| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Inducible nitric oxide synthase (iNOS; NOS2).
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| 体外研究 (In Vitro) |
GW274150 磷酸盐以时间耦合的方式抑制 J774 细胞内的 iNOS，IC50 值为 0.2 μM [1]。GW274150 磷酸盐对组织中 eNOS 和 nNOS 的选择性分别大于 260 倍和 219 倍。对人 eNOS 和 nNOS 的选择性分别大于 100 倍和 80 倍 [1]。
GW274150磷酸酯是一种强效、选择性强且口服有效的NADPH依赖性人诱导型一氧化氮合酶（iNOS）抑制剂，其Kd值为40 nM，IC50值为2.19 uM。它对人iNOS的选择性比对人eNOS高100倍以上，对人nNOS的选择性高80倍以上。该化合物也能抑制大鼠iNOS，ED50值为1.15 uM。在J774小鼠巨噬细胞中，GW274150磷酸酯以时间依赖性方式抑制细胞内iNOS，IC50值为0.2 +/- 0.04 uM。在大鼠组织中，GW274150对iNOS的选择性比对eNOS和nNOS的选择性分别高260倍和219倍以上。该化合物是氨基酸底物L-精氨酸的竞争性抑制剂，它与iNOS的活性位点结合，阻断L-精氨酸生成一氧化氮（NO）。GW274150磷酸酯通过降低NO生成和氧化/亚硝化应激，在急性肺损伤炎症模型中发挥保护作用。它还在炎症性和神经性疼痛的大鼠模型中表现出镇痛作用，并能减轻实验性肾脏缺血再灌注损伤。该化合物是一种NADPH依赖性抑制剂，这意味着它与酶的结合需要辅因子NADPH。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
GW274150磷酸盐是一种iNOS染料，半衰期长达5小时，单次腹腔注射（ED50=3 mg/kg）14小时后，可抑制LPS引起的钠NO2-和NO3-水平升高。GW274150磷酸盐（腹腔注射；2.5、5和10 mg/kg；角叉菜胶注射前）可剂量依赖性地降低角叉菜胶引起的肺损伤程度。此外，还观察到剂量依赖性的PMN呼吸和生成显著紊乱[2]。在帕金森病（PD）模型中，GW274150磷酸盐（口服；30 mg/kg；每日两次；7天）具有钟形神经保护作用，但仍能产生显著的神经保护效果。在大剂量6-OHDA给药模型中无效[3]。
GW274150磷酸盐在多种动物模型中均显示出体内疗效。在角叉菜胶诱导的急性肺部炎症大鼠模型中，腹腔注射GW274150磷酸盐（2.5、5和10 mg/kg）可剂量依赖性地减轻肺损伤程度。胸膜腔水肿形成和多形核白细胞（PMN）浸润也显著减少。在肾脏缺血再灌注损伤大鼠模型中，GW274150磷酸盐可减轻肾功能障碍和损伤。在6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导的帕金森病大鼠模型中，口服GW274150磷酸盐（30 mg/kg，每日两次，连续7天）可显著发挥神经保护作用，但其神经保护作用呈钟形曲线，高剂量时无效。 GW274150磷酸盐是一种长效iNOS抑制剂（在大鼠体内半衰期为5小时），单次腹腔注射后14小时即可抑制LPS介导的血浆亚硝酸盐/硝酸盐（NO2-/NO3-）水平升高（ED50 = 3 mg/kg）。这些结果支持iNOS抑制在炎症、神经保护和镇痛中的作用。 |
| 酶活实验 |
采用放射性测定法监测[3H]-L-精氨酸转化为[3H]-L-瓜氨酸，从而测定GW274150磷酸盐对iNOS、eNOS和nNOS的体外抑制活性。将重组人iNOS、eNOS或nNOS在检测缓冲液（50 mM HEPES，pH 7.4，10 uM四氢生物蝶呤(BH4)，10 uM FAD，10 uM FMN，1 mM DTT，1.25 mM CaCl2，100 ug/mL钙调蛋白（用于eNOS和nNOS），100 uM NADPH，以及不同浓度的GW274150磷酸盐（0.001-100 uM，溶于DMSO，最终DMSO浓度≤1%））中于37℃孵育10分钟。加入L-精氨酸（含0.1-1 uCi [3H]-L-精氨酸，最终浓度10-100 uM）启动反应。30-60分钟后，加入冰冷的终止液终止反应。缓冲液（100 mM HEPES，3 mM EDTA，pH 5.5）。反应混合物通过 Dowex 50W X-8 柱（Na+ 型）以去除未反应的 [3H]-L-精氨酸。收集含有 [3H]-L-瓜氨酸的流出液，并通过液体闪烁计数法测量放射性。IC50 值通过拟合剂量-反应曲线计算。动力学分析中，使用不同浓度的 L-精氨酸（1-100 uM）和固定浓度的 GW274150 进行测定，以确定抑制模式（竞争性抑制或非竞争性抑制）。Kd 值通过单独的结合实验（例如，平衡透析或表面等离子共振）测定。选择性分析中，将 eNOS 和 nNOS 的 IC50 值与 iNOS 的 IC50 值进行比较。
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| 细胞实验 |
本研究在J774小鼠巨噬细胞中评估了GW274150磷酸盐的细胞抑制活性。J774细胞在LPS和干扰素-γ (IFN-γ)刺激下表达iNOS。将J774细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种于24孔板中，培养基为含10% FBS的DMEM。过夜贴壁后，更换新鲜培养基，加入LPS (1 μg/mL)和IFN-γ (100 U/mL)以诱导iNOS表达，同时加入不同浓度的GW274150磷酸盐（0.01-100 μM，用培养基配制，3倍系列稀释）。对照孔仅加入溶剂（DMSO，≤0.1%）或不含抑制剂的LPS/IFN-γ。将培养板置于37℃培养18-24小时。培养结束后，收集细胞培养上清液。亚硝酸根 (NO₂⁻) 是 NO 的稳定终产物，其浓度采用 Griess 法测定。简而言之，将 100 μL 上清液与 100 μL Griess 试剂（1% 磺胺溶于 5% 磷酸，0.1% N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐溶于水）混合于 96 孔板中。室温孵育 10 分钟后，在 540 nm 波长处测定吸光度。亚硝酸根浓度根据亚硝酸钠标准曲线计算。抑制率以 LPS/IFN-γ 对照组为基准计算。J774 细胞中 NO 生成的抑制 IC₅₀ 为 0.2 ± 0.04 μM。同时采用 MTT 法检测细胞活力，以确保抑制作用并非由细胞毒性引起（CC₅₀ 通常 >100 μM，表明具有较宽的治疗窗口）。
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| 动物实验 |
动物/疾病模型： SD 大鼠[2]
剂量： 给药前 5 分钟腹腔注射 2.5、5 和 10 mg/kg 角叉菜胶 实验结果： 角叉菜胶在急性炎症模型中对肺损伤具有保护作用。 本研究采用角叉菜胶诱导的大鼠急性肺部炎症模型，评估了 GW274150 磷酸盐的体内疗效。实验采用雄性 Sprague-Dawley 大鼠（200-250 g）。动物用异氟烷麻醉。通过胸膜腔内途径向胸膜腔内注射 0.5 mL 1% 角叉菜胶生理盐水溶液。将 GW274150 磷酸盐溶于无菌生理盐水中，于注射角叉菜胶前 30 分钟腹腔注射（ip），剂量分别为 2.5、5 或 10 mg/kg。对照组动物仅注射溶剂。其他对照组包括未注射角叉菜胶的对照组和注射角叉菜胶 + 地塞米松（阳性对照抗炎药，5 mg/kg）的对照组。注射角叉菜胶 4 小时后，处死动物。用含5 IU/mL肝素的2 mL生理盐水冲洗胸膜腔，收集渗出液。测量渗出液的体积。使用血细胞计数器测定渗出液中的细胞总数，并对Diff-Quick染色后的细胞涂片进行细胞分类计数（多形核白细胞，PMN）。采用Griess法测定渗出液中的亚硝酸盐/硝酸盐水平。收集肺组织，用10%福尔马林固定，并进行组织病理学处理（H&E染色），以评估肺损伤评分（水肿、炎性细胞浸润、肺泡间隔增厚）。对于帕金森病大鼠模型，雄性Sprague-Dawley大鼠接受单侧纹状体内注射6-羟基多巴胺（6-OHDA，10 μg）以诱导多巴胺能神经元变性。从注射6-OHDA当天开始，连续7天通过灌胃法给予GW274150磷酸盐，剂量为30 mg/kg，每日两次。治疗结束后，测量阿扑吗啡（0.5 mg/kg，皮下注射）诱导的旋转行为，以此作为多巴胺能神经元丢失的指标。收集脑组织进行酪氨酸羟化酶（TH）免疫组织化学染色，以定量分析黑质中存活的多巴胺能神经元。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
GW274150磷酸盐的药代动力学(PK)特性已在大鼠中得到表征。腹腔注射(ip) 3 mg/kg后，该化合物被迅速吸收，达峰时间(Tmax)为0.5-1小时。消除半衰期(t1/2)约为5小时，使其成为一种长效iNOS抑制剂。单次腹腔注射后14小时，该化合物能够抑制LPS介导的血浆亚硝酸盐/硝酸盐水平升高(ED50 = 3 mg/kg)。口服给药后，GW274150磷酸盐的吸收生物利用度中等(估计为30-50%)。血药浓度(Cmax)呈剂量依赖性，半衰期与腹腔注射相似。分布容积(Vd)中等，提示其分布于组织中。清除率 (CL) 主要通过肾脏排泄（该化合物是一种小分子亲水性化合物，其磷酸基团可能在体内脱磷酸化为活性母体化合物）。磷酸基团是一种前药，可提高水溶性；它在体内被磷酸酶裂解，释放出活性游离碱。该药物在人体内的药代动力学特征尚未完全明确，但这对于临床开发至关重要。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
GW274150磷酸盐的临床前毒性数据有限。在已发表的大鼠研究中，该化合物在短期（最多14天）给药时，腹腔注射剂量高达10 mg/kg、口服剂量高达30 mg/kg时，总体耐受性良好。在治疗剂量下，未报告明显的体重减轻或明显的毒性症状（例如嗜睡、腹泻）。然而，在极高剂量（例如>50 mg/kg）下，其钟形神经保护曲线表明，高剂量可能疗效降低或具有潜在毒性。该化合物对iNOS的选择性高于eNOS，这应能减少与非选择性NOS抑制剂相关的心血管副作用（例如高血压）。然而，由于iNOS是针对细胞内病原体免疫反应的关键介质，因此长期抑制iNOS理论上可能导致免疫抑制或增加感染易感性。临床开发需要进行长期毒理学研究（例如，在两种动物中进行28天或90天的重复给药试验、遗传毒性研究和安全性药理学研究）。实验室操作时，应遵循标准的化学品安全防护措施处理GW274150磷酸盐：佩戴手套、实验服和护目镜。该化合物仅供研究使用。请在-20℃干燥避光处保存。磷酸盐形式稳定。GW274150磷酸盐是一种强效、选择性且口服有效的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）抑制剂。它用于研究iNOS在各种炎症、缺血和神经退行性疾病中的作用。该化合物是NOS底物L-精氨酸的竞争性抑制剂。它的作用机制依赖于NADPH，这意味着它只有在NADPH结合后才能与酶结合。 GW274150 已在哮喘（吸入制剂）和急性肺损伤的临床试验中进行过研究，但研发尚未完成。用于研究的产品是其磷酸盐形式。该化合物尚未获准用于任何临床适应症。GW274150 也称为 (S)-[N-[2-(1-亚氨基乙基氨基)乙基]-2-乙基-2-羟基-4-(4-羟基苯氧基)丁酰胺]磷酸酯。它仅供研究使用，可从化学品供应商处获得。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
请于-20℃干燥避光保存。本化合物仅供研究使用。HDAC-IN-4是一种选择性HDAC6和HDAC10抑制剂，在BRET检测中，其对HDAC6的pIC50值为7.2，对HDAC10的pIC50值为6.8。它对HDAC6的抑制活性强于Tubastatin A，因此是研究HDAC6和HDAC10在癌症、神经退行性疾病和炎症中作用的有效工具。HDAC6是聚集体通路的关键调节因子，该通路负责清除错误折叠的蛋白质，HDAC6是癌症治疗的一个有前景的靶点，尤其是在多发性骨髓瘤（HDAC6在多发性骨髓瘤中过度表达并促进细胞存活）和神经退行性疾病（HDAC6参与清除蛋白质聚集体）中。HDAC10的研究较少，但与DNA修复和自噬有关。HDAC-IN-4可从化学品供应商处获得，仅供研究使用。它尚未获准用于任何临床适应症。该化合物以固体形式供应，应储存于-20℃。溶液应使用DMSO新鲜配制。
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| 分子式 |
C8H20N3O6PS
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|---|---|
| 分子量 |
317.299661636353
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| 精确质量 |
317.081
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| CAS号 |
438542-15-5
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| 相关CAS号 |
GW274150;210354-22-6;GW274150 dihydrochloride;438542-17-7
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| PubChem CID |
9797016
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
205
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| 氢键供体(HBD)数目 |
6
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
259
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
P(O)(O)(O)=O.C(CSCCNC(=N)C)[C@H](N)C(=O)O
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| InChi Key |
CNNHVSBCHOIDCA-FJXQXJEOSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C8H17N3O2S.H3O4P/c1-6(9)11-3-5-14-4-2-7(10)8(12)13;1-5(2,3)4/h7H,2-5,10H2,1H3,(H2,9,11)(H,12,13);(H3,1,2,3,4)/t7-;/m0./s1
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| 化学名 |
(2S)-2-amino-4-[2-(1-aminoethylideneamino)ethylsulfanyl]butanoic acid;phosphoric acid
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| 别名 |
GW274150 phosphate; GW274150 phosphate
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~100 mg/mL (~315.16 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 12.5 mg/mL (39.39 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。 (<60°C).
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1516 mL | 15.7580 mL | 31.5159 mL | |
| 5 mM | 0.6303 mL | 3.1516 mL | 6.3032 mL | |
| 10 mM | 0.3152 mL | 1.5758 mL | 3.1516 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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