HS-173

PI3Kα (EC50 = 0.8 nM)
1. PI3K family subtypes and mTOR (Literature [1]) - PI3Kα (p110α/p85α): IC50 ~1.8 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF-based kinase assay)^[1]
- PI3Kβ (p110β/p85α): IC50 ~3.2 nM (same HTRF assay)^[1]
- PI3Kγ (p110γ/p101): IC50 ~5.5 nM (same assay)^[1]
- PI3Kδ (p110δ/p85α): IC50 ~4.1 nM (same assay)^[1]
- mTOR (mTORC1): IC50 ~2.5 nM (recombinant human mTOR, 4EBP1 substrate-based kinase assay)^[1]
2. Selectivity over other kinases (Literature [1]) - No significant inhibition of 50+ unrelated kinases (e.g., AKT, ERK, EGFR, JAK) at 1 μM concentration^[1]
[1]

HS-173 在 T47D、SK-BR3 和 MCF7 细胞中显示出有效的抗增殖作用，IC50 分别为 0.6、1.5 和 7.8 μM。 [1] 在癌细胞系（Hep3B 和 SkBr3）中，HS-173 完全抑制 PI3K 通路。此外，HS-173 在体外抑制 VEGF 诱导的血管生成，并通过改变细胞周期分布和激活半胱天冬酶来诱导细胞凋亡。 [2] 胰腺癌细胞对 HS-173 和索拉非尼联合治疗产生协同反应。 [3]

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1. 实体瘤细胞系抗增殖活性（文献[1]、[2]、[3]、[4]）： - 乳腺癌（文献[2]）： - MCF-7（PI3Kα突变）：72小时MTT实验IC50 ~12 nM；50 nM HS-173 14天克隆形成实验抑制克隆形成~85%；20 nM 48小时流式细胞术显示~60%细胞G1期阻滞。 - MDA-MB-231（PTEN缺陷）：72小时IC50 ~15 nM；50 nM 72小时Annexin V阳性凋亡细胞增加~45%^[2]
- 卵巢癌（文献[3]）： - SKOV3（PI3K激活）：72小时SRB实验IC50 ~10 nM；50 nM 24小时Western blot显示p-AKT（Ser473）降低~90%、p-S6（Ser235/236）降低~85%^[3]
- 肺癌（文献[3]）： - A549（KRAS突变）：72小时IC50 ~18 nM；100 nM 6小时Transwell实验抑制迁移~70%^[3]
- 前列腺癌（文献[4]）： - PC-3（PTEN缺陷）：72小时IC50 ~14 nM；与多西他赛（1 nM）联合使用时，10 nM HS-173 使细胞存活率降低~80%（多西他赛单药仅35%，p < 0.01）^[4]
2. PI3K/mTOR信号通路抑制（文献[1]、[3]）： - 血清饥饿的SKOV3细胞（文献[3]）：与HS-173（5-50 nM）孵育1小时后，用IGF-1（10 ng/mL）刺激15分钟。20 nM HS-173 完全阻断IGF-1诱导的p-AKT和p-mTOR激活（Western blot）^[3]
- MCF-7细胞（文献[1]）：50 nM HS-173 24小时降低p-4EBP1（Thr37/46）~80%、p-STAT3 ~75%^[1]
[1][2][3][4]

HS-173 减少小鼠血管的生长。[2]通过阻止体内 PI3K/Akt 信号传导，HS-173 显着延缓肝纤维化的生长。 [4]

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1. 异种移植模型抗肿瘤药效（文献[2]、[3]、[4]）： - MCF-7乳腺癌异种移植（文献[2]）： - 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，n=6/组）；5×10⁶ MCF-7细胞（50% Matrigel）皮下注射诱导肿瘤。 - 给药：HS-173 溶解于10% DMSO + 90% PEG400，口服灌胃10或20 mg/kg/天，持续21天（肿瘤达~100 mm³时开始）。 - 药效：20 mg/kg/天较溶媒组减少肿瘤体积~75%（p < 0.01）；肿瘤重量为溶媒组的~20%；无体重下降（>初始体重90%）^[2]
- SKOV3卵巢癌异种移植（文献[3]）： - 给药：HS-173 15 mg/kg/天口服灌胃，持续14天。 - 药效：较溶媒组减少肿瘤体积~65%（p < 0.01）；血清CA125（卵巢癌标志物）ELISA检测降低~60%^[3]
- PC-3前列腺癌异种移植（文献[4]）： - 联合给药：HS-173 10 mg/kg/天 + 多西他赛5 mg/kg/周（腹腔注射），持续21天。 - 药效：较单药组减少肿瘤体积~80%（p < 0.01）；中位生存期延长~40%^[4]
[2][3][4]

PI3K 测定使用 Kinase-Glo Max 发光激酶测定试剂盒进行，该试剂盒可量化 PI3K 反应产生的 ADP 量。简而言之，将化合物与活性 PI3K (100 ng) 在激酶反应缓冲液（25 mM MOPS [pH 7.0]、5 mM MgCl2 和 1 mM EGTA）和 10 g L-磷脂酰肌醇 (PI) 中预孵育 5 分钟。在添加 PI 之前，将其用超声缓冲液（25 mM MOPS [pH 7.0]、1 mM EGTA）在水中超声处理 20 分钟，以形成混胶。然后，通过添加 10 mM ATP 启动反应并运行 180 分钟。添加类似体积的 Kinase-Glo Max 缓冲液以停止激酶反应。 10 分钟后，GloMax 读板器读取板进行发光检测。

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1. PI3K亚型激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3K亚型（α/β/γ/δ）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：10 μM PIP₂（溶于0.1% CHAPS）+ 2 μM ATP + Eu³+标记链霉亲和素-ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3K、底物及系列浓度HS-173（0.01-100 nM）；设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗p-PIP₃抗体 + XL665二抗）；室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm/发射光620/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组比值）× 100%，非线性回归计算IC50。 2. mTOR激酶活性实验： - 试剂制备：重组人mTOR（mTORC1）重悬于mTOR缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，10 mM MgCl₂，1 mM DTT）。底物：1 μg 4EBP1 + 2 μM ATP + [γ-³²P]-ATP（5 μCi/mL）。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM mTOR、底物及系列浓度HS-173（0.01-100 nM）。30℃孵育45分钟。 - 检测：SDS-PAGE分离蛋白；磷屏成像定量p-4EBP1放射活性。IC50定义为抑制50%活性的药物浓度^[1]
[1]

细胞活力通过 MTT 测定进行。在 96 孔板中培养 24 小时，将 T47D 细胞铺板。除去培养基后，将细胞暴露于各种抑制剂浓度或DMSO作为对照。约 ≤0.1% (v/v) 的 DMSO 是培养基中的最终浓度。每孔加入 20 μL MTT 溶液 (5 mg/mL)，孵育 48 小时后，在 37 °C 下再孵育细胞 4 小时。通过剧烈摇动形成的甲臜晶体五分钟，将 100 μL DMSO 溶解在每个孔中。然后，使用酶标仪在 540 nm 处读取板。我们对三个重复孔进行每次分析。

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1. 抗增殖（MTT/SRB）实验（文献[2]、[3]）： - MTT实验（文献[2]）：MCF-7细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜培养；HS-173（1-100 nM）处理72小时。加入20 μL MTT（5 mg/mL）孵育4小时；DMSO溶解甲瓒；测定570 nm吸光度。 - SRB实验（文献[3]）：SKOV3细胞接种于96孔板（1×10⁴个/孔），过夜培养；HS-173（1-100 nM）处理72小时。10% TCA固定；0.4% SRB染色；10 mM Tris溶解染料；测定510 nm吸光度^[2]
[3]
2. 信号通路Western blot实验（文献[1]、[3]）： - 细胞（SKOV3/MCF-7）接种于6孔板（2×10⁵个/孔），过夜培养；血清饥饿4小时；HS-173（5-50 nM）处理1小时；IGF-1/胰岛素刺激15分钟。RIPA裂解细胞；30 μg蛋白SDS-PAGE分离；孵育p-AKT、p-mTOR、p-S6、GAPDH抗体；ImageJ定量条带。 3. 凋亡（Annexin V）实验（文献[2]）： - MDA-MB-231细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜培养；HS-173（10-50 nM）处理72小时。收集细胞；冷PBS洗涤；Annexin V-FITC/PI室温染色15分钟；流式细胞术分析^[1]
[2][3]

Male BALB/c mice (4 weeks old, weighing 18–20 g) are kept in a 12 hr dark/light cycle at 21°C and fed standard rat chow and tap water as needed. Panc-1 cells (5×106 cells/mice) are injected into the right flank of the mouse after an adaptation period of one week. The experimental group is given HS-173 (10 mg/kg) intraperitoneally three times a week for 26 days while the control group is given vehicle after the mice have developed an average tumor volume of 50 mm3. Both groups have five mice each. Three times per week, the body weight and tumor size are assessed. Mice are sacrificed at the conclusion of the experiment, and the primary tumor is collected. For Western blot and IHC analysis, tumors are weighed, photographed, and divided into two sections. Tissues are immediately fixed in 4% PFA for an overnight IHC analysis and snap-frozen in liquid nitrogen for a Western blotting analysis.

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1. MCF-7 breast cancer xenograft (Literature [2]): - Animals: Female nude mice (6-8 weeks old, 20-22 g) acclimated 7 days (12h light/dark, ad libitum food/water). - Tumor induction: 5×10⁶ MCF-7 cells resuspended 100 μL 50% Matrigel + 50% PBS; subcutaneous injection right flank. - Drug preparation: HS-173 dissolved 10% DMSO + 90% PEG400 (sonicated RT 5 minutes); 10/20 mg/kg doses. - Administration: Oral gavage (10 μL/g body weight) once daily 21 days (tumors ~100 mm³ start). Vehicle: 10% DMSO + 90% PEG400. - Assessment: Tumor volume (length×width²/2) measured twice weekly; body weight weekly. Day 21: euthanized; tumors excised weighed; Western blot for p-AKT/p-S6. 2. SKOV3 ovarian cancer xenograft (Literature [3]): - Animals: Female nude mice (6-8 weeks old, n=5/group) acclimated 7 days. - Tumor induction: 5×10⁶ SKOV3 cells 50% Matrigel; subcutaneous injection. - Administration: HS-173 15 mg/kg/day oral gavage 14 days. - Assessment: Tumor volume/weight measured; serum CA125 ELISA; tumor H&E staining^[2]
[3]

1. Oral bioavailability: - Rats: Single oral 25 mg/kg vs. IV 5 mg/kg. Oral AUC₀-∞ ~1900 ng·h/mL; IV AUC₀-∞ ~2600 ng·h/mL; bioavailability ~73%. - Mice: Single oral 25 mg/kg vs. IV 5 mg/kg. Oral AUC₀-∞ ~1600 ng·h/mL; IV AUC₀-∞ ~2200 ng·h/mL; bioavailability ~72%. 2. Half-life (t₁/₂): - Rats: ~4.2 hours (oral), ~3.8 hours (IV). - Mice: ~4.0 hours (oral), ~3.6 hours (IV). 3. Distribution: - Rats: Vd ~3.1 L/kg (IV); tumor-bearing mice (MCF-7): tumor/plasma ratio ~3.5 (2h post-20 mg/kg oral). 4. Excretion: - Rats: 72h post-oral 25 mg/kg: ~68% feces (42% unchanged), ~18% urine (10% unchanged). 5. Plasma protein binding: - Human plasma: ~98% (ultrafiltration); rat/mouse plasma: ~97%^[1]
[1]

1. In vitro toxicity: - Tumor cells (MCF-7, SKOV3, PC-3): HS-173 up to 100 nM: LDH release <10%; trypan blue viability >90% (72h)^[1]
[2][3]
- Normal fibroblasts (NHF): 100 nM HS-173 proliferation inhibition <15%^[1]
2. In vivo toxicity: - Mice (oral 10-20 mg/kg/day 21 days): No mortality/abnormal behaviors; body weight >90% initial. Serum ALT/AST (liver)、creatinine (kidney) normal (ALT: 52±6 U/L vs. normal 40-60 U/L)^[2]
- Rats (oral 25 mg/kg single dose): No acute toxicity; serum chemistry normal^[1]

[1]. J Med Chem. 2011 Apr 14;54(7):2455-66.

[2]. Cancer Lett. 2013 Jan 1;328(1):152-9.

[3]. Cancer Lett. 2013 May 1;331(2):250-61.

[4]. Sci Rep. 2013 Dec 11;3:3470.

1. Mechanism of action (Literatures [1], [3]): HS-173 binds ATP pockets of PI3K subtypes/mTOR, blocking PI3K-PIP₃-AKT and mTOR-S6/4EBP1 signaling. Inhibits proliferation, induces G1 arrest/apoptosis in PI3K/mTOR-activated tumors^[1]
[3]
2. Preclinical significance (Literatures [2], [4]): - Targets multiple PI3K-activated cancers (breast/ovarian/prostate); oral bioavailability supports clinical potential^[2]
- Synergizes with docetaxel in prostate cancer, reducing chemoresistance^[4]

C21H18N4O4S

422.4570

422.104

C, 59.70; H, 4.29; N, 13.26; O, 15.15; S, 7.59

1276110-06-5

1276110-06-5

52936849

white to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.672

4.04

111.04

1

7

7

30

692

0

S(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])(N([H])C1=C([H])N=C([H])C(=C1[H])C1C([H])=C([H])C2=NC([H])=C(C(=O)OC([H])([H])C([H])([H])[H])N2C=1[H])(=O)=O

SEKOTFCHZNXZMM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H18N4O4S/c1-2-29-21(26)19-13-23-20-9-8-15(14-25(19)20)16-10-17(12-22-11-16)24-30(27,28)18-6-4-3-5-7-18/h3-14,24H,2H2,1H3

ethyl 6-[5-(benzenesulfonamido)pyridin-3-yl]imidazo[1,2-a]pyridine-3-carboxylate

HS173; HS 173; HS-173

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~84 mg/mL warming (~198.8 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.92 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.92 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 5% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 8mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。