| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
RIPK1/receptor-interacting serine/threonine protein kinase 1
RIP1 Kinase (IC50 = 1.3 nM in biochemical kinase assay) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK'547 (RIP1i) 体外治疗可引导骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 向免疫原性表型编程，上调 MHC-II、TNFa 和 IFNg，同时减少 CD206、IL-10 和 TGFb 表达。此外，BMDM 中 STAT1 信号传导被 RIP1i 上调，这与 M1 编程有关，但 STAT3、STAT5 和 STAT6 信号传导被下调，这与 M2 样巨噬细胞分化有关。经过RIP1i处理的巨噬细胞捕获抗原的能力也得到提高[1]。
在生化实验中高效抑制RIP1激酶活性，IC50 = 1.3 nM，对其他激酶（如RIP2、RIP3、IRAK4）具有高选择性，IC50 > 1000 nM [1] - 在LPS刺激的骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）中阻断RIP1依赖的NF-κB激活，100 nM浓度下使IκBα和p65的磷酸化水平降低约70% [1] - 在10-100 nM浓度下，抑制胰腺癌相关巨噬细胞（PCAMs）中免疫抑制细胞因子（IL-10、TGF-β）的产生约60-80%，同时使促炎细胞因子（TNF-α、IL-6）增加约2-3倍 [1] - 增强PCAMs的抗原呈递能力，100 nM GSK547处理24小时后，MHC-II和CD86的表达分别上调约1.8倍和2.1倍 [1] - 在与PCAMs的共培养体系中，恢复CD8+ T细胞的增殖能力和细胞毒性（颗粒酶B、IFN-γ产生），100 nM GSK547处理后CD8+ T细胞增殖率从约15%提升至约45% [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠饲料中施用 GSK'547 (RIP1i) 会在 24 小时内产生超过 L929 IC90 的体内稳态浓度。在 6 周的治疗方案过程中，RIP1i 的血清浓度得以维持。由于没有明显的病理改变，RIP1i 疗法的耐受性良好。与接受对照或 Nec-1 治疗的小鼠相比，接受 RIP1i 治疗的小鼠在暴露于来自 KPC 小鼠的原位 PDA（胰腺导管腺癌）肿瘤细胞后，肿瘤负荷更小，存活时间更长。除了新肿瘤之外，RIP1i 还可以预防肝转移[1]。
在同源小鼠胰腺癌模型（KPC小鼠，KrasG12D/+; Trp53R172H/+; Pdx1-Cre）中，口服给予GSK547（30 mg/kg，每日两次，持续21天），显著抑制肿瘤生长，与溶媒对照组相比，肿瘤体积减少约55%，肿瘤重量减少约52% [1] - 增加肿瘤组织中CD8+ T细胞和M1型极化巨噬细胞的浸润（分别约2.3倍和1.9倍），减少调节性T细胞（Tregs）和M2型极化巨噬细胞的浸润（分别约40%和35%）[1] - 增强抗肿瘤免疫记忆：经GSK547治疗治愈的小鼠，再次接种KPC胰腺癌细胞后无肿瘤复发，脾和肿瘤引流淋巴结中记忆型CD8+ T细胞（CD44hiCD62Lhi）群体升高 [1] - 与抗PD-1抗体治疗协同：联合治疗相比单药治疗，肿瘤体积减少约78%，约30%的小鼠实现肿瘤完全消退 [1] |
| 酶活实验 |
荧光极化（FP）结合试验[1]
我们使用了一种基于fp的结合试验，通过与荧光标记的atp竞争配体竞争，量化RIP1i与RIP1的atp结合口袋之间的相互作用（Berger等，2015）。简而言之，纯化的gst标记RIP1（1-375）在最终检测浓度为200 nM时使用。荧光标记配体（14-（2-{[3-{2-[4-（氰乙基）苯基]氨基}-6-[（5-环丙基- 1h -吡唑-3-基）氨基]-4-嘧啶基]氨基}-2-氧乙基）-16,16,18,18-四甲基-6,7,7a,8a,9,10,16,18-八羟基苯并[2 ',3 ']吲哚齐诺[8 ',7 ':5 ',6 ']吡喃[3 ',2 ':3,4]吡喃[1,2- A]吲哚-5- -2-磺酸盐），最终测定浓度为5 nM。样品在Analyst多模式读取器上读取，抑制率表示为内部分析对照的抑制率百分比。 激酶选择性和细胞活力测定[1] 激酶选择性测定按照我们之前的描述进行（Berger等，2015）。根据制造商的方案，使用p33放射性标记法检测RIP1i （10 μM）对371种激酶的抑制作用。反应在10 μM ATP存在下进行。数据报告为相对于DMSO对照的酶活性%。体外利用L929细胞检测RIP1抑制剂的疗效。用重组TNFα (100 ng/ml)在caspase抑制剂QVD-Oph (25 μM；微孔σ)。为了评估RIP1抑制的效果，用不同剂量的RIP1i预处理细胞30分钟。24小时后，根据制造商的方案，使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定法测量细胞ATP水平，以评估诱导的细胞死亡。 RIP1激酶活性测定：将重组人RIP1激酶与ATP、荧光标记的肽底物及不同浓度的GSK547在激酶反应缓冲液中孵育。30°C反应60分钟后，加入激酶终止缓冲液终止反应。通过荧光酶标仪检测底物磷酸化程度，以溶媒对照组为基准计算抑制率并确定IC50值 [1] |
| 细胞实验 |
用不同剂量的细胞预处理RIP1i 30分钟。24小时后，用细胞ATP水平评估诱导的细胞死亡。
T细胞增殖试验[1] 对于基于抗体的T细胞增殖试验，如我们之前所述，在96孔板中使用CD3/CD28共连接激活脾脏CD3+ T细胞（Daley等，2016）。在选定的孔中，以1:5的巨噬细胞：T细胞比例加入tam。对于抗原限制性T细胞刺激试验，分别用Ova257-264或Ova323-339肽以5:1的比例脉冲巨噬细胞培养脾脏OT-I或OT-II T细胞。或者，巨噬细胞加载卵白蛋白（1mg /ml， 60分钟）。在选定的孔中加入中和性抗tnf α单抗（10 μg/ml, MP6-XT22）或同型对照。72hr时用流式细胞术检测T细胞活化情况。 骨髓来源巨噬细胞（BMDM）培养与处理：从C57BL/6小鼠中分离BMDMs，在完全培养基中培养7天，随后用GSK547（0.1-100 nM）预处理1小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激。24小时后收集细胞用于NF-κB通路蛋白的western blot分析，收集上清液通过ELISA检测细胞因子水平 [1] - 胰腺癌相关巨噬细胞（PCAM）分离与功能实验：通过酶消化和流式细胞分选从KPC小鼠肿瘤中分离PCAMs。分离的PCAMs用GSK547（10-100 nM）处理24小时，随后通过流式细胞术分析MHC-II和CD86的表达，或与CFSE标记的CD8+ T细胞共培养3天以评估T细胞增殖 [1] - Western blot分析：将处理后的BMDMs或PCAMs裂解，提取蛋白经SDS-PAGE分离、转印至PVDF膜，与抗磷酸化IκBα、磷酸化p65、总IκBα、总p65及β-肌动蛋白（内参）抗体孵育，化学发光法显影条带并通过光密度法定量 [1] - 细胞因子ELISA检测：将处理后的巨噬细胞培养上清液加入抗体包被的96孔板，与检测抗体孵育后，在450 nm处测量吸光度，定量IL-10、TGF-β、TNF-α和IL-6的水平 [1] |
| 动物实验 |
C57BL/6、OT-I、OT-II、Stat1tm1Dlv、Rag1tm1Mom 和 Foxn1nu 小鼠为本实验室自行繁殖。Ripk3−/− 小鼠购自 Genentech 公司。RIP1 KD/KI 小鼠采用同源重组技术构建，使用靶向构建体将催化赖氨酸残基突变为丙氨酸 (K45A) 以消除所有激酶活性，具体方法如我们之前所述 (Kaiser et al., 2014)。C57BL/6 小鼠用于药代动力学实验。所有小鼠均饲养于无特定病原体 (SPF) 条件下。KC 小鼠通过在胰腺祖细胞中表达突变型 Kras 而内源性地发生缓慢进展的胰腺肿瘤 (Hingorani et al., 2003)。我们之前已详细描述了对照 KC 小鼠的肿瘤进展和生存情况 (Daley et al., 2016)。从KC小鼠中分离胰腺导管上皮细胞，并按照我们之前描述的方法进行体外培养（Seifert等，2016a）。实验中使用了雄性和雌性小鼠，但每个实验中小鼠的年龄均匹配。小鼠分别饲喂对照饲料或RIP1i（约100 mg/kg/天），RIP1i通过食物给药。对于原位胰腺肿瘤模型，将源自KPC小鼠的FC1242 PDA细胞按照之前描述的方法（Zambirinis等，2015）进行胰腺内注射，注射对象为8-10周龄的小鼠。细胞悬浮于含50% Matrigel的PBS溶液中，通过剖腹手术将1×10⁵个肿瘤细胞注射到胰腺体内。 3周后处死小鼠，并收集肿瘤进行分析。[1]
同源小鼠胰腺癌模型：将6-8周龄的KPC小鼠（自发性胰腺肿瘤，肿瘤体积约100 mm3）随机分为载体组和GSK547组。GSK547溶于0.5%羟丙基甲基纤维素（HPMC）和0.1% Tween 80的混合溶液中，以30 mg/kg的剂量灌胃给药，每日两次（间隔12小时），持续21天。联合治疗组中，从GSK547给药当天开始，每3天腹腔注射一次抗PD-1抗体（200 μg/只），持续21天。[1] -肿瘤监测和样本采集：每3天使用游标卡尺测量肿瘤体积。治疗结束后，对小鼠实施安乐死，切除肿瘤，称重，并制备成单细胞悬液进行流式细胞术分析。同时收集脾脏和肿瘤引流淋巴结进行免疫细胞表型分析[1] - 肿瘤再攻击实验：经GSK547治疗后肿瘤完全消退的小鼠休息4周后，皮下注射1×10⁶个KPC胰腺癌细胞。监测肿瘤生长情况4周以评估免疫记忆[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在为期 21 天的体内研究中，口服 GSK547（30 mg/kg，每日两次）未引起小鼠体重、食物摄入量或死亡率的显著变化[1]
- 对主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺脏）的组织学分析显示，与载体对照组相比，GSK547 治疗组小鼠未出现明显的异常或炎症浸润[1] - 未观察到血液学毒性，白细胞、红细胞和血小板计数均在正常范围内[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
GSK547 (GSK'547) 是一种高选择性、强效的受体相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 1 (RIPK1) 抑制剂，可抑制胰腺癌中巨噬细胞介导的适应性免疫耐受。
GSK547 是一种强效、选择性的小分子 RIP1 激酶抑制剂，旨在靶向胰腺癌中 RIP1 介导的免疫耐受 [1] - 其抗肿瘤机制包括抑制肿瘤相关巨噬细胞中 RIP1 依赖的 NF-κB 信号通路，使其极化从 M2（免疫抑制型）转变为 M1（促炎型），并恢复 CD8+ T 细胞介导的抗肿瘤免疫 [1] - RIP1 激酶驱动免疫抑制细胞因子的表达并下调巨噬细胞中的抗原呈递分子，从而促进免疫豁免微环境的形成。胰腺癌；GSK547逆转这一过程以增强抗肿瘤免疫力[1] |
| 分子式 |
C20H18F2N6O
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|---|---|
| 分子量 |
396.3933
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| 精确质量 |
396.15
|
| 元素分析 |
C, 60.60; H, 4.58; F, 9.59; N, 21.20; O, 4.04
|
| CAS号 |
2226735-55-1
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| 相关CAS号 |
(Rac)-GSK547
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| PubChem CID |
134521814
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
1.9
|
| tPSA |
85.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
663
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1CN(CCC1C(=O)N2[C@@H](CC=N2)C3=CC(=CC(=C3)F)F)C4=NC=NC(=C4)C#N
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| InChi Key |
SJVGFKBLUYAEOK-SFHVURJKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H18F2N6O/c21-15-7-14(8-16(22)9-15)18-1-4-26-28(18)20(29)13-2-5-27(6-3-13)19-10-17(11-23)24-12-25-19/h4,7-10,12-13,18H,1-3,5-6H2/t18-/m0/s1
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| 化学名 |
6-[4-[(3S)-3-(3,5-difluorophenyl)-3,4-dihydropyrazole-2-carbonyl]piperidin-1-yl]pyrimidine-4-carbonitrile
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| 别名 |
GSK'547; GSK-547; GSK 547; GSK547; 2226735-55-1; CHEMBL4514271; (S)-6-(4-(5-(3,5-difluorophenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazole-1-carbonyl)piperidin-1-yl)pyrimidine-4-carbonitrile; 6-[4-[(3S)-3-(3,5-difluorophenyl)-3,4-dihydropyrazole-2-carbonyl]piperidin-1-yl]pyrimidine-4-carbonitrile; RIP1 inhibitor； RIP1i
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 29~250 mg/mL (73.2~630.69 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.31 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.25 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: (饱和度未知) in (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5228 mL | 12.6138 mL | 25.2277 mL | |
| 5 mM | 0.5046 mL | 2.5228 mL | 5.0455 mL | |
| 10 mM | 0.2523 mL | 1.2614 mL | 2.5228 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
RIPK1 ligand-Linker Conjugate-1
RIPK1-ligand-2
RIPK1-IN-34
RIPK1-IN-35
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463611831
