C-Raf (IC50 = 9 nM)

GW5074 是一种有效且特异性的 c-Raf 抑制剂，IC50 值为 9 nM；它在体外对 MKK6、MKK7、p38 MAP 激酶或 cdks 没有影响。然而，在神经元培养物中使用 GW5074 进行处理会导致 c-Raf 和 B-Raf 上激活修饰的累积。在小脑颗粒神经元中，GW5074 不需要 MEK 或 ERK 来防止 LK 诱导的细胞凋亡。尽管 GW5074 通过 Akt 独立机制抑制细胞凋亡，但在此过程中 Akt 活性被延迟。核因子-kappa B、c-jun 和 Ras 均受到 GW5074 的影响。在颗粒细胞和其他神经元类型中，GW5074 可防止神经毒素导致细胞死亡。 [1]

GW5074 在亨廷顿病体内实验模型中具有预防作用。在小鼠中，GW5074 (5 mg/Kg) 完全阻止了 3-NP 诱导的广泛双侧纹状体损伤。 [1]在小鼠中，GW5074 可降低侧流烟雾引起的气道高反应性。[3]

Upstate Biotechnology 的激酶分析服务通常在标准条件下使用纯化的激酶和合成底物来进行体外激酶测定。简而言之，每次检测使用 5–10 mU 的纯化激酶。对于 GSK3β、cdk1、cdk2、cdk3 和 cdk5，将激酶与 1 μM GW5074 在含有 8 mM MOPS、pH 7.2、0.2 mM EDTA、10 mM 醋酸镁和 [c- 33P-ATP]。将等分试样点在 P30 过滤器上，用 50 mM 磷酸洗涤，并进行闪烁计数，测量 33P 掺入量以确定激酶活性的量。对于 [c- 33P-ATP]、50 mM Tris pH 7.5、0.1 mM EGTA、10 mM 乙酸镁和 [c- Raf、JNK1、JNK2、JNK3、MEK1、MKK6 和 MKK7，缓冲液的组成部分是。使用的肽底物如下：c-Raf 的 MBP 浓度为 0.66 mg/mL，cdks 为 0.1 mg/mL，JNK 为 3 μM ATF2，MEK1 为 1 μM MAPK2，MKK6 为 1 μM SAPK2a，MKK7 为 2 μM JNK1α 。

HCA 由 100 倍浓缩溶液稀释而成，pH 值为 7.5。当皮质神经元暴露于 HCA 时，添加 GW5074 以评估其对 HCA 引起的细胞毒性的影响。 24小时后，评估活力。

On the sixth day after receiving injections of saline, 3-NP, or a combination of 3-NP and GW5074 over the previous five days, the locomotor activity of mice is measured using the Tru-Scan® activity monitoring system (7 mice per group). The animal is put in a Perspex arena that measures 25.9 x 25.9 cm and has infrared beams that are spaced 0.6 inches apart in the X-Y plane. A second infrared beam system at the Z plane, positioned 2.54 cm above the X-Y plane, is also installed in the arena. In this system, interruptions in the 1717-grid system caused by the infrared beams in both the X-Y and Z planes are used to accurately measure animal movement. The animal is allowed to stay in the arena for 15 minutes, during which time data is collected using a Pentium PC running Tm Scan 99 software and the Tru Scan Line interface box. We choose the following behavioral criteria: (i) Total movement distance: the total of all vectored A-Y coordinate changes in the floor plane; (ii) mean velocity: the mean velocity of all X-Y coordinate change defined movements; and (iii) total vertical plane entries: the total number of times any part of the animal entered the vertical plane (Z plane). Each movement in the floor plane is a series of coordinate changes with no rest for at least one sample interval.

[1]. Neurochem . 2004 Aug;90(3):595-608.

[2]. Eur J Pharmacol . 2006 Jul 1;540(1-3):57-9.

[3]. Respir Res, 2008, 9(1), 71.

C15H8BR2INO2

520.94

518.80

C, 34.58; H, 1.55; Br, 30.68; I, 24.36; N, 2.69; O, 6.14

220904-83-6

(Z)-GW 5074;1233748-60-1

solid powder

C1=CC2=C(C=C1I)/C(=C/C3=CC(=C(C(=C3)Br)O)Br)/C(=O)N2

LMXYVLFTZRPNRV-KMKOMSMNSA-N

InChI=1S/C15H8Br2INO2/c16-11-4-7(5-12(17)14(11)20)3-10-9-6-8(18)1-2-13(9)19-15(10)21/h1-6,20H,(H,19,21)/b10-3-

(3Z)-3-[(3,5-dibromo-4-hydroxyphenyl)methylidene]-5-iodo-1H-indol-2-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。