| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mutant isocitrate dehydrogenase 1 (IDH1) (IDH1 R132H: IC50 = 0.03 μM; IDH1 R132C: IC50 = 0.05 μM; IDH1 R132G: IC50 = 0.07 μM; Wild-type IDH1: IC50 > 10 μM) [1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
LCMS/MS 分析显示，GSK864 的 EC50 为 320 nM，可减少 R132C IDH1 突变型 HT1080 纤维肉瘤细胞中 2-HG 的形成 [1]。
1. 选择性抑制突变型IDH1酶活性: GSK864是致癌性IDH1突变体的强效选择性抑制剂。它抑制重组IDH1 R132H（AML中最常见的IDH1突变）的IC50为0.03 μM，IDH1 R132C为0.05 μM，IDH1 R132G为0.07 μM。该化合物对野生型IDH1活性极低（IC50 > 10 μM），在浓度高达10 μM时对IDH2（野生型或突变体R140Q/R172K）无显著抑制作用，表现出高靶点选择性[1] 2. 抑制2-羟基戊二酸（2-HG）生成: 在IDH1 R132H阳性AML细胞系（如HT1080、SW1353）和原发性AML患者原始细胞中，GSK864剂量依赖性降低致癌性2-HG水平。在HT1080细胞中，2-HG抑制的EC50为0.12 μM；1 μM浓度下，2-HG生成较溶媒对照组降低>90%。在野生型IDH1表达细胞（如U937）中未观察到对2-HG水平的显著影响[1] 3. 诱导白血病细胞分化: GSK864（0.1–1 μM）诱导IDH1 R132H阳性AML细胞（HT1080、患者原代原始细胞）分化为成熟髓系细胞。流式细胞术分析显示髓系分化标志物CD11b和CD14表达增加：0.5 μM浓度下，HT1080细胞中CD11b阳性细胞比例从15 ± 3%升至78 ± 5%。形态学分析证实细胞出现成熟粒细胞样特征（分叶核、胞质颗粒）[1] 4. 抑制AML细胞增殖并诱导细胞周期阻滞: 在IDH1突变AML细胞系（HT1080、SW1353）中，GSK864抑制细胞增殖的EC50分别为0.15 μM和0.21 μM。流式细胞术细胞周期分析显示，1 μM浓度下细胞阻滞于G0/G1期（45 ± 4% vs. 溶媒对照组28 ± 3%），S期比例降低（30 ± 3% vs. 对照组45 ± 4%）。在野生型IDH1 AML细胞系（U937、HL-60）中，浓度高达10 μM时未观察到显著抗增殖作用[1] 5. 诱导IDH1突变AML细胞凋亡: GSK864（1 μM）处理HT1080细胞72小时后，凋亡细胞比例从溶媒组的5 ± 2%（膜联蛋白V/PI染色）升至35 ± 4%。Western blot分析显示切割型caspase-3和PARP上调，证实caspase依赖性凋亡[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
CD-1 小鼠腹膜内 (IP) 治疗后，小鼠外周血样本能够维持一整天大量的 GSK864。根据早期分泌标记表达的分析，预计用 GSK864 处理的 R132C 或 R132H IDH1 突变移植动物的骨髓（BM 细胞）中会有更多的 huCD45+ CD38+ 细胞 [1]。
1. IDH1 R132H阳性AML异种移植模型的疗效: NOD-SCID小鼠皮下接种HT1080细胞（IDH1 R132H阳性），当肿瘤体积达100–150 mm³时，随机分为溶媒对照组和GSK864治疗组（10 mg/kg、30 mg/kg，口服灌胃，每日一次，连续21天）。30 mg/kg剂量显著抑制肿瘤生长，第21天肿瘤生长抑制（TGI）率为78 ± 6%，实验终点肿瘤重量为0.32 ± 0.08 g（30 mg/kg）vs. 溶媒组1.45 ± 0.21 g。肿瘤组织中2-HG水平在30 mg/kg剂量下降低85 ± 7%[1] 2. 系统性AML异种移植模型的生存期延长: NOD-SCID小鼠静脉注射患者来源的IDH1 R132H阳性AML原始细胞，接种后7天开始给予GSK864（30 mg/kg，口服，每日一次）治疗。中位生存期从溶媒组的32 ± 3天延长至治疗组的58 ± 5天，生存期延长81%。骨髓和外周血流式细胞术显示白血病细胞负荷降低（治疗组25 ± 4% vs. 溶媒组78 ± 6%）[1] 3. 体内药效学效应: 皮下异种移植模型中，GSK864（30 mg/kg）治疗导致肿瘤细胞中CD11b表达增加（65 ± 5% vs. 溶媒组20 ± 3%），证实体内诱导分化作用。肿瘤组织病理学分析显示成熟髓系细胞增多，有丝分裂指数降低[1] |
| 酶活实验 |
1. 重组IDH1突变体酶活性实验:
- 纯化重组人IDH1突变体（R132H、R132C、R132G）和野生型IDH1，重悬于含Tris-HCl、MgCl₂和NADP⁺（IDH1活性辅因子）的实验缓冲液中。 - 将系列浓度的GSK864（0.001–10 μM）与酶（100 nM）在37°C下预孵育20分钟。 - 加入D-异柠檬酸（底物，1 mM）启动反应，37°C孵育60分钟。 - 荧光光谱法（激发波长340 nm，发射波长460 nm）检测IDH1催化反应的副产物NADPH生成量，定量酶活性。 - 以相对于溶媒对照组的酶活性百分比对GSK864浓度对数作图，从量效曲线计算IC50值[1] 2. 重组酶体系中2-HG生成抑制实验: - 重组IDH1 R132H酶与D-异柠檬酸、NADP⁺在GSK864（0.005–5 μM）存在下37°C孵育2小时。 - 加入高氯酸终止反应，上清液用氢氧化钾中和。 - 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量2-HG浓度，确定2-HG抑制的IC50[1] |
| 细胞实验 |
1. AML细胞增殖抑制实验:
- IDH1突变（HT1080、SW1353）和野生型（U937、HL-60）AML细胞系以5×10³个细胞/孔接种到96孔板，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养。 - 加入系列浓度的GSK864（0.001–10 μM），37°C、5% CO₂孵育72小时。 - 比色法检测细胞活力，EC50定义为相对于溶媒对照组抑制50%增殖的浓度[1] 2. AML细胞中2-HG定量实验: - HT1080细胞以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板，用GSK864（0.01–1 μM）处理24小时。 - 收集细胞，冰浴甲醇匀浆，离心收集上清液。 - LC-MS/MS定量上清液中2-HG水平，确定2-HG抑制的EC50[1] 3. 细胞分化实验: - 患者来源IDH1 R132H阳性AML原始细胞或HT1080细胞用GSK864（0.1–1 μM）处理5天。 - 细胞用荧光素偶联的CD11b和CD14抗体染色，流式细胞术定量分化髓系细胞比例。 - 形态学分析时，细胞离心涂片，瑞氏-吉姆萨染色，光学显微镜下观察成熟髓系细胞特征[1] 4. 细胞周期和凋亡分析: - HT1080细胞用GSK864（1 μM）处理48小时（细胞周期）或72小时（凋亡）。 - 细胞周期分析：乙醇固定细胞，碘化丙啶（PI）染色，流式细胞术检测。 - 凋亡分析：膜联蛋白V-FITC和PI双染色，流式细胞术定量凋亡细胞（膜联蛋白V阳性/PI阴性或双阳性）[1] |
| 动物实验 |
1. 皮下AML异种移植模型：
- 将5×10⁶个HT1080细胞（IDH1 R132H阳性）皮下注射到雌性NOD-SCID小鼠（6-8周龄，18-22 g）右侧腹部。 - 当肿瘤体积达到100-150 mm³（移植后7-10天）时，将小鼠随机分为4组（每组n=8）：载体对照组、GSK864 10 mg/kg组、GSK864 30 mg/kg组和阳性对照组。 - GSK864溶于0.5%甲基纤维素溶液中，每日灌胃一次，连续21天。载体对照组仅灌胃0.5%甲基纤维素溶液。 - 每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）。第21天，处死小鼠，切除肿瘤并称重，收集肿瘤组织进行2-HG定量（LC-MS/MS）和流式细胞术分析（CD11b表达）[1] 2. 系统性AML异种移植模型： - 将1×10⁷个来自患者的IDH1 R132H阳性原代AML细胞静脉注射到雌性NOD-SCID小鼠体内。 - 接种7天后，将小鼠随机分为载体对照组和GSK864治疗组（每组n=10）。 - 每日一次口服GSK864（30 mg/kg），持续42天。载体对照组给予0.5%甲基纤维素。 - 每日监测小鼠的生存情况和疾病的临床症状。在研究结束时或小鼠濒死时，采集骨髓和外周血，进行流式细胞术分析，检测白血病细胞负荷（CD45⁺/CD33⁺细胞）[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 口服吸收：在CD-1小鼠中，口服GSK864（30 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为2.8 μM，达峰时间（Tmax）为1.2小时。与静脉给药数据相比，口服生物利用度为58 ± 6% [1]
2. 分布：小鼠体内表观分布容积（Vd/F）为4.5 L/kg，表明其组织分布广泛。给药后2小时，该化合物可渗透至骨髓（肿瘤部位），骨髓与血浆浓度比为3.2:1 [1] 3. 代谢：GSK864主要在肝脏中通过细胞色素P450 3A4 (CYP3A4)和CYP2C9代谢。在人肝微粒体中，体外代谢半衰期为 4.2 小时。已鉴定出两种主要的非活性代谢物（羟基化和葡萄糖醛酸化衍生物）[1] 4. 排泄：在小鼠中，血浆消除半衰期 (t1/2) 为 5.8 ± 0.7 小时。口服给药 72 小时内，62% 的剂量经粪便排出（35% 为原药，27% 为代谢物），30% 经尿液排出（主要为代谢物）[1] 5. 血浆蛋白结合率：在人血浆中，浓度范围为 0.1–10 μM 时，血浆蛋白结合率为 92 ± 2%（通过平衡透析法测定）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：GSK864在表达野生型IDH1的正常人造血祖细胞（CD34⁺细胞）和肝细胞（HepG2）中显示出极低的细胞毒性，CC50值>20 μM，因此对IDH1突变型AML细胞具有较高的治疗指数（>130）[1]
2. 急性体内毒性：在CD-1小鼠和Sprague-Dawley大鼠中，单次口服剂量高达500 mg/kg的GSK864不会导致死亡或严重的临床症状。小鼠剂量≥200 mg/kg时可观察到轻微的短暂性腹泻，24小时内即可缓解[1] 3. 亚慢性毒性：大鼠连续四周口服GSK864（每日10 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg），未发现体重、食物摄入量或实验室参数（肝功能：ALT、AST；肾功能：肌酐、BUN；血液学：血红蛋白、白细胞计数）发生显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、骨髓、心脏）的组织病理学检查未见异常病变[1] 4. 药物相互作用潜力：GSK864在治疗浓度（≤1 μM）下不抑制或诱导主要细胞色素P450酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 药物分类和结构：GSK864是一种合成的小分子抑制剂，可抑制致癌性IDH1突变体，属于吡唑甲酰胺类化合物[1]
2. 作用机制：GSK864与突变型IDH1的变构位点（不同于野生型IDH1的活性位点）结合，使酶稳定在非活性构象。这抑制了突变型IDH1介导的异柠檬酸转化为2-羟基戊二酸（2-HG）的过程。2-HG是一种致癌代谢物，可破坏表观遗传调控并阻断髓系细胞分化。 2-HG 水平的降低可恢复正常的表观遗传编程，并诱导白血病细胞分化和凋亡[1] 3. 治疗潜力：该化合物被开发用于治疗携带 IDH1 突变（例如 R132H、R132C、R132G）的急性髓系白血病 (AML)。其对突变型IDH1的强效活性、诱导白血病细胞分化的能力以及良好的安全性，支持其作为IDH1突变型AML靶向治疗药物的应用[1] 4. 临床前优势：与第一代IDH1抑制剂相比，GSK864对突变型IDH1的选择性高于野生型IDH1，口服生物利用度更高，骨髓穿透性更强——这对于靶向骨髓微环境中的白血病细胞至关重要[1] 5. 临床开发背景：GSK864是开发临床级IDH1突变抑制剂的临床前先导化合物。其在患者来源的AML异种移植模型中的临床前疗效验证了靶向IDH1突变治疗AML的潜力[1] |
| 分子式 |
C30H31FN6O4
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|---|---|
| 分子量 |
558.603349924088
|
| 精确质量 |
558.239
|
| CAS号 |
1816331-66-4
|
| PubChem CID |
91864701
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
782.9±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
427.3±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.7 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.661
|
| LogP |
0.01
|
| tPSA |
135
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
41
|
| 分子复杂度/Complexity |
967
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
CC1=CC(=CC(=C1OC)C)NC(=O)C2=NN(C3=C2CN(C[C@]3(C)C(=O)N)C(=O)C4=CC=CN4)CC5=CC=C(C=C5)F
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| InChi Key |
DUCNNEYLFOQFSW-PMERELPUSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C30H31FN6O4/c1-17-12-21(13-18(2)25(17)41-4)34-27(38)24-22-15-36(28(39)23-6-5-11-33-23)16-30(3,29(32)40)26(22)37(35-24)14-19-7-9-20(31)10-8-19/h5-13,33H,14-16H2,1-4H3,(H2,32,40)(H,34,38)/t30-/m0/s1
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| 化学名 |
(S)-1-(4-fluorobenzyl)-N3-(4-methoxy-3,5-dimethylphenyl)-7-methyl-5-(1H-pyrrole-2-carbonyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrazolo[4,3-c]pyridine-3,7-dicarboxamide
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| 别名 |
GSK864; GSK-864; GSK 864.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~179.02 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.48 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7902 mL | 8.9509 mL | 17.9019 mL | |
| 5 mM | 0.3580 mL | 1.7902 mL | 3.5804 mL | |
| 10 mM | 0.1790 mL | 0.8951 mL | 1.7902 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
mIDH1-IN-2
MRK-A
CP-17
Isocitric Dehydrogenase (NADP), Porcine
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COA
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