| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RIP1 (IC50 = 1.3 nM)
The target of GSK481 is receptor-interacting protein 1 kinase (RIP1 kinase), a key mediator of necroptosis. For human RIP1 kinase: the dissociation constant (Ki) is 1.3 nM (SPR assay) [1] ; the half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) in kinase activity assay is 1.6 nM [1] . It exhibits exceptional monoselectivity, with no significant inhibition of other related kinases (e.g., RIP3, MLK3, JNK1, p38α) at concentrations up to 10 μM (IC₅₀ > 10,000 nM for all tested off-target kinases) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK481（300 nM；2 小时；Jurkat 细胞）可逆转活细胞和死细胞中 TNFa 和紫草素诱导的 RIP3 上调，这一事实表明坏死性凋亡实际上是由这两种物质诱导的[2]。
1. RIP1激酶活性抑制：GSK481以浓度依赖方式抑制重组人类RIP1激酶的催化活性，IC₅₀为1.6 nM。10 nM浓度下，对RIP1激酶活性的抑制率>90%（相较于溶媒对照组） [1] 2. 坏死性凋亡抑制作用： - 在TNFα（10 ng/mL）+ Smac模拟物（1 μM）+ Z-VAD-fmk（20 μM）诱导的L929细胞坏死性凋亡模型中，GSK481抑制坏死性凋亡的IC₅₀为3.1 nM（CellTiter-Glo细胞活力检测）。30 nM浓度时可完全阻断坏死性凋亡，细胞活力恢复至>90%（溶媒处理组细胞活力仅25%） [1] - 在经相同坏死性凋亡诱导剂处理的HT-29结肠癌细胞中，GSK481抑制坏死性凋亡的IC₅₀为4.5 nM [1] 3. 选择性抑制RIP1依赖的信号通路：Western blot分析显示，GSK481（10 nM）可抑制L929细胞中TNFα诱导的RIP1磷酸化（Ser166位点），但不影响RIP3磷酸化或caspase-3剪切（凋亡标志物），证实其特异性阻断RIP1介导的坏死性凋亡，而非凋亡通路 [1] 4. 不影响凋亡过程：GSK481（浓度高达10 μM）不抑制星形孢菌素诱导的L929细胞凋亡（Annexin V/PI染色），表明其不干扰凋亡通路 [1] 5. 流式细胞术实验验证：在同时检测坏死性凋亡、凋亡及RIP1依赖凋亡的方法学（文献[2]）中，GSK481（1 μM）可使TNFα诱导的L929细胞中坏死性凋亡细胞群体（PI⁺/Annexin V⁻）减少80%，且不改变凋亡细胞（PI⁻/Annexin V⁺）或RIP1非依赖细胞死亡群体的比例 [2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
三种小鼠 RIP1 突变体比野生型小鼠表现出更有效的 GSK481 对 Ser166 磷酸化的抑制 (IC50 = 18–110 nM)[1]。
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| 酶活实验 |
1. RIP1激酶活性实验：
- 将重组人类RIP1激酶（催化结构域）溶于激酶实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% BSA），终浓度为2 nM [1] - 向激酶溶液中加入系列浓度的GSK481（0.01–100 nM）或溶媒，随后加入荧光标记的RIP1特异性肽底物及ATP（终浓度10 μM，接近RIP1对ATP的Km值） [1] - 反应混合物在30°C孵育60分钟，加入含EDTA和荧光淬灭剂的终止缓冲液终止反应 [1] - 用酶标仪检测荧光强度（激发光340 nm，发射光460 nm），反映底物的磷酸化水平。计算相对于溶媒对照组的激酶活性抑制百分比，从剂量-反应曲线推导IC₅₀值 [1] 2. 表面等离子体共振（SPR）结合实验： - 通过胺偶联法将重组人类RIP1激酶（催化结构域）固定于CM5传感器芯片，表面密度约为1000共振单位（RU） [1] - 将系列浓度的GSK481（0.1–100 nM）溶于运行缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、3 mM EDTA、0.05%表面活性剂P20），以30 μL/min的流速流经芯片表面 [1] - 记录结合相和解离相曲线，将传感图拟合至1:1朗缪尔结合模型，计算解离常数（Ki） [1] |
| 细胞实验 |
1. 坏死性凋亡抑制细胞活力实验：
- 将L929小鼠成纤维细胞或HT-29人类结肠癌细胞以5×10³个/孔接种于384孔板，用含10%胎牛血清的DMEM培养基孵育过夜 [1] - 向孔中加入系列浓度的GSK481（0.001–100 nM），在37°C、5% CO₂条件下孵育1小时 [1] - 加入TNFα（10 ng/mL）、Smac模拟物（1 μM）和Z-VAD-fmk（20 μM）（泛caspase抑制剂，阻断凋亡）的混合诱导剂诱导坏死性凋亡，细胞继续孵育24小时 [1] - 采用发光细胞活力检测试剂盒测定细胞活力，计算相对于未处理对照组的活细胞百分比，从剂量-反应曲线确定IC₅₀值 [1] 2. RIP1信号通路Western blot分析： - 将L929细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，孵育过夜。用GSK481（10 nM）或溶媒预处理细胞1小时，随后用TNFα（10 ng/mL）+ Smac模拟物（1 μM）+ Z-VAD-fmk（20 μM）刺激 [1] - 刺激6小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIP1裂解液裂解细胞，取等量蛋白（每泳道20 μg）进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜，加入抗磷酸化RIP1（Ser166）、总RIP1、磷酸化RIP3、caspase-3及β-肌动蛋白（内参）一抗 [1] - 加入HRP标记二抗，化学发光显影蛋白条带，密度测定法定量条带强度 [1] 3. 细胞死亡通路流式细胞术分析： - 将L929细胞接种于12孔板，孵育过夜。用GSK481（1 μM）或溶媒预处理1小时，随后用TNFα（10 ng/mL）+ Smac模拟物（1 μM）+ Z-VAD-fmk（20 μM）诱导16小时 [2] - 收集细胞，用冰冷PBS洗涤，在避光条件下于4°C用Annexin V-FITC、PI及RIP1磷酸化特异性抗体（Alexa Fluor 647标记）染色30分钟 [2] - 进行流式细胞术分析，同时定量坏死性凋亡细胞（Annexin V⁻/PI⁺/磷酸化RIP1⁺）、凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻）及RIP1依赖凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁺/磷酸化RIP1⁺） [2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：浓度高达 10 μM 的 GSK481 对 L929 或 HT-29 细胞（未经坏死性凋亡诱导剂处理）无固有细胞毒性，与溶剂对照组相比，细胞存活率 >95% [1]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. GSK481 是一种高效且单选择性的 RIP1 激酶小分子抑制剂，通过 DNA 编码文库 (DEL) 筛选发现。它属于苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4-酮类化合物[1]。2. 作用机制：GSK481 能以高亲和力与 RIP1 激酶的 ATP 结合口袋结合，从而抑制其催化活性。这可以阻断坏死体（RIP1-RIP3复合物）的形成以及随后MLKL的磷酸化，从而抑制RIP1介导的坏死性凋亡（程序性坏死）[1]
3. 选择性特征：它对RIP1激酶表现出极高的单选择性，在浓度高达10 μM时，对超过400种测试的激酶（包括RIP3、MLK3、JNK1、p38α和其他丝氨酸/苏氨酸激酶）没有显著抑制作用，最大限度地减少了脱靶效应[1] 4. 研究应用：GSK481被广泛用作研究RIP1介导的坏死性凋亡在各种病理过程（例如炎症、神经退行性疾病、癌症）中的作用以及验证RIP1作为治疗靶点的工具化合物。它还被用于开发流式细胞术方法，以同时检测多种细胞死亡途径[1,2] 5. 化学性质：GSK481的化学结构经过优化，具有高RIP1亲和力和选择性，分子量为369.4 g/mol（基于苯并[b][1,4]氧氮杂卓-4-酮骨架）[1] |
| 分子式 |
C21H19N3O4
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|---|---|
| 分子量 |
377.393265008926
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| 精确质量 |
377.137
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| 元素分析 |
C, 66.83; H, 5.07; N, 11.13; O, 16.96
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| CAS号 |
1622849-58-4
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| 相关CAS号 |
1622849-58-4
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| PubChem CID |
90351311
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| 外观&性状 |
Light brown to brown solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
677.0±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
363.2±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.653
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| LogP |
2.06
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| tPSA |
84.67
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
566
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
O1C(CC2=CC=CC=C2)=CC(C(N[C@@H]2C(=O)N(C)C3=CC=CC=C3OC2)=O)=N1
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| InChi Key |
KNOUWGGQMADIBV-KRWDZBQOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H19N3O4/c1-24-18-9-5-6-10-19(18)27-13-17(21(24)26)22-20(25)16-12-15(28-23-16)11-14-7-3-2-4-8-14/h2-10,12,17H,11,13H2,1H3,(H,22,25)/t17-/m0/s1
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| 化学名 |
5-benzyl-N-[(3S)-5-methyl-4-oxo-2,3-dihydro-1,5-benzoxazepin-3-yl]-1,2-oxazole-3-carboxamide
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| 别名 |
GSK481; GSK 481; GSK-481
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 35~75 mg/mL (92.7~198.7 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.62 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.62 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6498 mL | 13.2489 mL | 26.4978 mL | |
| 5 mM | 0.5300 mL | 2.6498 mL | 5.2996 mL | |
| 10 mM | 0.2650 mL | 1.3249 mL | 2.6498 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RIPK1 ligand-Linker Conjugate-1
RIPK1-ligand-2
RIPK1-IN-34
RIPK1-IN-35
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
