JD5037

Bcl-1 ( IC50 = 1.5 nM )
JD5037 acts on cannabinoid-1 receptor (CB₁R) as a peripherally restricted antagonist [1]
JD5037 targets cannabinoid-1 receptor (CB₁R) (peripherally restricted antagonist) [2]
JD5037 is a peripheral CB₁R antagonist [3]

JD5037 是外周限制性 (PR) 大麻素 1 (CB1) 受体的反向激动剂，Ki 为 0.35 nM。大麻素 1 (CB1) 受体的拮抗剂（反向激动剂）有望成为控制肥胖和相关代谢功能/肝脏疾病的新疗法。这些药物代表了不同的化学系列，由于最初认为治疗效果主要基于脑受体相互作用，因此具有脑渗透特性。 JD5037 对 CB1 的选择性比 CB2 高 700 倍，对 70 种受体、转运蛋白和离子通道的选择性高 1,000 倍，并且血脑屏障渗透率低。JD5037 具有口服生物利用度，可减少食物摄入、身体饮食诱导的肥胖小鼠的体重和激素/代谢异常。

JD5037（3 mg/kg/天，口服）可显着减小 DEN 治疗小鼠的肿瘤大小并消除肿瘤。 JD5037 降低小鼠 HCC 样本中的 AEA 水平。 JD5037（3 mg/kg/d，腹腔注射）可诱导肥胖 Magel2 缺失小鼠的体重同等降低，减轻 HFD 诱导的高血糖，并减少 HFD 诱导的肝损伤和脂肪变性.

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外周限制性CB1R阻断逆转Magel2缺失小鼠的肥胖及其代谢异常[2]
与全局CB1R敲除小鼠一样，在含有CaMKIIa的神经元中选择性遗传缺失或CB1R下调的动物是瘦的，对HFD诱导的肥胖有抵抗力。这些发现表明，下丘脑中的CB1R是肥胖发展所必需的。然而，这并不能否定外周CB1R在逆转肥胖中的作用，因为全局作用的CB1R阻断可以降低肥胖小鼠的体重，但不会降低瘦小鼠的体重。外周限制性CB1R拮抗剂可以改善DIO小鼠的肥胖及其相关代谢异常。因此，我们决定测试外周限制性CB1R拮抗剂JD5037治疗Magel2无效小鼠肥胖的疗效。为了进一步增强他们的肥胖表型，我们给这两种基因型喂食HFD 12周，然后开始每天用JD5037（3mg/kg/d，i.p.）治疗28天。两种基因型的男性和女性在HFD条件下都出现了肥胖（补充图2G，H），脂肪量增加（补充图2I，J），瘦体重没有重大变化（补充图2K，L）。与STD上的Magel2无效小鼠一样（补充图2A，B），雌性敲除动物的体重增加更为明显（补充图2G，H）。[2]
由于全局作用的CB1R拮抗剂利莫那班降低了PWS患者的体重并改善了其代谢特征，我们将JD5037与其脑渗透母体化合物SLV319的效果进行了比较。JD-5037和SLV319均能诱导体重（图4A-D）和脂肪量（图4E，G）的等量减少。基因型和性别的瘦体重没有发生重大变化（图4F，H）。喂食HFD的Magel2无效小鼠是高食欲的，与野生型同窝小鼠相比，它们消耗的食物量明显更多（图4I，K）。这两种拮抗剂都导致了食物消耗的同等减少。用JD5037和SLV319治疗的Magel2-null小鼠体重正常化可能是由于高瘦素血症的逆转（图4J，L），从而提高了瘦素敏感性，而不是因为JD5037在Magel2-nnlull小鼠中的脑外显率增加，这反映在两种品系的脑/血浆浓度比均<2%（补充图3A，B）。根据HOMA-IR和胰岛素敏感性指数（图5I-L）在小鼠基因型和性别中的测量，这两种化合物在使血糖（图5A，C）和血清胰岛素（图5B，D）水平正常化以及减轻葡萄糖不耐受（图5E-H）和胰岛素抵抗方面也同样有效

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外周限制性CB1R阻断逆转肝细胞损伤和肝脂肪变性的能力也得到了同样的改善，表现为ALT（图6A，B）、AST（图6C，D）和肝脏TG含量（图6E，F）的血清水平降低，以及血清胆固醇水平升高的降低（图6G，H）。如前所述，JD5037在两种菌株中都在肝脏中积累（补充图3C），这一效应可能解释了其在逆转肝脂肪变性方面的高效性。有趣的是，这两种化合物都没有使Magel2无效小鼠的HDL与LDL胆固醇比率正常化（图6I，J）。在雄性和雌性Magel2缺失小鼠及其同窝对照中的间接量热法显示，用JD5037治疗的动物的TEE（图7A，B）、自主活动（图7C，D）、FO（图7E，F）和CHO（图7G，H）也有类似的增加。综上所述，这些发现表明，阻断外周CB1R可以逆转肥胖，减少食欲亢进，并改善肥胖Magel2缺失小鼠的代谢结果。

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小鼠和人肝细胞癌内源性大麻素/CB1R系统的激活[3]
CB1R在CB1R+/+小鼠的HCC中很容易通过免疫组织化学检测到，但在邻近的正常肝组织中几乎检测不到（图2A）。CB1R染色的特异性通过阻断肽消除或在CB1R−/-小鼠肝脏中消除来验证。与载体处理的相邻非肿瘤组织相比，CB1R mRNA在HCC中同样增加，但在JD5037处理的小鼠中没有增加（图2B）。CB1R免疫印迹在蛋白质水平上显示出类似的变化模式（图2C）。此外，与非肿瘤组织相比，CB1R+/+小鼠的肿瘤含有更多的anandamide（AEA），JD5037治疗小鼠的HCC样本中的AEA水平降低。CB1R−/-小鼠的非肿瘤组织与HCC组织中的AEA含量没有差异（图2D）。肿瘤中AEA的增加可能是由于合成的增加，如小鼠和人类HCC组织中AEA生物合成酶N-核糖基磷脂酰乙醇酰胺特异性磷脂酶D（NAPE-PLD）表达的增加所示（图S1）。

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JD5037（3 mg/kg/天，连续28天）可降低高脂饮食（HFD）诱导的肥胖Magel2基因敲除小鼠（普拉德-威利综合征代谢表型模型）的体重，逆转贪食症，减少脂肪量（不影响瘦体重），恢复食物摄入量和血清瘦素水平；同时可改善该模型小鼠（雌雄均有）的高血糖、高胰岛素血症、糖耐量异常，降低胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、提升胰岛素敏感性，降低血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）水平及肝脏甘油三酯（TG）含量，恢复血清胆固醇水平（但无法恢复HDL/LDL比值），并增加总能量消耗（TEE）、自主活动量、脂肪氧化（FO）和碳水化合物氧化（CHO）[2]
- 对二乙基亚硝胺（DEN）诱导的野生型肝癌小鼠，从8月龄至10月龄给予JD5037（3 mg/kg/天），经磁共振成像（MRI）监测显示，药物可显著减少小鼠肝细胞癌（HCC）的总肿瘤面积[3]

JD-5037 是一种新型外周限制性 CB1R 拮抗剂，IC50 为 1.5 nM。

小鼠：JD-5037 配制于溶剂（V；Tween80 = 1% DMSO + 95% 生理盐水）中。将 JD5037、SLV319 或溶剂（V；1% Tween80、4% DMSO、95% 生理盐水）以 3 mg/kg 的剂量，经口给予肥胖小鼠，疗程为 28 天。每日记录小鼠的食物摄入量和体重。在小鼠镇静状态下，采用颈椎脱臼法处死小鼠；取出脑、下丘脑、肝脏和脂肪垫，称重后冷冻保存；采集躯干血以测量生化和内分泌指标[2]。

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\n\n动物和实验方案[2]
\n\nMagel2基因敲除小鼠（C57BL/6-Magel2tm1Stw/J）在C57BL/6J背景下至少饲养了15代，并按照先前描述的方法进行基因分型。携带父系遗传的lacZ敲入等位基因的小鼠Magel2功能缺失，被称为Magel2基因敲除小鼠；Magel2野生型同窝小鼠用作对照。实验使用6至22周龄的雄性和雌性小鼠，饲养于12小时光照/12小时黑暗循环条件下，并自由采食。为了构建DIO小鼠（体重>42 g），将两种基因型的小鼠分别喂食高脂饮食（HFD）（60%的能量来自脂肪，20%来自蛋白质，20%来自碳水化合物）或标准饮食（STD，NIH-31啮齿动物饲料），持续12周。在HFD或STD喂养期间，每周记录一次体重，并每四周使用EchoMRI-100评估一次体成分。一旦小鼠达到肥胖状态，便对其进行慢性（28天）治疗，分别腹腔注射载体（V；1% Tween80，4% DMSO，95%生理盐水）、JD5037（J）或SLV319（S），剂量为3 mg/kg。年龄匹配的对照组小鼠喂食STD，并接受载体治疗。在治疗期间，每日监测小鼠的体重和食物摄入量。小鼠在麻醉状态下通过颈椎脱臼处死。取出脑、下丘脑、肝脏和脂肪垫，称重后速冻，并采集躯干血用于测定内分泌和生化参数。\n

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\n\nJD5037 的组织浓度[2]
\n\n小鼠单次腹腔注射（3 mg/kg）JD5037，1 小时后处死。采集血液，并用磷酸盐缓冲液（PBS）灌注小鼠 1 分钟以清除血管内药物，然后取出脑和肝脏。提取组织和血清，并按照先前描述的方法（略有修改）通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定药物浓度。分析在配备 Dionex 泵和 Accela 自动进样器的 TSQ Quantum Access Max 三重四极杆质谱仪上进行。采用Kinetex™色谱柱（C18，2.6 μm粒径，100 Å孔径，50 × 2.1 mm）进行分离。梯度洗脱流动相由0.1%甲酸水溶液（A相）和0.1%甲酸乙腈溶液（B相）组成。梯度洗脱（0.25 mL/min）程序如下：20% B相保持0.7 min，然后线性增加至80% B相保持0.8 min，并保持80% B相5.5 min，再线性增加至95% B相保持0.3 min，并保持95% B相2.7 min。采用电喷雾电离（ESI）正离子模式和多反应监测（MRM）模式检测JD5037。质谱仪参数设置如下：喷雾电压5000 V；汽化器温度 350 °C；毛细管温度 250 °C；鞘气和辅助气分别为 35 和 10 个任意单位；碰撞气为氩气。[2]
\n\n\n使用 [2H4]花生四烯酸乙醇胺 ([2H4]AEA) 作为内标分析 JD5037 的含量。各化合物的分子离子和碎片离子测定如下：JD5037 的 m/z 572 → 555（定量离子）和 572 → 111（定性离子）（碰撞能量分别为 17 V 和 49 V），[2H4]AEA 的 m/z 352 → 66（定量离子）和 352 → 91（定性离子）（碰撞能量分别为 30 V 和 45 V）。使用 TSQ Tune 软件优化调谐参数。数据采集和处理使用 Xcalibur 程序进行。样品中 JD5037 的含量根据标准曲线确定。数值分别以湿组织重量或血清体积的 ng/g 或 ng/mL 表示。\n

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\n小鼠饲养于 12 小时光照/黑暗循环条件下，自由摄取标准啮齿动物饲料和水。两周龄雄性 CB1R+/+ 和 CB1R−/− 小鼠腹腔注射 25 mg/kg 二乙基亚硝胺，并在 8 个月后进行 MRI 检查，以验证肿瘤的存在并测量其大小。随后，对经 DEN 处理的 CB1R+/+ 小鼠进行外周 CB1R 拮抗剂 JD5037（3 mg/kg/天，灌胃）或载体处理 8 周，之后重复进行 MRI 扫描，然后处死小鼠以获取 HCC 和邻近的非肿瘤组织进行体外分析。[3]

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\n对于 Prader-Willi 综合征肥胖模型：将肥胖的 Magel2 基因敲除小鼠和野生型同窝对照小鼠连续 28 天以 3 mg/kg/天的剂量给予 JD5037 治疗（给药途径未指定）；在 21 周龄时，采用间接测热法测量 24 小时内的能量代谢参数（TEE、FO、CHO）；评估体重、脂肪/瘦体重、食物摄入量、血清瘦素、葡萄糖、胰岛素、ALT、AST、胆固醇水平、肝脏 TG 含量和自愿活动（跑轮运动）；评估葡萄糖耐量和胰岛素敏感性以确定代谢表型[2]
\n- 对于HCC模型：用出生后二乙基亚硝胺（DEN）处理诱导HCC的野生型小鼠，从8至10月龄开始，每天以3 mg/kg的剂量给予JD5037（给药途径未具体说明）；采用连续磁共振成像（MRI）监测和量化体内肿瘤面积；使用CB1R基因敲除（CB1R⁻/⁻）小鼠作为对照组，比较肿瘤进展[3]

JD5037 是一种外周限制性 CB₁R 拮抗剂，脑渗透性很差 [1]

[1]. Peripherally restricted CB1 receptor blockers. Bioorg Med Chem Lett. 2013 Sep 1;23(17):4751-60.

[2]. Targeting the endocannabinoid/CB1 receptor system for treating obesity in Prader-Willi syndrome. Mol Metab. 2016 Oct 22;5(12):1187-1199.

[3]. Cannabinoid receptor 1 promotes hepatocellular carcinoma initiation and progression through multiple mechanisms. Hepatology. 2015 May;61(5):1615-26.

患有普拉德-威利综合征（PWS）的个体血液循环中2-花生四烯酸甘油酯及其内源性前体和分解配体花生四烯酸的水平升高。下丘脑内源性大麻素（eCB）“张力”增强（表现为eCBs增加和CB1受体上调）与Magel2基因敲除小鼠的脂肪量增加、能量消耗减少和自主活动减少相关。对肥胖的Magel2基因敲除小鼠及其同窝野生型对照小鼠每日进行JD5037（3 mg/kg/d，持续28天）慢性治疗，可降低体重、逆转过度摄食，并改善与肥胖表型相关的代谢参数。[1]大麻素-1（CB1）受体拮抗剂（反向激动剂）有望成为控制肥胖及相关代谢功能/肝脏疾病的新疗法。这些药物代表了不同的化学系列，由于最初认为治疗效果主要基于与脑受体的相互作用，因此它们都具有脑穿透性。然而，该类药物中唯一上市的利莫那班（rimonabant）由于其不良的中枢神经系统（CNS）副作用而被撤市，其他临床候选药物的研发也随之终止。对这一策略的重新评估主要集中在中性或外周限制性（PR）拮抗剂上。药理学证据表明，即使脑内分布极少的分子也能保留大部分（如果不是全部）全身作用药物的特性，这为上述策略提供了支持。本文讨论了可用于消除血脑屏障（BBB）穿透的方法，以及用于识别脑内分布极少的潜在药物的手段（体外试验、组织分布和受体占有率测定、行为学范式）。重点将放在支持已报道药物确实具有外周限制性这一论点的药理学证据上。此类化合物的典型例子包括：TM38837（结构未公开）；AM6545 (8)；JD5037 (15b)；RTI-12 (19)。[2]

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肝细胞癌（HCC）死亡率高，且目前尚无有效的治疗方法。内源性大麻素与肝脏大麻素1受体（CB1R）相互作用，通过诱导参与有丝分裂进程的细胞周期蛋白（包括Forkhead Box M1）来促进肝细胞增殖，从而促进肝脏再生。由于该蛋白在肝细胞癌（HCC）中高表达，并参与其发生和发展，我们分析了内源性大麻素/CB1R系统在小鼠和人类HCC中的作用。在野生型小鼠中，出生后给予二乙基亚硝胺（DEN）治疗可在8个月内诱发HCC，但在CB1R敲除（CB1R^-/-）小鼠或接受外周CB1R拮抗剂JD5037治疗的野生型小鼠中，肿瘤数量较少且体积较小，这些结果通过连续磁共振成像在体内监测得到证实。全基因组转录组分析揭示了 CB1R 依赖性肿瘤诱导的肝脏 CB1R、其内源性配体花生四烯酸乙醇胺以及许多促肿瘤基因（包括 GRB2 相互作用组以及 Forkhead Box M1 及其下游靶标——色氨酸催化酶吲哚胺 2,3-双加氧酶）表达上调。肿瘤组织中吲哚胺2,3-双加氧酶活性的增加以及由此导致的免疫抑制性T调节细胞的诱导可促进免疫耐受。[3]

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JD5037是一种外周限制性CB₁R拮抗剂，其开发目的是为了避免全身作用的CB₁R拮抗剂（例如利莫那班）引起的中枢神经系统神经精神不良反应。[1]
- 内源性大麻素/CB₁R系统的失调会导致Magel2基因敲除小鼠和普拉德-威利综合征（PWS）患者的过度摄食和肥胖；JD5037作为一种外周限制性CB₁R拮抗剂，是治疗PWS严重肥胖的潜在有效策略。[2]
- 内源性大麻素/CB₁R系统在化学诱导的小鼠肝细胞癌和人类肝细胞癌中均上调； JD5037通过阻断CB₁R抑制HCC生长，其机制是通过减弱促肿瘤基因（例如FOXM1、IDO2）的上调以及T调节细胞诱导的免疫耐受[3]

C27H27CL2N5O3S

572.505

571.121

C, 56.65; H, 4.75; Cl, 12.38; N, 12.23; O, 8.38; S, 5.60

1392116-14-1

1392116-14-1

66553204

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

731.3±70.0 °C at 760 mmHg

396.1±35.7 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.662

4.58

126

2

5

9

38

977

2

ClC1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C1[C@@]([H])(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])C([H])([H])N(/C(/N([H])S(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])Cl)(=O)=O)=N\[C@]([H])(C(N([H])[H])=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])N=1

GTCSIQFTNPTSLO-RPWUZVMVSA-N

InChI=1S/C27H27Cl2N5O3S/c1-17(2)24(26(30)35)31-27(33-38(36,37)22-14-12-21(29)13-15-22)34-16-23(18-6-4-3-5-7-18)25(32-34)19-8-10-20(28)11-9-19/h3-15,17,23-24H,16H2,1-2H3,(H2,30,35)(H,31,33)/t23-,24+/m1/s1

(2S)-2-[[[(4S)-5-(4-chlorophenyl)-4-phenyl-3,4-dihydropyrazol-2-yl]-[(4-chlorophenyl)sulfonylamino]methylidene]amino]-3-methylbutanamide

JD-5037; JD 5037; ENZ75DG2Z6; CHEMBL2153670; (2S)-2-[[[(4S)-5-(4-chlorophenyl)-4-phenyl-3,4-dihydropyrazol-2-yl]-[(4-chlorophenyl)sulfonylamino]methylidene]amino]-3-methylbutanamide; (S)-2-((((S)-3-(4-Chlorophenyl)-4-phenyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-yl)(4-chlorophenylsulfonamido)methylene)amino)-3-methylbutanamide; Butanamide, 2-((((4S)-3-(4-chlorophenyl)-4,5-dihydro-4-phenyl-1H-pyrazol-1-yl)(((4-chlorophenyl)sulfonyl)amino)methylene)amino)-3-methyl-, (2S)-; JD5037

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 100~250 mg/mL ( 174.7~436.7 mM）
Water: Insoluble
Ethanol: < 2 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (4.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 27.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.75 mg/mL (4.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 27.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。