GSK461364

PLK1 (Ki = 2.2 nM)

体外活性：GSK461364 抑制多个来源的癌细胞系增殖，并且在非分裂人类细胞中毒性极小。 WT p53 的 RNA 沉默会增加 GSK461364 的抗增殖活性。由于许多癌症疗法往往对 p53 WT 患者更有效，因此 p53 缺陷型肿瘤对 GSK461364 的更高敏感性可能为治疗对其他化疗以及针对这些基因型的早期一线治疗难治的肿瘤提供机会。 GSK461364 是一种噻吩酰胺，可在体外抑制纯化的 Plk1 酶，Ki 为 2 nM，与 Plk2 和 Plk3 相比，对 Plk1 的选择性高出 100 倍以上。 GSK461364 是一种有效的细胞增殖抑制剂，在大多数测试的细胞系中导致 50% 生长抑制 (GI50) 低于 100 nM，对人类非增殖细胞的毒性有限。细胞周期进程的抑制具有浓度依赖性，在高 GSK461364 浓度下，G2 期初始延迟，在较低浓度下，M 期停滞。目前，GSK461364正在进行剂量递增的首次人体试验。 TP53 基因突变的细胞系往往对 GSK461364 更敏感，通过 RNA 沉默抑制 p53 反应可提高某些 p53 野生型 (WT) 细胞的敏感性。此外，这些更敏感的细胞系还具有更高水平的染色体不稳定性，这是与 TP53 突变相关的特征。在临床前测试中，GSK461364 对多种 (>120) 肿瘤细胞系表现出抗增殖活性，并有效抑制这些细胞系中超过 83% 和 91% 的增殖，IC50 值分别低于 50 和 100 nM。激酶测定：使用 Z-Lyte 测定试剂盒（Ser/Thr 肽 16）在最终测定体积 10 μL 中进行激酶反应。简而言之，反应包含 50 mM HEPES (pH 7.5)、10 mM MgCl2、1 mM EGTA、1 mM DTT、0.01% Brij 35、0.01 mg/mL 酪蛋白、200 μM ATP、200 μM Polo Box 肽 (NH2-MAGPMQS[pT ]PLNGAKK-OH) 和 6 nM 重组 Plk1 (H6-tev-PLK 1-603)。 Plk1 用 0 至 1 μM GSK461364 预孵育 60 分钟。然后添加 2 μM 肽来启动反应。 23°C 15 分钟后，根据 Z'-Lyte 方案淬灭和处理反应，并在 EnVision 读板器上读数。使用底物和产品标准品将原始荧光值转换为形成的产物的浓度。因为观察到 GSK461364 的抑制效力以与 ATP 竞争性抑制模式一致的方式作为 ATP 浓度的函数而变化，所以确定了 GSK461364 的 Ki 上限。细胞检测：癌细胞系[前列腺(LNCap,PC3)、子宫颈(HeLa)、胰腺(ASPC1)、肉瘤(Saos-2)卵巢(OVCAR8)、胃(NCI-N87)、黑色素瘤(SKMEL3、A431、MALME3M) ，结肠（Colo205，SW620，HCT116），乳房（SKBR3，MDA-MB-453，MCF7），肺（NCI-H82，MV522，NCI-H522）等]接种到384孔微量滴定板中。接种后，将细胞在 37°C、5% CO2 中孵育 24 小时。将 GSK461364 以 10 nM 的浓度添加到每个细胞系中，并使用未经处理的对照。读取每个细胞系的零时间 (T = 0) 值。 72小时后，从所有剩余细胞中吸出含有GSK461364或DMSO对照的培养基，并用4',6-二脒基-2-苯基吲哚对细胞核进行染色，并使用InCell1000高内涵分析仪测量荧光强度。计算一式三份孔中每个浓度的 GSK461364 的 72 小时 4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色相对于零时间强度的百分比强度。

GSK461364 抑制细胞培养物生长可能具有细胞抑制作用或细胞毒性作用，但在适当的剂量安排下会导致异种移植肿瘤模型中的肿瘤消退。 GSK461364 在人类肿瘤异种移植模型中显示出明显的抗肿瘤活性。 GSK461364 在小鼠异种移植物中表现出剂量依赖性有丝分裂停滞，这与对肿瘤生长的影响相关。 GSK461364 的腹膜内给药会导致不同异种移植模型（包括 Colo205 异种移植模型）的消退或肿瘤生长延迟。使用 GSK461364 抑制体内 Plk1 会导致有丝分裂停滞，并出现由单极或塌陷的有丝分裂纺锤体组成的异常有丝分裂像。

使用 Z'-Lyte 检测试剂盒（Ser/Thr 肽 16）以 10 μL 的最终检测体积进行激酶反应。 50 mM HEPES (pH 7.5)、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA、1 mM DTT、0.01% Brij 35、0.01 mg/mL 酪蛋白、200 μM ATP、200 μM Polo Box 肽 (NH2) -MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH) 和 6 nM 重组 Plk1 (H6-tev-PLK 1-603) 被简单地包含在反应中。将 Plk1 在有或没有 0–1,000 nM GSK461364 的情况下预孵育 60 分钟。接下来，添加 2 μM 肽以启动反应。反应被淬灭，根据 Z'-Lyte 方案进行处理，并在 23°C 15 分钟后在读板器上读数。培养基和产品标准品用于将原始荧光值转换为产品浓度。 GraFit 软件用于执行两参数拟合（IC50 和 Hill 系数）以确定 IC50 值。 GSK461364 的 Ki^*app 上限是通过应用竞争性抑制剂的 Cheng-Prusoff 关系找到的（ATP K_m^*app =16 μM）与 GSK461364 预孵育 60 分钟获得的 IC50 值相比，观察到 GSK461364 的抑制效力随 ATP 浓度的变化而变化，其方式与 ATP 竞争性抑制模式一致。

细胞系在 37°C 和 5% CO₂ 的湿润培养箱中在建议的培养基中培养。一式三份，使用培养基将 1,000 个细胞接种到 96 孔微量滴定板的每个孔中。第二天，用 50 μL CellTiter-Glo 收获一块板进行时间 0 (T=0) 测量，并添加溶解在 DMSO 中的 GSK461364 (GSK461364A) 或阴性对照 (0.1% DMSO)。

Nude mice are used to implant cells, which develop into tumor xenografts. Dosing started at around 100 mm3 for tumors. Every two days (q2d×6, q2d×12) or every four days (q4d×3), mice are given GSK461364 (GSK461364A) or the vehicle [4% DMA/Cremaphore (50:50), pH 5.6] intraperitoneally (i.p.) at nominal dose levels of 25, 50, and 100 mg/kg/dose. For n = 7–8 mice, the results are presented as the median tumor volume. For comparison, paclitaxel (30 mg/kg i.v.; q4d×3) is utilized as a positive control. Vernier calipers are used to measure tumors three times a week. The volume of the tumor is estimated from two-dimensional measurements using the following formula: tumor volume mm³ = (length × width²) × 0.5. The highest dose (approximately 4 g) that results in >20% mortality or >20% weight loss is known as the maximum tolerated dose. Tumor growth delay (TGD), partial regression (PR), or complete regression (CR) are three ways to characterize antitumor activity. The time difference (TGD) between the treated and control tumors to reach a predefined tumor volume (1,000 mm³) is represented. A PR is defined as a tumor's volume decreasing to half of its initial starting volume over a minimum of one week (based on three measurements in a row). A tumor's volume must decrease to less than 13 mm³ for at least one week in order to be considered CR.

[1]. Phase I study of GSK461364, a specific and competitive Polo-like kinase 1 inhibitor, in patients with advanced solid malignancies. Clin Cancer Res. 2011 May 15;17(10):3420-30.

[2]. Sensitivity of cancer cells to Plk1 inhibitor GSK461364A is associated with loss of p53 function and chromosome instability. Mol Cancer Ther. 2010 Jul;9(7):2079-89.

[3]. Distinct concentration-dependent effects of the polo-like kinase 1-specific inhibitor GSK461364A, including differential effect on apoptosis. Cancer Res. 2009 Sep 1;69(17):6969-77.

[4]. Cytotoxic mechanism of PLK1 inhibitor GSK461364 against osteosarcoma: Mitotic arrest, apoptosis, cellular senescence, and synergistic effect with paclitaxel. Int J Oncol. 2016 Mar;48(3):1187-94.

5-[6-[(4-methyl-1-piperazinyl)methyl]-1-benzimidazolyl]-3-[(1R)-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]ethoxy]-2-thiophenecarboxamide is a member of (trifluoromethyl)benzenes.
Polo-like Kinase 1 Inhibitor GSK461364 is a small molecule Polo-like kinase 1 (PLK1) inhibitor with potential antineoplastic activity. Polo-like kinase 1 inhibitor GSK461364 selectively inhibits Plk1, inducing selective G2/M arrest followed by apoptosis in a variety of tumor cells while causing reversible cell arrest at the G1 and G2 stage without apoptosis in normal cells. Plk1, named after the polo gene of Drosophila melanogaster, is a serine/threonine protein kinase involved in regulating mitotic spindle function in a non-ATP competitive manner.

C27H28F3N5O2S

543.6

543.191

C, 59.66; H, 5.19; F, 10.48; N, 12.88; O, 5.89; S, 5.90

929095-18-1

15983966

white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

658.0±65.0 °C at 760 mmHg

351.7±34.3 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.645

3.34

104.86

1

9

7

38

814

1

C(N1CCN(C)CC1)C1C=CC2=C(N(C3SC(C(=O)N)=C(O[C@@H](C4C=CC=CC=4C(F)(F)F)C)C=3)C=N2)C=1

ZHJGWYRLJUCMRT-QGZVFWFLSA-N

InChI=1S/C27H28F3N5O2S/c1-17(19-5-3-4-6-20(19)27(28,29)30)37-23-14-24(38-25(23)26(31)36)35-16-32-21-8-7-18(13-22(21)35)15-34-11-9-33(2)10-12-34/h3-8,13-14,16-17H,9-12,15H2,1-2H3,(H2,31,36)/t17-/m1/s1

5-[6-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]benzimidazol-1-yl]-3-[(1R)-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]ethoxy]thiophene-2-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.60 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。