| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MLKL (Kd = 9.3 μM); VEGFR2 (IC50 = 2 nM)
Nucleotide binding site within the MLKL pseudokinase domain (Kd = 9.3 µM) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GW806742X (0.1-10000 nM) 以剂量依赖性抑制 TSQ 刺激的野生型小鼠真皮成纤维细胞 (MDF) 的坏死性凋亡（1 ng/mL TNF、500 nM 化合物 A（Smac 模拟物）、10 μM Q-VD-OPh ）[1]。 GW806742X 可抑制 VEGF 诱导的 HUVEC 增殖，IC50 为 5 nM[2]。
通过热稳定性位移分析筛选367个小分子，鉴定出compound 1能与重组小鼠MLKL假激酶结构域相互作用。[1] 表面等离子体共振分析验证了compound 1与MLKL假激酶结构域的结合，测得其解离常数为9.3 µM。动力学数据显示解离速率较慢，表明化合物-蛋白复合物相对稳定。[1] 饱和转移差示NMR研究表明，compound 1能与ATP或ADP竞争结合MLKL假激酶结构域，提示其结合于核苷酸结合位点。[1] 热位移分析显示，与野生型MLKL相比，compound 1与ATP结合缺陷的K219M MLKL突变体的结合减弱，进一步支持了其结合核苷酸结合位点。[1] 在使用1 ng/mL TNF的坏死性凋亡刺激剂TSQ处理的野生型小鼠真皮成纤维细胞中，compound 1能拯救细胞免于坏死性凋亡，其IC50 < 50 nM，效力比已知的坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1强50倍以上。[1] 当使用超生理浓度的TNF时，compound 1的效力下降，IC50值在100-500 nM之间，最多能保护约50%的细胞。[1] Compound 1在浓度高于5 µM时会影响细胞活力，这可能源于脱靶效应。因此，在后续机制研究中使用了1 µM的浓度。[1] Compound 1不能保护MDFs免受缺失假激酶结构域的组成型死亡效应子MLKL(1-180)表达所诱导的细胞死亡。[1] Compound 1对主要由TS刺激诱导的凋亡性死亡没有显著保护作用。[1] 用1 µM的compound 1预处理野生型MDFs，可延缓TSQ刺激在6小时内诱导的内源性MLKL从细胞质向膜组分的易位，该结果通过细胞组分分离和免疫印迹证实。[1] 使用重组RIPK3和MLKL进行的体外激酶实验表明，10 µM的compound 1不抑制RIPK3的催化活性或RIPK3介导的MLKL磷酸化。实际上，在化合物存在下，MLKL激活环的磷酸化增强，这与激活环溶剂可及性增加相一致。[1] |
| 酶活实验 |
采用热稳定性位移分析筛选与MLKL假激酶结构域相互作用的小分子。使用浓度为2.6 µM的重组小鼠MLKL假激酶结构域。阳性对照ATP的添加浓度为0.2 mM，来自筛选库的小分子化合物，包括compound 1，则以40 µM的终浓度加入。监测配体结合引起的蛋白热稳定性变化。[1]
采用表面等离子体共振技术来表征compound 1与MLKL假激酶结构域的结合动力学。通过Ni2+/NTA螯合将重组MLKL蛋白固定在传感芯片上。将浓度范围在6.25至200 µM之间的compound 1流过芯片，获得传感图，并将结合数据全局拟合到双态动力学相互作用模型以确定平衡解离常数。[1] 进行饱和转移差示NMR实验以探究compound 1在MLKL上的结合位点。通过观察NMR信号的变化，评估了compound 1与核苷酸竞争结合MLKL假激酶结构域的情况。[1] 热位移分析也用于比较compound 1与野生型和核苷酸结合受损的突变型MLKL假激酶结构域的结合。化合物对K219M突变体热稳定性的降低支持了其结合位点的特异性。[1] 进行体外激酶实验以测试compound 1是否影响上游激酶RIPK3的活性。将重组RIPK3激酶结构域与重组MLKL蛋白在存在或不存在10 µM compound 1和ATP的条件下孵育。通过放射自显影或质谱分析反应产物，以评估RIPK3的自磷酸化和MLKL的磷酸化。[1] |
| 细胞实验 |
使用野生型小鼠真皮成纤维细胞评估compound 1对坏死性凋亡的抑制效果。细胞用不同浓度的compound 1预处理，然后用坏死性凋亡刺激剂TSQ处理。24小时后，通过流式细胞术检测碘化丙啶摄入来量化细胞死亡，并绘制剂量反应曲线以确定IC50值。[1]
为测试特异性，MDFs也在compound 1存在下用凋亡刺激剂TS处理，并用同样的方法通过PI摄入和流式细胞术量化细胞死亡。[1] 为确定compound 1的作用点是在MLKL激活的上游还是下游，使用了稳定表达可诱导的组成型活性MLKL N端结构域构建体的MDFs细胞系。在多西环素诱导MLKL(1-180)表达的同时，加入或不加入compound 1，通过PI摄入和流式细胞术测量细胞死亡。[1] 为研究作用机制，用1 µM compound 1或DMSO对照预处理野生型MDFs 1小时，然后用TSQ刺激。在不同时间点收集细胞，并使用洋地黄皂苷进行亚细胞组分分离，获得细胞质和粗膜组分。通过免疫印迹分析内源性MLKL在这些组分中的分布，以GAPDH和VDAC1分别作为细胞质和膜组分的标志蛋白。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
化合物 1 (GW806742X) 是从包含 367 个小分子的化合物库（已发表的激酶抑制剂库）中筛选出来的，筛选依据是其能够与 MLKL 假激酶结构域结合。[1]
它被描述为一种 ATP 模拟物，能够与 MLKL 假激酶的核苷酸结合位点（或“假活性”位点）结合。[1] 该化合物验证了假激酶的核苷酸结合位点（一类尚未被充分研究的治疗靶点）可以被小分子靶向，从而调节信号通路这一概念。 [1] 尽管化合物1此前已被报道为蛋白激酶VEGFR2的纳摩尔级抑制剂，但使用索拉非尼（一种强效的VEGFR2、Ret和c-Kit抑制剂）进行的对照实验表明，抑制这些激酶并不能阻断MDF细胞的坏死性凋亡，这支持了MLKL是其在此背景下发挥坏死性凋亡抑制作用的相关靶点。不能排除高浓度（>5 µM）下的脱靶效应。[1] 推测的作用机制是化合物1与MLKL假激酶结构域的结合“阻断”了MLKL的分子开关机制。这阻止了RIPK3介导的磷酸化诱导构象变化，从而无法释放N端四螺旋束（4HB）死亡效应结构域，进而延缓其寡聚化、膜转位以及随后的坏死性细胞死亡的诱导。[1] |
| 分子式 |
C25H22F3N7O4S
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|---|---|
| 分子量 |
573.5469
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| 精确质量 |
573.14
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| 元素分析 |
C, 52.35; H, 3.87; F, 9.94; N, 17.10; O, 11.16; S, 5.59
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| CAS号 |
579515-63-2
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| 相关CAS号 |
GW806742X hydrochloride
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| PubChem CID |
5329829
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.666
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| LogP |
3.13
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| tPSA |
160
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
12
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
40
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| 分子复杂度/Complexity |
922
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S(C1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1[H])N([H])C1=NC([H])=C([H])C(=N1)N(C([H])([H])[H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])N([H])C(N([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OC(F)(F)F)=O)(N([H])[H])(=O)=O
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| InChi Key |
SNRUTMWCDZHKKM-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H22F3N7O4S/c1-35(22-13-14-30-23(34-22)31-18-3-2-4-21(15-18)40(29,37)38)19-9-5-16(6-10-19)32-24(36)33-17-7-11-20(12-8-17)39-25(26,27)28/h2-15H,1H3,(H2,29,37,38)(H,30,31,34)(H2,32,33,36)
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| 化学名 |
1-[4-[methyl-[2-(3-sulfamoylanilino)pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]-3-[4-(trifluoromethoxy)phenyl]urea
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| 别名 |
GW806742-X; GW806742 X; GW806742X
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (~174.4 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7435 mL | 8.7176 mL | 17.4353 mL | |
| 5 mM | 0.3487 mL | 1.7435 mL | 3.4871 mL | |
| 10 mM | 0.1744 mL | 0.8718 mL | 1.7435 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Biotin-MLK2 Recombinant Human Active Protein Kinase
Biotin-MLK1 Recombinant Human Active Protein Kinase
MLK3-IN-1
MLKL-IN-7
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
