| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
RIPK1/receptor-interacting serine/threonine protein kinase 1
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
GSK'547 (RIP1i) 体外治疗可引导骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 向免疫原性表型编程，上调 MHC-II、TNFa 和 IFNg，同时减少 CD206、IL-10 和 TGFb 表达。此外，BMDM 中 STAT1 信号传导被 RIP1i 上调，这与 M1 编程有关，但 STAT3、STAT5 和 STAT6 信号传导被下调，这与 M2 样巨噬细胞分化有关。经过RIP1i处理的巨噬细胞捕获抗原的能力也得到提高[1]。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠饲料中施用 GSK'547 (RIP1i) 会在 24 小时内产生超过 L929 IC90 的体内稳态浓度。在 6 周的治疗方案过程中，RIP1i 的血清浓度得以维持。由于没有明显的病理改变，RIP1i 疗法的耐受性良好。与接受对照或 Nec-1 治疗的小鼠相比，接受 RIP1i 治疗的小鼠在暴露于来自 KPC 小鼠的原位 PDA（胰腺导管腺癌）肿瘤细胞后，肿瘤负荷更小，存活时间更长。除了新肿瘤之外，RIP1i 还可以预防肝转移[1]。
|
| 酶活实验 |
荧光极化（FP）结合试验[1]
我们使用了一种基于fp的结合试验，通过与荧光标记的atp竞争配体竞争，量化RIP1i与RIP1的atp结合口袋之间的相互作用（Berger等，2015）。简而言之，纯化的gst标记RIP1（1-375）在最终检测浓度为200 nM时使用。荧光标记配体（14-（2-{[3-{2-[4-（氰乙基）苯基]氨基}-6-[（5-环丙基- 1h -吡唑-3-基）氨基]-4-嘧啶基]氨基}-2-氧乙基）-16,16,18,18-四甲基-6,7,7a,8a,9,10,16,18-八羟基苯并[2 ',3 ']吲哚齐诺[8 ',7 ':5 ',6 ']吡喃[3 ',2 ':3,4]吡喃[1,2- A]吲哚-5- -2-磺酸盐），最终测定浓度为5 nM。样品在Analyst多模式读取器上读取，抑制率表示为内部分析对照的抑制率百分比。 激酶选择性和细胞活力测定[1] 激酶选择性测定按照我们之前的描述进行（Berger等，2015）。根据制造商的方案，使用p33放射性标记法检测RIP1i （10 μM）对371种激酶的抑制作用。反应在10 μM ATP存在下进行。数据报告为相对于DMSO对照的酶活性%。体外利用L929细胞检测RIP1抑制剂的疗效。用重组TNFα (100 ng/ml)在caspase抑制剂QVD-Oph (25 μM；微孔σ)。为了评估RIP1抑制的效果，用不同剂量的RIP1i预处理细胞30分钟。24小时后，根据制造商的方案，使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定法测量细胞ATP水平，以评估诱导的细胞死亡。 |
| 细胞实验 |
用不同剂量的细胞预处理RIP1i 30分钟。24小时后，用细胞ATP水平评估诱导的细胞死亡。
T细胞增殖试验[1] 对于基于抗体的T细胞增殖试验，如我们之前所述，在96孔板中使用CD3/CD28共连接激活脾脏CD3+ T细胞（Daley等，2016）。在选定的孔中，以1:5的巨噬细胞：T细胞比例加入tam。对于抗原限制性T细胞刺激试验，分别用Ova257-264或Ova323-339肽以5:1的比例脉冲巨噬细胞培养脾脏OT-I或OT-II T细胞。或者，巨噬细胞加载卵白蛋白（1mg /ml， 60分钟）。在选定的孔中加入中和性抗tnf α单抗（10 μg/ml, MP6-XT22）或同型对照。72hr时用流式细胞术检测T细胞活化情况。 |
| 动物实验 |
C57BL/6, OT-I, OT-II, Stat1tm1Dlv, Rag1tm1Mom, and Foxn1nu mice were bred in-house. Ripk3−/− mice were obtained from Genentech. RIP1 KD/KI mice were generated by homologous recombination using a targeting construct that mutated the catalytic lysine residue to alanine (K45A) to eliminate all kinase activity, as we previously described (Kaiser et al., 2014). C57BL/6 mice were used for pharmacokinetic experiments. All mice were housed under pathogen-free conditions. KC mice develop slowly progressive pancreatic neoplasia endogenously by expressing mutant Kras in the progenitor cells of the pancreas (Hingorani et al., 2003). We previously detailed tumor progression and survival in control KC mice (Daley et al., 2016). Pancreatic ductal epithelial cells were harvested from KC mice and cultured in vitro as we previously described (Seifert et al., 2016a). Both male and female mice were used, but animals were age-matched within each experiment. Mice were fed either control chow or RIP1i (~100 mg/kg/day) via food-based dosing. For orthotopic pancreatic tumor challenge, 8-10 week old mice were administered intra-pancreatic injections of FC1242 PDA cells derived from KPC mice, as previously described (Zambirinis et al., 2015). Cells were suspended in PBS with 50% Matrigel and 1x105 tumor cells were injected into the body of the pancreas via laparotomy. Mice were sacrificed 3 weeks later and tumors harvested for analyses.[1]
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GSK547 (GSK'547) is a highly selective and potent inhibitor of receptor-interacting serine/threonine protein kinase 1 (RIPK1), inhibits macrophage-mediated adaptive immune tolerance in pancreatic cancer.
|
| 分子式 |
C20H18F2N6O
|
|---|---|
| 分子量 |
396.3933
|
| 精确质量 |
396.15
|
| 元素分析 |
C, 60.60; H, 4.58; F, 9.59; N, 21.20; O, 4.04
|
| CAS号 |
2226735-55-1
|
| 相关CAS号 |
(Rac)-GSK547
|
| PubChem CID |
134521814
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
1.9
|
| tPSA |
85.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
663
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
C1CN(CCC1C(=O)N2[C@@H](CC=N2)C3=CC(=CC(=C3)F)F)C4=NC=NC(=C4)C#N
|
| InChi Key |
SJVGFKBLUYAEOK-SFHVURJKSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H18F2N6O/c21-15-7-14(8-16(22)9-15)18-1-4-26-28(18)20(29)13-2-5-27(6-3-13)19-10-17(11-23)24-12-25-19/h4,7-10,12-13,18H,1-3,5-6H2/t18-/m0/s1
|
| 化学名 |
6-[4-[(3S)-3-(3,5-difluorophenyl)-3,4-dihydropyrazole-2-carbonyl]piperidin-1-yl]pyrimidine-4-carbonitrile
|
| 别名 |
GSK'547; GSK-547; GSK 547; GSK547; 2226735-55-1; CHEMBL4514271; (S)-6-(4-(5-(3,5-difluorophenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazole-1-carbonyl)piperidin-1-yl)pyrimidine-4-carbonitrile; 6-[4-[(3S)-3-(3,5-difluorophenyl)-3,4-dihydropyrazole-2-carbonyl]piperidin-1-yl]pyrimidine-4-carbonitrile; RIP1 inhibitor； RIP1i
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 29~250 mg/mL (73.2~630.69 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.31 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: (饱和度未知) in (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5228 mL | 12.6138 mL | 25.2277 mL | |
| 5 mM | 0.5046 mL | 2.5228 mL | 5.0455 mL | |
| 10 mM | 0.2523 mL | 1.2614 mL | 2.5228 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RIPK1-IN-28
RIP3 activator 1
LD4172
CSLP37
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号