷酸结合的区域，使得结合相互排斥 [1]。 |
| 细胞实验 |
GSK3145095 在测定缓冲液中制备，在 22 点滴定中按 1:1.5 连续稀释（高终浓度 3 μM），然后添加到 384 白色低体积 Greiner 板中。在测定缓冲液中，将 3.5 μL 每种抑制剂浓度和 3.5 L 最终 25 nM 酶浓度添加到板中。添加完毕后，将测定缓冲液中的 3.5 μL ATP（最终浓度为 15.6 μM 至 875 μM）添加到板中以启动反应。在室温下，反应进行五小时。
在人单核细胞 U937 细胞中评估了细胞 RIP1 抑制。抑制 RIP1 激酶依赖性反应的 IC50 为 6.3 nM [1]。 原代人中性粒细胞实验：从人全血中分离中性粒细胞，在存在或不存在 GSK3145095 的情况下，用 TNF、caspase 抑制剂 QVD-Oph 和 SMAC 模拟物 RMT 5265 处理以驱动坏死通路。孵育后，测量多个指标：使用细胞 ATP 实验测量总体细胞活力，通过乳酸脱氢酶 (LDH) 释放测量细胞死亡，以及炎性细胞因子 MIP-1β 的产生（蛋白水平和 mRNA 表达水平）[1]。 人和食蟹猴全血刺激实验：用 TNF、caspase 抑制剂 (QVD-Oph 或 zVAD.fmk) 和 SMAC 模拟物 (RMT 5265) 刺激全血。与 GSK3145095 孵育后，测量细胞因子 MIP-1β 的产生以确定抑制效力 [1]。 小鼠纤维肉瘤 L929 细胞实验：该实验用于评估对小鼠 RIP1 的效力。处理细胞以诱导坏死性死亡，并测量 GSK3145095 的抑制效果，得到 IC50 为 1.3 µM [1]。 使用基于细胞的实验评估了渗透性和 P-糖蛋白 (P-gp) 底物状态。GSK3145095 表现出中等的细胞渗透性 (6.7 x 10^-6 cm/s)，并被鉴定为外排转运蛋白 P-gp 的底物，这可能是其脑渗透性低的原因 [1]。 |
| 动物实验 |
The DSS-induced IBD experiment[2]
DSS (3% w/v) was administered in drinking water ad libitum for 7 d (from day 0 to day 7). DSS solution was replaced three times on day 2, day 4, and day 6. C57BL/6 female mice were injected intraperitoneally with vehicle, RI-962 (40 mg/kg), or GSK3145095 (40 mg/kg) for 10 d (from day 0 to day 9). Three mice in each group were killed at random on day 7, and distal colon tissues were collected for analysis. The mice weight and survival rate were recorded daily. Pharmacokinetic studies were conducted in rats, dogs, and cynomolgus monkeys. For intravenous (iv) administration, GSK3145095 was formulated in a vehicle containing 20% Cavitron and 5% DMSO in PBS. Doses were 1.0 mg/kg (rat), 1.1 mg/kg (dog), and 0.93 mg/kg (monkey). Blood samples were collected at various time points to determine pharmacokinetic parameters [1]. For oral (po) administration, GSK3145095 was formulated in a vehicle containing 6% Cavitron and 5% DMSO in PBS. Doses were 2.1 mg/kg (rat), 2.0 mg/kg (dog), and 1.9 mg/kg (monkey). Blood samples were collected to determine T_max, C_max, AUC, and bioavailability [1]. A rat tissue distribution study was conducted following a 4-hour intravenous infusion. Tissues (brain, liver, kidney, colon, heart, skin) were collected and drug concentrations were measured and compared to blood concentrations [1]. |
| 药代性质 (ADME/PK) |
GSK3145095在临床前动物模型中表现出低至中等的清除率：大鼠为27 ± 5 mL/min/kg（占肝血流量的35%），犬为9.8 ± 1.8 mL/min/kg，猴为6.4 ± 0.5 mL/min/kg [1]。
稳态分布容积（Vd_ss）为中等：大鼠为1.8 ± 0.3 L/kg，犬为1.1 ± 0.2 L/kg，猴为1.8 ± 0.1 L/kg [1]。 末端半衰期（t1/2）为：大鼠（静脉注射）2.2 ± 0.8小时，犬（静脉注射）1.7 ± 0.2小时，猴（静脉注射）4.2 ± 0.6小时 [1]。 口服生物利用度在不同动物模型中均较高：大鼠为84 ± 8%，犬的血药浓度为 78 ± 3%，猴的血药浓度为 88 ± 13% [1]。 血药浓度游离分数分别为：大鼠 13%，犬 12%，猴 12%，人 8.1% [1]。 在大鼠肝细胞中的体外代谢稳定性为中等，在猴和人肝细胞中的代谢稳定性较低 [1]。 在大鼠、猴和人肝细胞中进行的代谢物鉴定研究表明，GSK3145095 可通过 I 期（羟基化）和 II 期（葡萄糖醛酸化）途径代谢。在大鼠和猴肝细胞孵育液中检测到痕量的谷胱甘肽 (GSH) 结合物，但在人肝细胞孵育液中未检测到。未鉴定出人类特异性代谢物[1]。 大鼠组织分布显示，与血液相比，GSK3145095在肝脏和肾脏中的浓度较高（7-8倍），在结肠、心脏和皮肤中的浓度相当（0.7-3倍），脑渗透性较低（仅为血液浓度的6%）[1]。 基于异速生长比例和体外-体内外推，GSK3145095的预测人体药代动力学参数包括：高生物利用度、低清除率、中等分布容积和约3.3小时的末端半衰期[1]。 |
| 参考文献 |
[2]. Generative deep learning enables the discovery of a potent and selective RIPK1 inhibitor. Nat Commun . 2022 Nov 12;13(1):6891.
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| 其他信息 |
RIPK1抑制剂GSK3145095是一种口服小分子受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（RIPK1；受体相互作用蛋白1；RIP1）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤和免疫调节活性。给药后，GSK3145095可阻断RIPK1介导的信号通路，从而减少CXC基序趋化因子配体1（CXCL1）驱动的免疫抑制性髓源性抑制细胞（MDSC）在肿瘤微环境（TME）中的募集和迁移。这使得效应细胞，例如自然杀伤（NK）细胞和细胞毒性T淋巴细胞（CTL），能够杀伤并清除癌细胞。 RIPK1 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，通常在组织损伤和病原体识别引起的炎症和细胞死亡中发挥关键作用，在某些癌症类型中过度表达，可能与肿瘤发生和肿瘤微环境 (TME) 免疫抑制特性的促进有关。
GSK3145095（化合物 6）是一种临床候选 RIP1 激酶抑制剂，其化学名称为 (S)-5-苄基-N-(7,9-二氟-2-氧代-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺 [1]。 它是一种 III 型激酶抑制剂，通过共晶结构 (PDB: 6RLN) 证实，它与 RIP1 ATP 结合位点背面的变构亲脂性口袋结合。关键相互作用包括酰胺羰基与Asp156骨架NH之间的氢键、三唑氮与Met67羰基氧之间的水介导氢键，以及内酰胺氮与Leu90骨架羰基之间可能存在的长氢键[1]。 该化合物是从DNA编码化合物库筛选中发现并优化的。由于安全性耐受性和剂量要求不同，GSK3145095 是专门针对肿瘤适应症开发的，与炎症性疾病 RIP1 抑制剂 GSK2982772（化合物 3）不同 [1]。 GSK3145095 因其高效的 RIP1 抑制活性、卓越的激酶选择性以及良好的临床前药代动力学和可开发性而被选中进行临床开发 [1]。 在本文发表时，GSK3145095 正在进行治疗胰腺腺癌和其他特定实体瘤的 I 期临床试验 [1]。 其用于治疗胰腺癌的理论依据是，研究表明 RIP1 激酶抑制可以逆转肿瘤微环境中巨噬细胞介导的适应性免疫耐受，促进肿瘤抑制性 T 细胞表型的形成，并使肿瘤对免疫检查点阻断疗法更加敏感 [1]。 |
| 分子式 |
C20H17F2N5O2
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|---|---|
| 分子量 |
397.378090620041
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| 精确质量 |
397.135
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| 元素分析 |
C, 60.45; H, 4.31; F, 9.56; N, 17.62; O, 8.05
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| CAS号 |
1622849-43-7
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| 相关CAS号 |
1622849-43-7
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| PubChem CID |
118557502
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.1
|
| tPSA |
99.8
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
603
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1CC2=C(C(=CC(=C2)F)F)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C3=NNC(=N3)CC4=CC=CC=C4
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| InChi Key |
ATQAGKAMBISZQM-HNNXBMFYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H17F2N5O2/c21-13-9-12-6-7-15(19(28)25-17(12)14(22)10-13)23-20(29)18-24-16(26-27-18)8-11-4-2-1-3-5-11/h1-5,9-10,15H,6-8H2,(H,23,29)(H,25,28)(H,24,26,27)/t15-/m0/s1
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| 化学名 |
5-benzyl-N-[(3S)-7,9-difluoro-2-oxo-1,3,4,5-tetrahydro-1-benzazepin-3-yl]-1H-1,2,4-triazole-3-carboxamide
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| 别名 |
GSK3145095; GSK-3145095; GSK 3145095; 1622849-43-7; UNII-B4D3WPS7JY; B4D3WPS7JY; GSK-3145095; 5-benzyl-N-[(3S)-7,9-difluoro-2-oxo-1,3,4,5-tetrahydro-1-benzazepin-3-yl]-1H-1,2,4-triazole-3-carboxamide; CHEMBL4452233; (S)-5-benzyl-N-(7,9-difluoro-2-oxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-benzo[b]azepin-3-yl)-4H-1,2,4-triazole-3-carboxamide;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 250~79 mg/mL (~198.8 mM)
Ethanol: ~6 mg/mL (~15.1 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5165 mL | 12.5824 mL | 25.1648 mL | |
| 5 mM | 0.5033 mL | 2.5165 mL | 5.0330 mL | |
| 10 mM | 0.2516 mL | 1.2582 mL | 2.5165 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT03681951 | Terminated | Drug: GSK3145095 Drug: Pembrolizumab |
Neoplasms, Pancreatic | GlaxoSmithKline | November 16, 2018 | Phase 3 |
RIPK1 ligand-Linker Conjugate-1
RIPK1-ligand-2
RIPK1-IN-34
RIPK1-IN-35
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