Natural occurring flavonoid; antioxidant

异槲皮素广泛分布于植物体内。 10 μM 时，七种异槲皮苷化合物可显着降低 H2O2 对 RGC-5 细胞的负面影响。在 H2O2 存在的情况下，10 μM 和 50 μM 的细胞活力分别从 63% 增加到 83%。在相同浓度下，异槲皮素 (50 μM) 作为神经保护药物的效果优于 EGCG [1]。

---

侧柏灌木在韩国和中国被广泛用作草药。在本研究中，对该植物的提取物进行了分级和纯化，分离出七种化合物（杨梅苷、isoquercitrin/异槲皮苷、次油酸甘油酯-7-O-β-d-吡喃木糖苷、槲皮甙、山柰苷、山奈酚和芳樟素）。在这七种化合物中，isoquercitrin/异槲皮苷被发现对减轻培养中RGC-5细胞因暴露于过氧化氢（H2O2）而导致的死亡最有效。研究发现，H2O2对RGC-5细胞的损伤会导致它们因凋亡而死亡，这不仅可以通过对死亡细胞进行磷脂酰丝氨酸染色来证明，还可以通过上调（切割的PARP、AIF、p53）和下调（Bcl-2）与凋亡和存活相关的蛋白来证明。随后的研究表明，异槲皮苷是一种强大的抗氧化剂。它通常清除ROS，这可以通过培养物的染色以及单个自由基物种（H2O2、OH自由基点和O2自由基点−）的产生来证明。此外，异槲皮苷减少了培养的RGC-5细胞中特定自由基物种（H2O2、OH自由基点和O2自由基点−）升高引起的谷胱甘肽（GSH）的耗竭，并减弱了RGC-5电池暴露于H2O2引起的过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶1（Gpx-1）的减少。此外，异槲皮苷能有效减轻一氧化氮引发的大鼠脑匀浆的脂质过氧化，IC50值为1.04μM。由于异槲皮苷口服后可以耐受，因此建议这种物质可能会到达视网膜，因此可能对治疗青光眼有用，其中氧化应激被认为在视网膜神经节细胞的死亡中起着重要作用。[1]

当动物接受异槲皮素时，血液、肺实质和 BALF 中的嗜酸性粒细胞数量减少。仅用异槲皮素治疗的动物表现出血液中性粒细胞计数和肺匀浆的IL-5水平降低。单核细胞的数量没有改变[2]。

---

目的：嗜酸性粒细胞和细胞因子与过敏性疾病的发病机制有关。在本研究中，我们研究了槲皮素和isoquercitrin/异槲皮苷在哮喘小鼠模型中的抗炎作用。
方法：对BALB/c小鼠进行免疫接种（卵清蛋白/氢氧化铝，皮下注射），然后进行两次鼻内卵清蛋白挑战。从第一次免疫后的第18天至第22天，小鼠每天接受isoquercitrin/异槲皮苷（15mg/kg）或槲皮素（10mg/kg）的灌胃。地塞米松（1mg/kg，皮下注射）作为阳性对照。在最后一次卵清蛋白激发后24小时，分析支气管肺泡灌洗液（BALF）、血液和肺实质中的白细胞。在BALF和肺匀浆中分析白细胞介素-5（IL-5）。
结果：在接受异槲皮苷或槲皮素治疗的动物中，BALF、血液和肺实质中的嗜酸性粒细胞计数较低。只有经过isoquercitrin/异槲皮苷处理的小鼠血液中的中性粒细胞计数和肺匀浆中的IL-5水平较低。未观察到单核细胞数量的变化。
结论：槲皮素和isoquercitrin/异槲皮苷是有效的嗜酸性炎症抑制剂，表明其具有治疗过敏的潜力[2]。

细胞活力[2]
使用Mosmann（1983）改进的MTT还原法评估细胞存活率。简而言之，从细胞中取出培养基（在96孔板中），加入100μl含有MTT的新鲜培养基，MTT的终浓度为0.5mg/ml，并在37°C下孵育1小时。然后去除培养基，通过向每个孔中加入100μl DMSO来溶解还原的MTT（蓝色甲赞产物）。在将板搅拌15分钟后，使用分光光度计以570nm测试波长和690nm参考波长测量每个孔中溶解的甲赞产物的光密度。

---

碘化丙啶（PI）和Hoechst 33342分析细胞活力[2]
细胞死亡的特征是在37°C下用8μM Hoechst 33342和1.5μM PI孵育细胞30分钟（Hong等人，2009）。然后用无血清培养基洗涤细胞两次，并在荧光显微镜下检查。

---

活性氧（ROS）的评估[2]
使用染料DHE评估细胞产生ROS的情况（Carter等人，1994）。经过不同处理后，盖玻片上的细胞在37°C的培养基中在加湿室中孵育30分钟，用DHE（10μg/ml）染色，然后用4%多聚甲醛固定20分钟。在Tris磷酸盐缓冲液（PBS）中洗涤后，将盖玻片安装在含1%甘油的PBS中，使用蔡司落射荧光显微镜通过其红色荧光检测ROS。
在这个过程中，自由基物种（H2O2、OH自由基点和O2自由基点−）将非荧光二氯荧光素（DCFH）氧化为荧光二氯荧光（DCF）。细胞用isoquercitrin/异槲皮苷或表没食子儿茶素3-没食子酸酯（EGCG）预处理1小时，然后加入DCFH-DA（10μM），在37°C下继续孵育20分钟。此后，用新鲜培养基替换细胞培养基，向其中加入1 mM H2O2（H2O2自由基）、1 mM H2O2加100μM六水合高氯酸铁（II）（羟基自由基）或1 mM的KO2（O2自由基点−）。在37°C下孵育30分钟后，使用485/535 nm的激发/发射波长测量荧光。

---

脂质过氧化测定[2]
所使用的程序如先前研究所述（Zhang和Osborne，2006）。将Wistar大鼠断头后，立即将大脑皮层在10倍体积的冰冷0.9%盐水（pH 7.0）中均质化，在4°C下以1000×g离心10分钟，上清液用于脂质过氧化测定，通过测定形成的硫代巴比妥酸反应物种（TBARS）的量。简而言之，将等分上清液（0.5ml）在37°C下与0.3ml含有不同浓度isoquercitrin/异槲皮苷或载体的0.9%盐水（pH 7.0）预孵育5分钟。加入0.2 ml 20μM SNP或缓冲液可引发脂质过氧化。在37°C下孵育30分钟后，将试管置于冰上以停止脂质过氧化反应。然后，如Ohkawa等人（1979）所述，通过测量硫代巴比妥酸反应产生的有色产物来测定TBARS，硫代巴比妥酸被认为主要是丙二醛（一种在脂质过氧化过程中形成的化合物）（Ohkawa等，1979）。简而言之，通过依次加入0.2 ml 8.1%w/v十二烷基硫酸钠、1.5 ml 20%v/v乙酸（pH 3.5）和1.5 ml 0.8%w/v硫代巴比妥酸来产生显色反应。将该混合物在沸水浴中温育30分钟。冷却后，加入2 ml正丁醇：吡啶（15:1 v/v），然后将反应混合物在4000×g下离心10分钟。在532 nm波长下测量有机层（管顶部）的吸光度，并使用丙二醛衍生物1,1,3,3-四乙氧基丙烷（1-30 nmol）的标准曲线测定TBARS的量。使用以牛血清白蛋白为标准的双辛可宁酸蛋白测定试剂盒测定全脑匀浆上清液中的蛋白质浓度。

---

蛋白质印迹分析[2]
将RGC-5细胞（2.0×104）接种在60mm2的培养皿中。孵育24小时后，用无血清培养基冲洗培养皿，并在有或没有10μM异槲皮苷的情况下暴露于300μM H2O2中24小时。然后刮除细胞，将其悬浮在裂解缓冲液（1 M Tris pH 7.4、2 M NaCl、1 M EDTA、10%NP40和蛋白酶抑制剂混合物）中，短暂超声处理，并在4°C下以12000×g离心30分钟。然后使用Bio-Rad蛋白质测定试剂盒测定蛋白质含量。

槲皮素和异槲皮苷治疗[2]
为了确定槲皮素和异槲皮苷在小鼠哮喘模型中的治疗效果，采用了以下方案。如上所述，用卵清蛋白免疫（第0天和第7天）和激发（第14天和第21天）的小鼠被随机分为5组，分别命名为Ova-only组（未治疗的小鼠）、Ova+vehicle组（口服丙二醇：水，1:1的小鼠）、Ova+dexamethasone组（皮下注射地塞米松的小鼠）、Ova+isoquercitrin组（口服异槲皮苷的小鼠）和Ova+quercetin组（口服槲皮素的小鼠）。在首次免疫后第18至22天，每天通过灌胃（0.3 mL）向每组小鼠（n = 6）给予等摩尔量的槲皮素（10 mg/kg）或异槲皮苷（15 mg/kg），或溶剂（丙二醇：水，1:1）。另设一组小鼠皮下注射地塞米松（1 mg/kg，0.25 mL），作为抗炎活性的阳性对照。

[1]. Isoquercitrin is the most effective antioxidant in the plant Thuja orientalis and able to counteract oxidative-induced damage to a transformed cell line (RGC-5 cells). Neurochem Int. 2010 Dec;57(7):713-21.

[2]. Anti-inflammatory activity of quercetin and isoquercitrin in experimental murine allergic asthma. Inflamm Res. 2007 Oct;56(10):402-8.

槲皮素 3-O-β-D-呋喃葡萄糖苷是一种槲皮素 O-葡萄糖苷，其中呋喃葡萄糖残基通过 β-糖苷键连接到槲皮素的 3 位。它是一种代谢产物。它是一种β-D-葡萄糖苷、槲皮素O-葡萄糖苷、单糖衍生物和四羟基黄酮。
异槲皮苷正在临床试验NCT04622865（马西替尼联合异槲皮素和最佳支持治疗中重度COVID-19住院患者）中进行研究。
据报道，3-(((2S,3R,4R,5R)-5-((R)-1,2-二羟乙基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)氧基)-2-(3,4-二羟基苯基)-5,7-二羟基-4H-色烯-4-酮存在于茶树（Camellia sinensis）、锦鸡儿（Caragana spinosa）和其他有相关数据的生物体中。
槲皮素3-O-葡萄糖苷是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中发现或产生的代谢物。

---

总之，研究表明，东方菝葜中能减轻H₂O₂对培养的RGC-5细胞负面影响的主要化合物是异槲皮苷。异槲皮苷的神经保护作用似乎主要与其抗氧化特性有关。许多其他黄酮类化合物（例如EGCG、黄芩苷）也具有强大的抗氧化活性，人们已尝试探究不同黄酮类化合物的结构与其抗氧化活性之间是否存在关联（Dugas et al., 2000; Lien et al., 1999; Rice-Evans et al., 1996）。异槲皮苷之所以具有如此强大的抗氧化活性，一个可能的原因是其B环上含有儿茶酚基团，这有利于其更好地供电子，从而实现有效的金属螯合和电子离域（Yang et al., 2001）。然而，值得注意的是，黄酮类化合物具有多种功能，其中一些没有明显的抗氧化活性（例如染料木素）。东方菝葜独特的药用特性使其能够成功治疗痛风、风湿病、腹泻和慢性气管炎等疾病（Zhu et al., 2004），这无疑部分与其成分异槲皮苷有关。由于异槲皮苷可以口服，并且可能穿过血脑屏障到达视网膜（Paulke et al., 2008; Paulke et al., 2006），因此，将其用于治疗青光眼以减轻神经节细胞死亡无疑值得考虑。[1]

---

多种药理学试剂，例如血小板活化因子（PAF）受体拮抗剂和5-脂氧合酶抑制剂，已被证明对体内嗜酸性粒细胞的聚集具有抑制作用。此外，已有研究表明，槲皮素和异槲皮苷分别能降低小鼠哮喘模型中血小板活化因子（PAF）和白三烯诱导的支气管收缩。因此，槲皮素和异槲皮苷可能抑制细胞内PAF和白三烯的产生。本研究结果表明，槲皮素和异槲皮苷均能减轻小鼠哮喘模型中的炎症反应。本文所述的效应以及其他研究者观察到的效应，结合这些物质广泛的生物学效应，强烈提示槲皮素和异槲皮苷具有治疗哮喘和其他过敏性疾病的潜力。因此，对这两种物质的研究可能有助于开发有效的抗哮喘疗法或发现新的抗哮喘靶点。[2]

C21H20O12

464.3763

464.095

C, 54.32; H, 4.34; O, 41.34

21637-25-2

482-35-9 (EMIQ); 482-35-9 (Isoquercetin); 17-39-5 (quercetin); 21637-25-2 (Isoquercitrin)

5484006

Off-white to yellow solid powder

1.9±0.1 g/cm3

872.6±65.0 °C at 760 mmHg

225-227°

307.5±27.8 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.803

1.75

210.51

8

12

5

33

758

5

C1=CC(=C(C=C1C2=C(C(=O)C3=C(C=C(C=C3O2)O)O)O[C@H]4[C@@H]([C@H]([C@H](O4)[C@@H](CO)O)O)O)O)O

OPJZLUXFQFQYAI-GNPVFZCLSA-N

InChI=1S/C21H20O12/c22-6-12(27)19-16(29)17(30)21(32-19)33-20-15(28)14-11(26)4-8(23)5-13(14)31-18(20)7-1-2-9(24)10(25)3-7/h1-5,12,16-17,19,21-27,29-30H,6H2/t12-,16-,17-,19-,21+/m1/s1

3-[(2S,3R,4R,5R)-5-[(1R)-1,2-dihydroxyethyl]-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]oxy-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxychromen-4-one

21637-25-2; Isotrifolin; Isoquercitroside; 0YX10VRV6J; CCRIS 7093; 3,3',4',5,7-Pentahydroxyflavone 3-beta-D-glucofuranoside; EINECS 244-488-5; quercetin 3-O-beta-D-glucofuranoside;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~269.18 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。