IPI-3063

p110δ (IC50 = 2.5 nM); p110α (IC50 = 1170 nM); p110β (IC50 = 1508 nM); p110γ (IC50 = 2187 nM)
The target of IPI-3063 is the phosphoinoside-3-kinase (PI3K) p110δ isoform. In biochemical assays, its IC₅₀ value for p110δ is 2.5 ± 1.2 nM (n = 5), while for other PI3K isoforms, the IC₅₀ values are significantly higher: 1,171 ± 533 nM (n = 6) for p110α, 1,508 ± 624 nM (n = 5) for p110β, and 2,187 ± 1,529 nM (n = 4) for p110γ [1]
In cell-based assays, the cellular IC₅₀ of IPI-3063 for p110δ is 0.1 ± 0.01 nM (n = 6), and for other class I PI3K isoforms, the cellular IC₅₀ values are at least 1,000-fold higher: 1,901 ± 1,318 nM (n = 4) for p110α, 102.8 ± 35.7 nM (n = 4) for p110β, and 418.8 ± 117.2 nM (n = 2) for p110γ [1]

IPI-3063 是一种 p110δ 选择性化合物，在 p110δ 特异性细胞检测中 IC50 = 0.1 nM，其他 I 类 PI3K 亚型的细胞 IC50 值至少高出 1,000 倍。 IPI-3063 显着降低小鼠 B 细胞存活、增殖和浆母细胞分化[1]。

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1. 对小鼠B细胞信号通路的影响：小鼠原代B细胞经αIgM+IL-4刺激后，IPI-3063能有效降低AKT在丝氨酸473位点的磷酸化水平（p-AKT S473），在1 nM浓度时即产生显著效果；同时也能降低ERK1/2在Thr202/Tyr204位点的磷酸化水平（p-ERK1/2），在10 nM浓度时效果显著。用脂多糖（LPS）刺激B细胞时，也观察到类似的p-AKT降低结果，但LPS不会诱导ERK1/2磷酸化[1]
2. 对小鼠B细胞存活的影响：在小鼠B细胞存活实验中，IPI-3063能以剂量依赖性方式降低B细胞激活因子（BAFF）依赖的B细胞存活，在10 nM浓度时即可显著降低存活水平，其效果接近泛PI3K抑制剂GDC-0941。在含IL-4的培养体系中，该药物也呈现类似趋势，而p110γ抑制剂AS-252424对B细胞存活无显著影响[1]
3. 对小鼠B细胞增殖的影响：在小鼠B细胞增殖实验中，IPI-3063在最低测试浓度（1 nM）时，就能抑制经αIgM+IL-4刺激的B细胞增殖。在αIgM+IL-4刺激的细胞中，该药物在所有测试浓度下均能显著减少细胞累积；在LPS刺激的B细胞中，也呈现剂量依赖性的增殖抑制效果。但该药物对经α-CD40+IL-4刺激的B细胞增殖无影响。在LPS+IL-4刺激的B细胞中，该药物虽呈现类似抑制趋势，但变异性更大[1]
4. 对小鼠B细胞分化及抗体类别转换的影响：在LPS刺激的小鼠B细胞中，IPI-3063从1 nM浓度开始就能有效降低浆母细胞分化（通过CD138⁺B220ˡᵒ细胞群比例衡量），最高浓度时对浆母细胞分化的抑制效果与GDC-0941相当。在经αCD40+IL-4刺激的B细胞中，该药物从1 nM浓度开始能提高B220⁺细胞向IgG1转换的比例，效果接近GDC-0941；但在LPS+IL-4激活的细胞中，对IgG1转换无显著影响。此外，通过ELISA检测IgM分泌量，结果与浆母细胞分化抑制趋势一致，且p110γ抑制剂AS-252424在这些实验中均无显著作用[1]
5. 对人B细胞增殖的影响：在人B细胞增殖实验中，IPI-3063在1 nM浓度时，就能抑制经人CD40L+抗人IgM/IgG+hIL-2+hIL-21刺激的人B细胞增殖；在检测分裂细胞总数和分裂细胞百分比时，该药物从1 nM浓度开始就能显著降低增殖水平。p110γ抑制剂AS-252424对人B细胞增殖无影响[1]

IPI-3063在小鼠体内具有良好的药代动力学[1]。

使用人类重组 PI3K-α、PI3K-β、PI3K-δ 和 PI3K-γ。使用磷脂酰肌醇 4,5 二磷酸 (diC8-PtdIns(4,5)P2)。 PI3K-α、β 和 δ 是由 p85α 调节亚基和全长 p110α、p110β 或 p110δ 催化亚基组成的异二聚体。催化亚基 p110γ 有一个称为 PI3K-γ 的单体。将激酶样品（10 nM-α、β 和 δ；20 nM-γ）与 IPI-3063 在反应缓冲液（15 mM HEPES pH 7.4、20 mM NaCl、1 mM EGTA、0.02）中室温孵育 30 分钟% Tween 20、10 mM MgCl2、0.2 mg/mL 牛-γ-球蛋白），然后添加 ATP/diC8-PtdIns(4,5)P2 混合物，得到 3 mM ATP 和 500 µM diC8-PtdIns(4 ,5)P2。反应在室温下孵育 2 小时，并测量 PI3K 活性。读板器用于在发光模式下读取板。

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1. 试剂与样本准备：使用人重组PI3K-α、-β、-δ和-γ。其中PI3K-α、β、δ为异二聚体，由全长p110α、p110β或p110δ催化亚基与p85α调节亚基组成；PI3K-γ为p110γ催化亚基的单体。以磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（diC8-PtdIns(4,5)P2）作为底物[1]
2. 孵育过程：将激酶样本（α、β、δ为10 nM；γ为20 nM）与IPI-3063在反应缓冲液（含15 mM HEPES pH 7.4、20 mM NaCl、1 mM EGTA、0.02% Tween 20、10 mM MgCl₂、0.2 mg/mL牛γ-球蛋白）中于室温孵育30分钟。随后加入ATP/diC8-PtdIns(4,5)P2混合物，使ATP终浓度为3 mM，diC8-PtdIns(4,5)P2终浓度为500 µM[1]
3. 反应与检测：反应在室温下持续2小时。采用ADP-Glo Max检测试剂盒评估PI3K活性，使用Envision酶标仪在发光模式下读取平板数据[1]

将纯化的小鼠 B 细胞在白细胞介素 4 (IL-4) 或 B 细胞激活因子 (BAFF) 以及不同浓度的 IPI-3063 和 IPI-443 中孵育 48 小时。

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1. 小鼠B细胞纯化与培养：通过阴性选择法纯化小鼠脾脏B细胞，利用抗B220抗体通过流式细胞术（FACS）验证纯度>95%。纯化后的B细胞以0.5或0.25×10⁶细胞/mL的终浓度接种于RPMI 1640培养基中，培养基添加10%（体积分数）热灭活胎牛血清（FCS）、5 mM Hepes、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/mL青霉素、100 µg/mL链霉素和50 µM 2-巯基乙醇[1]
2. 信号分子的蛋白质印迹（Western Blot）分析：将纯化的小鼠B细胞用不同浓度的IPI-3063预处理30分钟，然后用5 µg/mL αIgM+10 ng/mL IL-4或5 µg/mL LPS激活1小时后收集细胞。制备细胞裂解液，通过蛋白质印迹法检测p-AKT S473和p-ERK1/2。使用ImageJ软件测量各条带的平均荧光强度，磷酸化信号以肌动蛋白（actin）信号归一化，利用“激活无药物对照”组计算折叠变化[1]
3. B细胞存活实验：将总脾细胞用不同浓度的IPI-3063预处理，然后用10 ng/mL IL-4或60 ng/mL BAFF培养48小时。通过流式细胞术检测B220⁺7AAD⁻细胞比例，计算存活B细胞百分比[1]
4. B细胞增殖实验（CFSE标记）：将小鼠脾细胞或纯化的B细胞用IPI-3063预处理30分钟，然后用不同刺激物刺激（αIgM+IL-4刺激72小时、LPS刺激72小时、αCD40+IL-4刺激96小时、LPS+IL-4刺激96小时）。刺激前用2.5 µM CFSE标记B细胞。通过流式细胞术分析CFSE荧光强度，以B220⁺7AAD⁻CFSEˡᵒ细胞数量确定分裂细胞总数[1]
5. B细胞分化与抗体类别转换实验：将纯化的小鼠B细胞用IPI-3063预处理后，用5 µg/mL LPS刺激72小时（用于浆母细胞分化检测），或用5 µg/mL抗CD40+5 ng/mL mIL-4、5 µg/mL LPS+5 ng/mL mIL-4刺激96小时（用于IgG1类别转换检测）。通过流式细胞术检测浆母细胞（7AAD⁻CFSEˡᵒCD138⁺B220ˡᵒ细胞群）和IgG1转换B细胞（7AAD⁻CFSEˡᵒB220⁺IgG1⁺细胞）。对于IgM分泌检测，收集LPS刺激3天后的B细胞上清液，稀释1000倍，采用抗小鼠IgM包被抗体和辣根过氧化物酶（HRP）偶联的兔抗小鼠IgM二抗，通过ELISA法检测[1]
6. 人B细胞纯化与增殖实验：采用Ficoll-Paque密度梯度离心法从人外周血中纯化外周血单个核细胞（PBMCs），再通过阴性选择法从PBMCs中纯化人B细胞，利用抗CD19 PE偶联抗体通过流式细胞术验证纯度从4%提升至>70%。纯化后的人B细胞以0.1×10⁶细胞/mL的浓度接种，在含2 µg/mL人CD40L+5 µg/mL抗人IgM/IgG+100 µg/mL hIL-2+100 µg/mL hIL-21的RPMI 1640培养基（添加与小鼠B细胞培养相同的补充剂）中培养。B细胞用CFSE标记，刺激120小时后，通过流式细胞术分析分裂细胞总数（CD19⁺7AAD⁻CFSEˡᵒ细胞）和分裂细胞百分比[1]
7. pAKT S473 ELISA实验：将SKOV3和786.0细胞以每孔2×10⁶个细胞/200 µL培养基的密度接种于96孔板；Raji和Raw264.7细胞以相同密度接种于无FBS培养基。在5% CO₂、37°C条件下过夜培养后，用IPI-3063处理细胞30分钟。Raji细胞在抑制剂存在下用10 µg/mL抗人IgM刺激30分钟，Raw264.7细胞用25 nM C5a刺激3分钟，SKOV3和786.0细胞不进行刺激。吸去培养基，每孔加入50 µL冰裂解缓冲液，使用磷酸化Akt1（S473）夹心ELISA抗体试剂盒检测pAKT水平[1]

褐挪威大鼠
50 mg/kg
口服

有研究提到IPI-3063在小鼠体内具有良好的药代动力学特性，但并未提供具体的参数，例如吸收、分布、代谢、排泄、半衰期或口服生物利用度[1]。

[1]. Front Immunol. 2017, 8: 747.

[2]. Chem Biol . 2013 Nov 21;20(11):1364-74.

1. IPI-3063 是一种强效且选择性的 PI3K p110δ 亚型抑制剂。它是一种研究免疫细胞（尤其是 B 细胞）中 p110δ 功能的有效工具，因为它可以在低纳摩尔浓度下有效调节 B 细胞反应（存活、增殖、分化、抗体类别转换）[1]。
2. I 类 PI3K 是重要的酶，可将细胞表面受体的信号传递给下游介质，从而驱动细胞功能。在 B 细胞恶性肿瘤和自身免疫性疾病患者的淋巴细胞中均发现 PI3K 信号通路激活。p110δ 催化亚型对 B 淋巴细胞的发育、存活、活化和分化至关重要，因此是一个合理的靶点。 IPI-3063 的研发旨在靶向该亚型，其对 p110δ 的强效选择性抑制作用为研究 p110δ 在 B 细胞生物学中的作用以及在 B 细胞相关疾病中的潜在治疗应用提供了途径 [1]
3. 目前，idelalisib 是唯一获得 FDA 批准用于治疗某些 B 细胞恶性肿瘤的选择性 p110δ 抑制剂。IPI-3063 作为一种新型选择性 p110δ 抑制剂，在体外对 B 细胞功能的影响与泛 PI3K 抑制剂 GDC-0941 相似，表明其具有作为研究工具和治疗 B 细胞相关疾病（例如 B 细胞恶性肿瘤和 B 细胞介导的自身免疫性疾病）的潜在先导化合物的潜力 [1]

C25H25N7O2

455.52

455.206

C, 65.92; H, 5.53; N, 21.52; O, 7.02

1425043-73-7

IPI-3063; IPI 3063; IPI3063.;

71276090

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

817.8±65.0 °C at 760 mmHg

448.4±34.3 °C

0.0±2.9 mmHg at 25°C

1.688

3.1

128

2

7

5

34

962

1

C1(=O)C=CC(C2=C3C(=O)N(C(C)C)C([C@@H](NC4=NC=NC(N)=C4C#N)C)=CC3=CC=C2)=CN1C

OBHAYOJCPNWKBL-HNNXBMFYSA-N

InChI=1S/C25H25N7O2/c1-14(2)32-20(15(3)30-24-19(11-26)23(27)28-13-29-24)10-16-6-5-7-18(22(16)25(32)34)17-8-9-21(33)31(4)12-17/h5-10,12-15H,1-4H3,(H3,27,28,29,30)/t15-/m0/s1

4-amino-6-[[(1S)-1-[8-(1-methyl-6-oxopyridin-3-yl)-1-oxo-2-propan-2-ylisoquinolin-3-yl]ethyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~91 mg/mL (~117.1 mM)
Ethanol: ~12 mg/mL (~26.3 mM)