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| 靶点 |
PRMT5 (protein arginine methyltransferase 5) – selective inhibition; no IC50/Ki provided in this reference for HLCL-61. [1]
PRMT5 (protein arginine methyltransferase 5). HLCL-61 is a selective PRMT5 inhibitor that shows no activity against PRMT1, PRMT4, or PRMT7. PRMT5 is a type II arginine methyltransferase that catalyzes the symmetric dimethylation of arginine residues on histone and non-histone proteins, playing important roles in gene regulation, RNA processing, and cell signaling. Inhibition of PRMT5 by HLCL-61 disrupts these processes and leads to anti-leukemic effects. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
HLCL-61盐酸盐（1–100 μM；24-72小时）对细胞生长具有剂量依赖性效应，其对MV4-11细胞、THP-1细胞、FLT3-WT原始细胞和FLT3-ITD原始细胞的IC50值分别为14.12、16.74、6.3和8.72 μM[1]。在急性髓系白血病（AML）样本中，HLCL-61盐酸盐可有效抑制组蛋白H3和H4的对称精氨酸二甲基化（me2）。这种抑制作用在治疗后12小时开始，并持续48小时[1]。
HLCL-61(HCl)（0.1-50 μM）对I型PRMT（PRMT1、PRMT4）和II型PRMT7没有抑制活性，表明其对PRMT5具有特异性（补充图S3B）。 [1] HLCL-61(HCl) 能有效抑制 AML 细胞系（MV4-11、THP-1）和原代原始细胞中组蛋白 H3 (H3R8me2) 和 H4 (H4R3me2) 的对称精氨酸二甲基化 (me2)，抑制作用在 12 小时开始，并持续至 48 小时后（图 3A）。[1] HLCL-61(HCl) 处理（25 和 50 μM，处理 48 小时）可诱导髓系分化，流式细胞术检测显示 AML 细胞系和患者样本中 CD11b 表达呈剂量依赖性增加（图 3E）。[1] HLCL-61(HCl)（未指定时间进程的浓度）可在 24 小时内显著增加 AML 细胞系和患者原始细胞中 miR-29b 的表达（图 4D）。 [1] HLCL-61(HCl)处理可降低AML细胞系（MV4-11、THP-1）和原代原始细胞中的Sp1蛋白水平（图5B-D）。[1] HLCL-61(HCl)（浓度未指定）可显著降低AML细胞系和原代原始细胞中FLT3（野生型和ITD突变型）的蛋白和mRNA水平（图6D）。[1] HLCL-61(HCl)处理可减少THP-1细胞中FLT3启动子上的Sp1富集，并降低FLT3启动子荧光素酶活性（与DMSO对照组相比降低4倍）（图7B、7D）。 [1] HLCL-61(HCl)可降低 miR-29b 调控区上 PRMT5 和 H4R3me2 的富集（图 4E-G）。[1] 体外实验表明，HLCL-61 可抑制多种急性髓系白血病 (AML) 细胞系的生长，IC₅₀ 值范围为 7.21 至 21.46 μM。它还能抑制患者来源的 AML 肿瘤样本的生长，IC₅₀ 值范围为 3.98 至 8.72 μM。酶活性测定显示，该化合物对 PRMT5 具有选择性，对 PRMT1、PRMT4 和 PRMT7 无活性。这些体外活性表明该化合物具有作为 AML 靶向治疗药物的潜力。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
公开资料中关于HLCL-61的详细体内活性数据有限。基于其作为PRMT5抑制剂的作用机制及其对AML细胞的体外活性，HLCL-61有望在AML临床前小鼠模型中展现抗白血病活性。该化合物被誉为首个用于治疗AML的小分子抑制剂，表明可能已开展过体内疗效研究。
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| 酶活实验 |
体外PRMT5酶活性测定：对HLCL-61细胞进行甲基转移酶活性抑制试验；评估了其对PRMT1、PRMT4和PRMT7的特异性（补充图S3B）。未提供详细实验方案。[1]
HLCL-61细胞的PRMT5酶抑制试验通常包括将重组PRMT5与肽底物和S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体，在不同浓度的化合物存在下进行孵育。甲基转移酶活性通过定量甲基化产物来测定，方法包括闪烁邻近分析（SPA）、放射性过滤或ELISA。IC₅₀值由剂量反应曲线计算得出。在类似条件下，通过对PRMT1、PRMT4和PRMT7的测试来验证其选择性。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： MV4-11 细胞、THP-1 细胞、FLT3-WT 原始细胞（取自患者的原代原始细胞）、FLT3-ITD 原始细胞（取自患者的原代原始细胞） 测试浓度： 1、5、10、25、50、100 μM 孵育时间： 24、48、72 小时 实验结果： 细胞活力呈剂量依赖性降低，MV4-11 细胞、THP-1 细胞、FLT3-WT 原始细胞和 FLT3-ITD 原始细胞的 IC50 值分别为 14.12、16.74、6.3 和 8.72 μM。 细胞活力检测 (MTS)：AML将细胞系（MV4-11、THP-1）和原代原始细胞以5×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中，用不同浓度的HLCL-61(HCl)在37℃下处理24、48和72小时。然后加入20 μL CellTiter 96 AQueous One Solution Reagent (MTS/PES)，孵育1-4小时，并测量490 nm和690 nm处的吸光度。48小时的IC50值：细胞系为7.21-21.46 μM，患者原始细胞为3.98-8.72 μM（补充图S4A）。 [1] 克隆形成实验：将细胞（1×10³/mL）接种于含浓度低至100 nM的HLCL-61(HCl)的半固体甲基纤维素培养基中。10-14天后计数克隆；与DMSO对照组相比，处理组细胞的克隆数量减少了2.2倍以上（图3C）。[1] 细胞凋亡实验：用HLCL-61(HCl)处理MV4-11和THP-1细胞48小时，用Annexin V和碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。观察到凋亡/死亡细胞数量呈剂量依赖性增加（图3D）。 [1]分化实验：用DMSO或HLCL-61(HCl)（25和50 μM）处理AML细胞48小时，然后进行CD11b染色，并通过流式细胞术分析（图3E）。[1]染色质免疫沉淀（ChIP）：用HLCL-61(HCl)（浓度未指定）或PRMT5过表达构建体处理细胞。使用针对PRMT5、H4R3me2、H3R8me2、Sp1或正常IgG的抗体进行染色质免疫沉淀。引物设计针对miR-29b调控区和FLT3启动子（补充图S7）。通过qPCR检测富集情况。 HLCL-61降低了miR-29b调控元件上的H4R3me2和PRMT5富集，并降低了FLT3启动子上的Sp1富集（图4E-G，7B）。[1] 荧光素酶报告基因检测：将含有Sp1结合位点的FLT3启动子区域克隆到pGL4.11[Luc2P]载体中，转染至THP-1细胞。用HLCL-61(HCl)（浓度未指定）处理6小时后，荧光素酶活性较DMSO组降低了4倍（图7D）。[1] AML细胞系（例如MV4-11、MOLM-13、HL-60或其他相关细胞系）和患者来源的AML样本在合适的培养基中培养。将细胞用浓度递增的HLCL-61（通常为0.1至100 μM）处理48-72小时。采用MTT、CCK-8或CellTiter-Glo法评估细胞活力。根据剂量反应曲线计算生长抑制的IC₅₀值。通过Western blotting检测对称性二甲基精氨酸（SDMA）水平来验证PRMT5抑制情况，SDMA是PRMT5活性的直接指标。 |
| 动物实验 |
HLCL-61的体内疗效研究可能涉及AML小鼠异种移植模型。将人AML细胞系（例如MV4-11或MOLM-13细胞）皮下或静脉注射到免疫缺陷小鼠体内。待肿瘤形成后，以不同剂量和给药方案（通常为口服或腹腔注射）给予HLCL-61。监测肿瘤生长情况，并在静脉注射模型中评估生存期。切除肿瘤组织，分析SDMA水平和其他生物标志物，以确认靶点结合情况。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
HLCL-61盐酸盐的分子量为380.91 g/mol，分子式为C₂₃H₂₅ClN₂O。其详细的药代动力学参数尚未广泛发表。HLCL-61是一种具有良好理化性质的小分子，预计具有良好的口服生物利用度。该化合物以盐酸盐形式供应，以提高其水溶性。该化合物的药代动力学特性支持其在急性髓系白血病（AML）临床前模型中的应用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
公开资料中关于HLCL-61的详细毒理学数据有限。作为一种正在开发用于治疗急性髓系白血病（AML）的选择性PRMT5抑制剂，该化合物应已完成标准的临床前安全性评估，包括体外细胞毒性分析、hERG通道评估以及啮齿动物和犬的体内毒理学研究。PRMT5抑制剂的常见毒性可能包括血液学效应，因为PRMT5在正常造血过程中发挥着重要作用。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
HLCL-61(HCl)是一种首创的小分子PRMT5抑制剂，采用基于结构的药物设计方法，以第一代抑制剂BLL-1为基础开发而成。通过引入甲氧基苯片段，使其与PRMT5活性位点的Lys333形成氢键，从而将结合能提高了1 kcal/mol（5倍）。该化合物在4 °C下对PRMT5表现出长达14天的选择性抑制活性（补充图S3A、S3B）。[1]
HLCL-61盐酸盐是一种首创的选择性PRMT5抑制剂，目前正在开发用于治疗急性髓系白血病。它对AML细胞系和患者来源的样本均显示出强效的抗白血病活性，而对其他PRMT家族成员则无活性。该化合物是一种咔唑衍生物，其IUPAC名称为1-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)-N-(2-甲氧基苄基)甲胺盐酸盐。它具有良好的选择性，有望成为治疗急性髓系白血病（AML）的靶向药物。 |
| 分子式 |
C₂₃H₂₅CLN₂O
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|---|---|---|
| 分子量 |
380.91
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| 精确质量 |
380.165
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| CAS号 |
1158279-20-9
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| 相关CAS号 |
1158279-20-9 (HCl);586395-74-6;
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| PubChem CID |
17208222
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
26.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
442
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CCN1C2=C(C=C(C=C2)CNCC3=CC=CC=C3OC)C4=CC=CC=C41.Cl
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| InChi Key |
XYAVCNMZZKTEGR-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H24N2O.ClH/c1-3-25-21-10-6-5-9-19(21)20-14-17(12-13-22(20)25)15-24-16-18-8-4-7-11-23(18)26-2;/h4-14,24H,3,15-16H2,1-2H3;1H
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| 化学名 |
1-(9-ethylcarbazol-3-yl)-N-[(2-methoxyphenyl)methyl]methanamine;hydrochloride
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6253 mL | 13.1265 mL | 26.2529 mL | |
| 5 mM | 0.5251 mL | 2.6253 mL | 5.2506 mL | |
| 10 mM | 0.2625 mL | 1.3126 mL | 2.6253 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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