| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bcl-2 (IC50=9 μM ); Bcl-xL
Bcl-2 (Ki = 9 μM, measured by fluorescence polarization assay for Bcl-2-BH3 peptide interaction); no significant binding to Bcl-xL, Mcl-1, or other Bcl-2 family proteins [1] Bcl-2 (IC50 = 15 μM for inhibiting Bcl-2-Bax interaction in U87MG malignant glioma cell lysates, detected by co-immunoprecipitation) [3] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
HA14-1 是 Bcl-2 表面口袋的非肽配体。 Apaf-1 和 caspase 被 HA14-1 激活，可能是通过与 Bcl-2 蛋白结合并阻止其发挥其预期功能。由于发现一系列包含各种修饰的源自 HA14-1 的合成类似物具有截然不同的 Bcl-2 结合活性，看来 HA14-1 与 Bcl-2 表面口袋的相互作用对于 HA14 的化学结构是特异性的-1。将 HL-60 细胞暴露于不同浓度的 HA14-1 中 4 小时，以研究 HA14-1 对细胞活力的影响。 HA14-1 以剂量依赖性方式杀死 HL-60 细胞。当 HA14-1 浓度为 50 M 时，超过 90% 的细胞丧失活力[1]。 HA14-1 是一种 Bcl-2/Bcl-xL 拮抗剂[2]。
Bcl-2 过表达肿瘤细胞的抗增殖与凋亡活性：HA14-1抑制 MCF-7（乳腺癌，高 Bcl-2）细胞增殖的 IC50 为 6 μM，Jurkat（T 细胞白血病）细胞为 8 μM，HL-60（急性髓系白血病）细胞为 10 μM（72 小时 MTT 实验）。Annexin V-FITC 染色显示，10 μM HA14-1处理 MCF-7 细胞 24 小时后凋亡率达 40%（溶媒对照组为 5%）。JC-1 染色显示，8 μM HA14-1处理 MCF-7 细胞 18 小时后，线粒体膜电位（ΔΨm）降低 50% [1] 宫颈癌细胞的凋亡与自噬诱导：10 μM HA14-1处理 HeLa 细胞 24 小时后，诱导 35% 的细胞凋亡（Annexin V 阳性细胞），Western blot 检测到自噬标志物 LC3-II 蛋白升高 2.5 倍。与自噬抑制剂 3-MA（5 mM）联用后，凋亡率升至 55%，提示自噬在此过程中起细胞存活保护作用 [2] 恶性胶质瘤细胞对死亡的敏感性增强：12 μM HA14-1单独处理 U87MG 细胞时，台盼蓝排斥实验显示细胞死亡率为 25%；与替莫唑胺（100 μM）联用后，细胞死亡率升至 65%。Western blot 显示，12 μM HA14-1处理使 U87MG 细胞中 Bcl-2-Bax 复合物减少 40%，切割型胱天蛋白酶 - 3 升高 2 倍 [3] 线粒体细胞色素 c 释放：8 μM HA14-1处理 MCF-7 细胞 18 小时后，Western blot 检测胞质组分显示细胞色素 c 释放量增加 2 倍 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
注射人多形性胶质母细胞瘤细胞的瑞士裸鼠还腹腔注射低剂量依托泊苷（2.5 mg/kg，溶于 200 L 0.9% NaCl，从细胞注射后第 2 天开始每周 5 天）以及 HA14-1 或模拟治疗，以检查 HA14-1 治疗是否可能提高另一种抗肿瘤治疗的疗效。依托泊苷治疗本身不足以阻止胶质母细胞瘤细胞的生长，但与 HA14-1 联合使用时，可以显着减缓肿瘤生长，联合治疗能够延长肿瘤体积翻倍的时间就表明了这一点[3]。
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| 酶活实验 |
Bcl-2-BH3 相互作用的荧光偏振实验：将重组人 Bcl-2 蛋白（1-218 位氨基酸，100 nM）与荧光素标记的 Bak 来源 BH3 肽（50 nM）在实验缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，0.1% BSA）中于 25°C 孵育 30 分钟。加入系列稀释的HA14-1（1-50 μM），在激发波长 485 nm、发射波长 535 nm 下检测荧光偏振值，使用 GraphPad Prism 拟合竞争结合曲线计算 Ki 值 [1]
Bcl-2-Bax 相互作用的共免疫沉淀（Co-IP）实验：将 500 μg U87MG 细胞裂解液与HA14-1（5-20 μM）在 4°C 下预孵育 1 小时，加入 1 μg/mL 抗 Bcl-2 抗体过夜孵育。加入 50 μL Protein A/G 琼脂糖珠在 4°C 下孵育 2 小时，用裂解缓冲液洗涤 3 次后，通过 Western blot 检测结合的 Bax 蛋白，将抑制 50% Bcl-2-Bax 复合物形成的HA14-1浓度定为 IC50 [3] |
| 细胞实验 |
肿瘤细胞活力实验（MTT 法）：将 MCF-7/Jurkat/HL-60 细胞以 5×10³ 个 / 孔接种到 96 孔板，在 37°C、5% CO₂条件下过夜孵育。加入系列稀释的HA14-1（1-30 μM），培养 72 小时。每孔加入 10 μL MTT 试剂（5 mg/mL），4 小时后用 100 μL DMSO 溶解甲瓒结晶，检测 570 nm 处吸光度，通过剂量 - 效应分析计算 IC50 值 [1]
凋亡实验（Annexin V-FITC 染色）：（1）MCF-7 细胞：用HA14-1（5-15 μM）处理 24 小时，收集细胞并用冷 PBS 洗涤，避光条件下加入 5 μL Annexin V-FITC 染色 15 分钟，通过流式细胞术分析（排除 PI 阳性坏死细胞）[1]；（2）HeLa 细胞：实验流程同上，HA14-1浓度为 5-15 μM，处理时间 24 小时 [2] 自噬 Western blot 检测：用HA14-1（5-15 μM）处理 HeLa 细胞 12-24 小时，用含蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解细胞。通过 12% SDS-PAGE 分离蛋白，转移至 PVDF 膜，用抗 LC3（检测 LC3-II）和抗 β- 肌动蛋白（内参）抗体孵育，使用 ImageJ 软件定量条带强度 [2] 胶质瘤细胞死亡实验（台盼蓝排斥法）：将 U87MG 细胞以 2×10⁵个 / 孔接种到 6 孔板，用HA14-1（5-15 μM）单独处理或与替莫唑胺（100 μM）联用处理 48 小时。胰酶消化细胞后，与 0.4% 台盼蓝溶液按 1:1 比例混合，用血细胞计数板计数活细胞（未染色）与死细胞（染色）[3] 凋亡蛋白 Western blot 实验：用HA14-1（0.5-12 μM）处理细胞（MCF-7/U87MG）18-48 小时，用 RIPA 缓冲液裂解。通过 10% SDS-PAGE 分离蛋白，转移至 PVDF 膜，用抗切割型胱天蛋白酶 - 3、切割型胱天蛋白酶 - 9、Bcl-2、Bax、细胞色素 c 及 β- 肌动蛋白的抗体孵育检测 [1,3] |
| 动物实验 |
配制于含 50% DMSO 的 RPMI 1640 培养基中；400 nM；注射于细胞注射部位。雌性瑞士裸鼠携带 BeGBM 异种移植瘤。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外对正常细胞的毒性：HA14-1 (10 μM) 处理 72 小时后，仅导致正常人成纤维细胞 (MRC-5 细胞) 的存活率降低 10%（MTT 法），而 MCF-7 癌细胞的存活率则降低了 40% [1]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
2-氨基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4H-1-苯并吡喃-3-羧酸乙酯是一种1-苯并吡喃。
HA14-1 是第一个通过基于结构的药物设计发现的能够特异性结合 Bcl-2 的小分子有机化合物，靶向 Bcl-2 的 BH3 结合口袋 [1] 作用机制：(1) 与 Bcl-2 结合，将促凋亡蛋白（Bax、Bak）从 Bcl-2 复合物中置换出来，诱导线粒体外膜通透性 (MOMP)，释放细胞色素 c，并激活 caspase 依赖性内源性凋亡 [1,3]； (2) HA14-1 通过未知机制诱导 HeLa 细胞自噬，最初可保护细胞免于凋亡，但与自噬抑制剂联用时会增强细胞死亡[2]。 HA14-1 在 Bcl-2 过表达细胞中表现出更高的效力：MCF-7 细胞（高 Bcl-2 表达）的 IC50 为 6 μM，而 MDA-MB-231 细胞（低 Bcl-2 表达）的 IC50 > 30 μM[1]。 未见 FDA 批准的适应症或警告信息报道；HA14-1 是一种用于临床前研究的 Bcl-2 抑制剂原型（文献发表于 2000-2007 年），其效力较低，限制了其临床开发[1,2,3]。 |
| 分子式 |
C17H17BRN2O5
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|---|---|---|
| 分子量 |
409.23
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| 精确质量 |
408.032
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| 元素分析 |
C, 49.89; H, 4.19; Br, 19.53; N, 6.85; O, 19.55
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| CAS号 |
65673-63-4
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
3549
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
535.1±50.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
105ºC
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| 闪点 |
277.4±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.574
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| LogP |
3.7
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| tPSA |
111.64
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
25
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| 分子复杂度/Complexity |
611
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
BrC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])C([H])(C(C(=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H])=C(N([H])[H])O2)C([H])(C#N)C(=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H]
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| InChi Key |
SXJDCULZDFWMJC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H17BrN2O5/c1-3-23-16(21)11(8-19)13-10-7-9(18)5-6-12(10)25-15(20)14(13)17(22)24-4-2/h5-7,11,13H,3-4,20H2,1-2H3
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| 化学名 |
ethyl 2-amino-6-bromo-4-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethyl)-4H-chromene-3-carboxylate
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀； 然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀； 加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 View More
配方 3 中的溶解度: 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80: 30mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4436 mL | 12.2181 mL | 24.4361 mL | |
| 5 mM | 0.4887 mL | 2.4436 mL | 4.8872 mL | |
| 10 mM | 0.2444 mL | 1.2218 mL | 2.4436 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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PROTAC Bcl-xL degrader-4
BCL-XL-IN-4
BAD (103-127) (human), FAM-labeled TFA
PROTAC BCL-xL/BCL-w Degrader 1
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COA
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463611831
