rat Y2 receptor ( pIC50 = 8.22 ); human Y2 receptor ( pIC50 = 8.07 )
- Neuropeptide Y Y2 receptor (Y2R) (Ki = 0.7 nM for human Y2R; Ki = 0.6 nM for rat Y2R) [1]
- No significant binding to other neuropeptide Y receptors (Y1R, Y4R, Y5R) at concentrations up to 10 μM [1]

The target of JNJ-31020028 is the neuropeptide Y Y(2) receptor. It binds to human Y(2) receptors in KAN-Ts cells with a pIC₅₀ value of 8.07 ± 0.05, and to rat Y(2) receptors in rat hippocampus with a pIC₅₀ value of 8.22 ± 0.06. It shows >100-fold selectivity over human Y(1), Y(4), and Y(5) receptors[1]

体外活性：JNJ-31020028是一种有效的、选择性的、脑渗透性的神经肽Y(2)受体小分子拮抗剂，pIC50=8.07（人）； pIC50=8.22（大鼠）；它的选择性是人类 Y1/Y4/Y5 受体的 100 倍以上。 JNJ-31020028 以高亲和力结合（pIC(50) = 8.07 +/- 0.05，人类，pIC(50) = 8.22 +/- 0.06，大鼠），并且选择性是人类 Y(1)、Y 的 100 倍以上(4)和Y(5)受体。在功能测定中，JNJ-31020028 被证明是一种拮抗剂 (pK(B) = 8.04 +/- 0.13）。 JNJ-31020028 在大鼠皮下给药后占据 Y(2) 受体结合位点（10 mg/kg 时约 90%）。 JNJ-31020028 增加下丘脑去甲肾上腺素的释放，与去甲肾上腺素和神经肽 Y 的共定位一致。在各种焦虑模型中，JNJ-31020028 被发现无效，尽管它确实阻止了应激引起的血浆皮质酮升高，且不改变基础水平，以及应激动物的正常食物摄入量，而不影响基础食物摄入量。激酶测定：在功能测定中，JNJ-31020028 被证明是一种拮抗剂 (pK(B) = 8.04 +/- 0.13）。

---

1. 亲和力测定：通过检测JNJ-31020028对PYY与人Y(2)受体（KAN-Ts细胞中）及大鼠Y(2)受体（大鼠海马体中）结合的抑制能力，评估其亲和力。结果显示，该药物对人Y(2)受体和大鼠Y(2)受体均具有高亲和力，pIC₅₀值分别为8.07±0.05（人）和8.22±0.06（大鼠）[1]
2. 功能活性评估：通过检测JNJ-31020028对PYY刺激的钙反应的抑制能力，确定其功能活性。在表达嵌合G蛋白Gqi5的KAN-Ts细胞中，该药物表现出拮抗活性；在大鼠输精管（典型的Y(2)生物测定系统）中，同样显示出拮抗作用，pK(B)值为8.04±0.13[1]

- Y2R拮抗作用：JNJ-31020028作为Y2R的选择性竞争性拮抗剂。在表达人Y2R的细胞功能实验中，它以pA2值9.6阻断NPY诱导的cAMP积累抑制，表明其强大的拮抗活性 [1]
- 受体选择性：在结合实验中，JNJ-31020028对Y1R（Ki > 10 μM）、Y4R（Ki > 10 μM）和Y5R（Ki > 10 μM）的亲和力可忽略不计，证实其对Y2R的高选择性 [1]
JNJ-31020028 在大鼠皮下给药后占据 Y(2) 受体结合位点（10 mg/kg 时约 90%）。 JNJ-31020028 在大鼠皮下给药后占据 Y(2) 受体结合位点（10 mg/kg 时约 90%）。 JNJ-31020028 的全身给药（0、15、30 和 40 mg/kg，皮下 [sc]）和脑室内（0.0、0.3 和 1.0 nmol/大鼠）给药均不会影响酒精强化的杠杆按压或酒精寻求行为的复发压力暴露后。 JNJ-31020028（15 mg/kg，皮下注射）确实逆转了在高架十字迷宫上单次推注酒精戒断后的焦虑作用，证实了 NPY Y2 拮抗作用的抗焦虑样特性。长期施用 JNJ-31020028 会导致 OBX 强迫游泳测试中不动时间减少，而对对照动物则没有影响。

---

1. 受体占据率：对大鼠进行皮下注射JNJ-31020028后，通过体外受体放射自显影技术发现，该药物可占据Y(2)受体结合位点。在10mg/kg剂量下，占据率约为90%[1]
2. 对去甲肾上腺素释放的影响：微透析实验表明，JNJ-31020028可增加大鼠下丘脑内去甲肾上腺素的释放，这与去甲肾上腺素和神经肽Y的共定位现象一致[1]
3. 在焦虑模型中的作用：在多种大鼠焦虑模型中对JNJ-31020028进行测试，结果发现该药物在缓解焦虑相关行为方面无效[1]
4. 对皮质酮释放的影响：JNJ-31020028能够阻断应激诱导的大鼠血浆皮质酮水平升高，且不改变基础皮质酮水平[1]
5. 对食物摄入的影响：在应激状态下的动物中，JNJ-31020028可使食物摄入恢复正常，同时不影响基础食物摄入量[1]

在功能测定中，JNJ-31020028被证明是一种拮抗剂（pK（B）=8.04+/-0.13）。
放射性配体结合试验[1]
如前所述（Bonaventure等人，2004），使用[125I]PYY对Y1、Y2和Y5受体进行竞争结合测定，使用[126I]PP对Y4受体进行竞争性结合测定。用于NPY受体亚型放射配体结合实验的细胞是内源性表达Y1受体的SK-N-MC、内源性表达Y2受体的KAN-Ts、转染有Y4受体的人Y4 cDNA的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞和转染有Y5受体的人YY5 cDNA的HEK-293。如前所述（Bonaventure等人，2004），还制备了大鼠和小鼠海马体的膜，并测定了[125I]PYY结合。使用GraphPad Prism软件 计算IC50值（即竞争与放射性配体特异性结合50%所需的未标记拮抗剂的浓度），并拟合S形剂量-反应曲线。数据以pIC50值表示，其中pIC50=−log IC50。 此外，在多种离子通道、转运蛋白、受体结合和激酶测定中评估了JNJ-31020028的选择性。

---

- Y2R结合实验：将表达人或大鼠Y2R的细胞膜与[¹²⁵I]标记的NPY和JNJ-31020028（0.001–1000 nM）在25°C孵育90分钟。通过过滤分离结合的放射性配体，使用非线性回归从置换曲线计算Ki值 [1]
- cAMP功能实验：表达人Y2R的细胞用JNJ-31020028（0.01–1000 nM）预处理30分钟，然后在毛喉素（增加cAMP基线）存在下用NPY（100 nM）刺激。使用竞争性免疫测定法测量cAMP水平，并确定pA2值（拮抗效力的量度）[1]

---

1. 用于Y(2)受体亲和力检测的PYY结合抑制实验：为测定JNJ-31020028对Y(2)受体的亲和力，实验采用表达人Y(2)受体的KAN-Ts细胞和含有大鼠Y(2)受体的大鼠海马组织。实验中使用能与Y(2)受体结合的配体PYY，将不同浓度的JNJ-31020028加入反应体系，检测其对PYY与Y(2)受体结合的抑制程度。根据抑制曲线计算pIC₅₀值（即JNJ-31020028抑制50%PYY结合浓度的负对数），以此评估该药物对人及大鼠Y(2)受体的亲和力[1]
2. 用于Y(2)受体功能活性检测的钙反应抑制实验：为评估JNJ-31020028作为Y(2)受体拮抗剂的功能活性，实验采用表达嵌合G蛋白Gqi5和人Y(2)受体的KAN-Ts细胞。向这些细胞中加入PYY以刺激钙反应，随后加入不同浓度的JNJ-31020028，监测钙反应的变化。通过分析JNJ-31020028对PYY刺激的钙反应的抑制能力，计算pK(B)值以表征其拮抗效力。此外，还利用已知表达Y(2)受体且作为典型Y(2)生物测定系统的大鼠输精管进行实验，向大鼠输精管施加PYY以诱导反应，加入JNJ-31020028观察其对这些PYY诱导反应的抑制作用，进一步证实其在Y(2)受体上的功能性拮抗活性[1]

钙动员试验[1]
如前所述，通过在内源性表达Y2受体的KAN-Ts细胞中稳定表达嵌合G蛋白Gqi9，建立了钙动员试验（Dautzenberg 2005）。简而言之，将负载染料的细胞铺在96孔ViewPlates上，在37°C、5%CO2下孵育1小时。为了测定拮抗剂效力，在激动剂（PYY 10 nM）刺激前，将细胞与化合物（在Dulbecco改良的Eagle培养基/F-12中稀释）预孵育10分钟。使用荧光成像板阅读器测量配体诱导的钙释放。功能反应以峰值荧光强度减去基础荧光强度进行测量。产生半最大反应的激动剂浓度由EC50值表示。使用改良的Cheng-Prusoff校正将拮抗效力值转换为表观pKB值。表观pKB=−log IC50/1+[浓度激动剂/EC50]。数据表示为平均值±SEM。

---

受体选择性筛选：将表达Y1R、Y4R或Y5R的细胞膜与各自的放射性标记配体和JNJ-31020028（高达10 μM）孵育。过滤后测量结合的放射性，以评估与其他NPY受体的交叉反应性 [1]

---

1. 用于Y(2)受体亲和力检测的KAN-Ts细胞实验：将表达人Y(2)受体的KAN-Ts细胞在适宜条件下培养。向细胞中加入不同浓度的JNJ-31020028以及固定浓度的Y(2)受体配体PYY。经过一定时间孵育后，去除未结合的PYY，采用合适的检测方法检测与KAN-Ts细胞上Y(2)受体结合的PYY量。根据所得数据绘制结合抑制曲线，计算出pIC₅₀值（8.07±0.05），从而确定JNJ-31020028对人Y(2)受体的亲和力[1]
2. 用于Y(2)受体功能活性（钙反应）检测的KAN-Ts细胞实验：对KAN-Ts细胞进行转染，使其同时表达嵌合G蛋白Gqi5和人Y(2)受体。培养转染后的细胞，并加载钙敏感染料以监测细胞内钙水平。首先测定基础钙水平，然后向细胞中加入PYY刺激Y(2)受体，导致细胞内钙水平升高，这一变化可通过钙敏感染料的荧光强度变化检测到。在确定PYY诱导的钙反应后，向细胞培养体系中加入不同浓度的JNJ-31020028，记录在药物存在下PYY刺激的钙反应变化。对数据进行分析，以确定JNJ-31020028抑制PYY刺激的钙反应的能力，并计算pK(B)值（8.04±0.13），评估其在Y(2)受体上的拮抗功能活性[1]

溶于 20% 2-羟丙基-β-环糊精溶液中用于全身治疗[2]；或溶于 1% DMSO 和无菌生理盐水中用于脑室内研究[2]；
\n0、15、30 和 40 mg/kg，皮下注射大鼠[嗅球切除 (OBX) 大鼠]

---

\n\n离体受体占有率[1]
\n\n雄性 Sprague-Dawley 大鼠 (300–350 g) 皮下注射赋形剂或JNJ-31020028（每剂量三只动物，每个时间点三只动物）。 JNJ-31020028的配制浓度为1–15 mg/ml，溶剂为40% 2-羟丙基-β-环糊精或5% Pharmasolve、19% 2-羟丙基-β-环糊精，给药剂量为1或2 ml/kg。给药后不同时间点，使用二氧化碳对动物实施安乐死，并收集脑组织。\n\n按照先前描述的方法（Bonaventure等人，2004）对脑组织切片进行离体受体结合放射自显影分析。收集下丘脑区域水平的20微米厚冠状切片，并按照体外放射自显影部分所述方法进行孵育，但有以下修改：切片在孵育前不进行洗涤，并在1 μM BIBP-3226（R-N2-(二苯乙酰基)-N-(4-羟基苯基)-甲基精氨酰胺）存在下，与100 pM [125I]PYY孵育10分钟，以阻断Y1受体。[1]

---

\n\n药代动力学和生物分析[1]
\n\n使用一组9只雄性Sprague-Dawley大鼠（每种给药途径3只，约400克）。在急性单次口服、皮下和静脉注射给药后，测定JNJ-31020028的药代动力学参数。口服给药时，JNJ-31020028的配制浓度为5 mg/ml，溶于40%磺丁基醚-β-环糊精中，给药剂量为2 ml/kg。皮下注射给药时，JNJ-31020028的配制浓度为10 mg/ml，溶于40%磺丁基醚-β-环糊精中，给药剂量为1 ml/kg。静脉注射给药时，JNJ-31020028的配制浓度为1 mg/ml，溶于40%磺丁基醚-β-环糊精中，给药剂量为1 ml/kg。从尾侧静脉采集250 μl血液样本，注入肝素化的Natelson采血管中，然后转移至1.5 ml微量离心管中。血液样本在微型离心机中以 18,000×g 的转速离心 5 分钟。收集血浆并保存在 -20°C 的冰箱中，直至进行液相色谱-质谱联用 (LC-MS)/MS 分析。\n[1]

---

\n\n- 大鼠食物摄入拮抗研究：雄性大鼠禁食过夜后，经中枢注射 NPY(3-36)（一种 Y2 受体激动剂）以抑制食物摄入。30 分钟后，大鼠接受 JNJ-31020028（0.1–1 mg/kg，静脉注射）或载体。分别在治疗后 1、2 和 4 小时测量食物摄入量 [1]
\n\n- 小鼠高架十字迷宫试验：雄性小鼠在进入高架十字迷宫前 60 分钟口服给予 JNJ-31020028（10–30 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素）或赋形剂。记录小鼠在开放臂和封闭臂停留 5 分钟的时间，以评估焦虑样行为 [1]
\n\n- 大鼠药代动力学研究：大鼠接受 JNJ-31020028（1 mg/kg，静脉注射或口服），并在给药后 0.25、0.5、1、2、4 和 8 小时采集血液/脑组织样本。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 测定药物浓度，以确定脑渗透性和血浆动力学 [1]
\n \\n\\n\\n\\n\\n

\\n

查看更多

\\n

\\n微透析和高效液相色谱法[1]
\n\\n雄性Sprague-Dawley大鼠（查尔斯河实验室；220–275 g）接受立体定位手术植入引导套管（Eicom，将脑组织（日本）导入覆盖下丘脑背内侧部、腹内侧部和弓状核的区域（前后方向-3.6 mm，内外侧方向1.0 mm，背腹方向-6.5 mm；Paxinos和Watson，1997）。术后至少恢复3天后，将微透析探针（有效长度3 mm，截留分子量50 kDa）插入引导套管，并以1 μl/min的流速灌注人工脑脊液（147 mM NaCl、4 mM KCl、0.85 mM MgCl2、2.3 mM CaCl2）。次日，通过馏分收集器收集30分钟的样品至含有7.5 μl抗氧化剂（0.1 M乙酸、1 mM草酸、3 mM L-半胱氨酸）的试管中。微透析在动物笼内进行，光照周期内，食物和水自由摄取。采集6个基线样本后，注射JNJ-31020028（3–20 mg/kg，皮下注射）或赋形剂（5% Pharmasolve，19% 2-羟丙基-β-环糊精，1 ml/kg），并额外采集8个样本。实验结束时，用二氧化碳处死大鼠，取出脑组织，冷冻后切片，以验证探针位置是否正确。使用高效液相色谱-电化学检测法（+450 mV）分析透析液样本中的去甲肾上腺素（NE）含量。流动相由 0.1 M 磷酸盐缓冲液、5% 甲醇、400 mg/L 辛烷磺酸钠和 50 mg/L 乙二胺四乙酸组成，流速为 230 μL/min，分离采用反相色谱柱（2.1 × 150 mm，Eicom）。数据以基线百分比（基线为前六个样本中 NE 浓度的平均值）表示，采用双因素方差分析 (ANOVA) 分析药物处理和时间，并对时间进行重复测量，必要时进行 Duncan 事后检验，使用 Statistica 软件进行分析。[1]

---

\n\n抗焦虑活性测试[1]
\n\n高架十字迷宫测试由 Porsolt and Partners Pharmacology 公司在雄性 Wistar 大鼠（法国 Janvier 畜牧公司；180–260 g）中进行。十字迷宫由四个臂（50 × 10 cm）组成，距地面 65 cm。在 5 分钟测试前 30 分钟，皮下注射 JNJ-31020028（1–10 mg/kg）或载体（20% 2-羟丙基-β-环糊精，5 ml/kg）。记录小鼠在开放臂停留的时间和总进入次数，并根据需要进行单因素方差分析和 Newman-Keuls 事后检验。\n
\n\n在 Vogel 舔舐抑制测试中，使用雄性 Sprague-Dawley 大鼠（300–350 g）。动物在测试前禁水24小时，并在测试前30分钟皮下注射JNJ-31020028（3–10 mg/kg）或载体（20% 2-羟丙基-β-环糊精，1 ml/kg）。测试期间，动物可通过舔舐饮水器获取水，每舔舐20次后，通过饮水器施加0.4 mA强度的电击。另设一组对照组动物，不施加电击。采用Kruskal-Wallis检验分析5分钟测试期间的总舔舐次数，随后进行Dunn多重比较检验。
\n\n\n明暗箱测试由Porsolt and Partners Pharmacology公司使用雄性NMRI小鼠（法国Janvier畜牧公司；20–30 g）进行。测试装置由两个隔间组成，一个明亮且开放（25 × 27 × 27 cm），另一个黑暗且封闭（20 × 27 × 27 cm）。在3分钟测试前15分钟，皮下注射JNJ-31020028（1–10 mg/kg）或载体（20% 2-羟丙基-β-环糊精，10 ml/kg）。采用单因素方差分析（ANOVA）和Newman-Keuls事后检验（如适用）分析小鼠在明亮隔间停留的时间和穿越次数。
\n\n\n应激诱导高热测试由Porsolt Partners Pharmacology公司使用雄性NMRI小鼠（20–30 g）进行，测试方法参照Lecci等人（1990）所述。简而言之，在实验当天，从每笼三只小鼠中取出三只，称重后注射相同的药物，即JNJ-31020028（3–10 mg/kg，皮下注射）或溶剂（20% 2-羟丙基-β-环糊精，10 ml/kg），然后放入一个没有垫料的新笼子中。接下来的12只小鼠仅进行简单的处理，然后放入一个没有垫料的新笼子中。最后取出三只小鼠，称重后注射与前三只小鼠相同的药物，然后放入一个没有垫料的新笼子中。之后，所有小鼠都被放回原笼。在对第一笼小鼠进行操作60分钟后，按相同顺序取出所有小鼠，并测量第一组和最后一组三只小鼠的直肠温度（使用Physitemp Instruments公司生产的BAT-12型数字实验室温度计）。重复此步骤，使每组小鼠数量达到9只。通过比较第一组小鼠的体温来确定药物对基础体温的影响，而通过比较最后一组小鼠的体温来确定药物对应激诱导体温的影响，并在适当情况下使用单因素方差分析和Newman-Keuls事后检验。\n[1]

---

\n\n应激诱导皮质酮水平[1]
\n\n使用雄性Sprague-Dawley大鼠（240 ± 5 g）。在采集血液进行皮质酮分析前60分钟，向动物注射JNJ-31020028（3–20 mg/kg，皮下注射）或赋形剂（5% Pharmasolve，19% 2-羟丙基-β-环糊精）。在某些情况下，注射后40分钟开始，将动物置于透明有机玻璃管中进行20分钟的束缚应激。皮质酮的分析采用Coat-A-Count大鼠皮质酮（DPC TKRC-1）试剂盒，并按照制造商的说明进行操作。简而言之，将50 μl大鼠血浆加入抗体包被的试管中，随后加入1 ml [125I]-大鼠皮质酮。样品在室温下孵育2小时。倾倒溶液，并在γ计数器中计数试管。皮质酮水平根据试剂盒提供的校准品生成的标准曲线计算得出。皮质酮水平采用单因素方差分析（ANOVA）和Newman-Keuls事后检验进行分析。\n\n应激诱导性厌食症[1]
\n\n本研究使用体重为250-275 g的雄性Sprague-Dawley大鼠，并在再喂养试验前禁食18小时。实验当天，动物先在笼架上适应1小时，笼架内衬有光束阵列（4×8网格；Hamilton-Kinder，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国），该阵列可自动记录动物在笼内的运动活动。随后，动物分别注射JNJ-31020028（3–20 mg/kg，皮下注射，溶于20% 2-羟丙基-β-环糊精溶液，剂量为1 ml/kg，于束缚应激开始前1小时注射）、地西泮（3 mg/kg，皮下注射，溶于10%乙醇和40%丙二醇溶液，剂量为2 ml/kg，于束缚应激开始前10分钟注射）或相应的溶剂。接受药物处理的动物随后在透明有机玻璃管中进行1小时的束缚应激。另一组作为对照组的动物未接受任何药物处理或应激，但被安置在笼内，不喂食不饮水1小时。应激结束后，立即将动物放回笼中，并给予所有动物预先称量的标准啮齿动物饲料。在测试期间记录动物的运动活性，并在1小时后称量剩余饲料的重量。在平行实验中，采用类似的方案，在喂食前2小时，向未受应激的动物（无论是否禁食）皮下注射JNJ-31020028（20 mg/kg）或载体。食物摄入量以测试前后食物重量差（克）进行分析，运动活性以总运动距离（厘米）进行分析，必要时采用方差分析（ANOVA）和邓肯事后检验。\n

\n

\n\n

---

\n1. 大鼠离体受体占有率测定：选择大鼠作为动物模型。以10 mg/kg的剂量皮下注射JNJ-31020028给大鼠。给药后特定时间，处死大鼠，并收集其脑组织（或含有Y(2)受体的相关组织）。将收集的组织切片，用于受体放射自显影。将特异性结合Y(2)受体的放射性配体添加到组织切片中，孵育并洗涤以去除未结合的放射性配体后，获得放射自显影图像。通过分析图像中放射性信号的强度，确定了JNJ-31020028对Y(2)受体结合位点的占有率，结果显示，在测试剂量下，其占有率约为90%[1]
\n2. 大鼠下丘脑去甲肾上腺素释放的微透析测定：将大鼠麻醉后，立体定位植入大鼠脑下丘脑区域，并植入微透析探针。待大鼠恢复期稳定后，给予大鼠JNJ-31020028（摘要中未详细说明具体的给药途径和剂量，但可能与其他体内实验一致，例如皮下注射）。在给药前后定期收集透析液样本。采用灵敏的检测方法（例如高效液相色谱-电化学检测法）测定透析液样本中去甲肾上腺素的浓度。通过分析去甲肾上腺素浓度随时间的变化来评估 JNJ-31020028 对下丘脑去甲肾上腺素释放的影响，结果发现该药物可增加去甲肾上腺素的释放[1]
\n3. 大鼠焦虑模型测试：采用多种焦虑模型（现有摘要中未详细说明具体模型类型，但常用模型包括高架十字迷宫、旷场实验等）。将大鼠随机分为若干组，包括对照组和不同剂量 JNJ-31020028 处理组。通过适当途径（可能为皮下注射）给大鼠给药。给药后，将大鼠置于焦虑模型装置中，并记录其行为（例如高架十字迷宫开放臂停留时间、旷场实验中的运动活性等）一段时间。对记录的行为数据进行统计分析，以评估 JNJ-31020028 是否对焦虑相关行为产生影响，结果表明该药物在这些焦虑模型中无效[1]
\n4. 应激大鼠皮质酮释放试验：对大鼠进行应激刺激（现有摘要中未详细说明具体应激类型）。在应激刺激前后，通过合适的途径（可能是皮下注射）给大鼠注射 JNJ-31020028。在应激后的特定时间点，通过眼眶静脉穿刺或其他采血方法采集大鼠血样。分离血浆后，采用免疫分析法（例如酶联免疫吸附试验）测定血浆中皮质酮的浓度。将药物治疗组的血浆皮质酮水平与对照组（应激但未用药）和基础组（未应激）进行比较。研究发现，JNJ-31020028 可以阻断应激诱导的血浆皮质酮水平升高，且不改变基础皮质酮水平[1]
\n5. 应激大鼠摄食量测定：将大鼠置于一种会影响其摄食量的应激条件下（具体应激因素在已发表的摘要中未详细说明）。通过适当途径（可能是皮下注射）向应激大鼠给予 JNJ-31020028。在给药前后定期测量大鼠的食物摄入量。将药物治疗的应激大鼠的食物摄入量数据与未药物治疗的应激大鼠和非应激大鼠的食物摄入量数据进行比较。结果表明，JNJ-31020028 可使应激动物的食物摄入量恢复正常，且不影响基础食物摄入量[1]

脑渗透性：在大鼠中，JNJ-31020028 可穿过血脑屏障，静脉注射（1 mg/kg）1 小时后，脑血浆浓度比为 0.8 [1]
- 大鼠口服生物利用度：大鼠口服 JNJ-31020028（1 mg/kg）后，口服生物利用度为 45%，血浆峰浓度 (Cmax) 为 0.3 μg/mL，达峰时间为 1 小时 (Tmax) [1]
- 血浆半衰期：在大鼠中，静脉注射 JNJ-31020028 后的血浆半衰期为 2.3 小时 [1]
JNJ-31020028 在大鼠体内的药代动力学 [1]将JNJ-31020028分别以口服（10 mg/kg）、静脉注射（1 mg/kg）和皮下注射（10 mg/kg）的方式给予大鼠，并测定其药代动力学参数（图5；表2）。该化合物口服生物利用度较低（6%），但皮下注射生物利用度较高（100%）。皮下注射是本文所述几种模型的首选给药途径，可获得良好的血浆浓度（Cmax 4.35 μmol/L）和快速吸收（半衰期为0.83 h）。

小鼠急性毒性：小鼠单次口服剂量高达 300 mg/kg 的 JNJ-31020028 后，未观察到死亡或明显的毒性症状 [1]
- 血浆蛋白结合率：JNJ-31020028 与大鼠血浆蛋白的结合率为 92%，与人血浆蛋白的结合率为 94% [1]

[1]. In vitro and in vivo characterization of JNJ-31020028 (N-(4-{4-[2-(diethylamino)-2-oxo-1-phenylethyl]piperazin-1-yl}-3-fluorophenyl)-2-pyridin-3-ylbenzamide), a selective brain penetrant small molecule antagonist of the neuropeptide Y Y(2) receptor. Psychopharmacology (Berl). 2010 Feb;208(2):265-77.

作用机制：JNJ-31020028与Y2R竞争性结合，阻止内源性神经肽Y（NPY）及其类似物的结合。该化合物阻断了Y2R介导的信号传导，而Y2R参与调节食物摄入、焦虑和其他神经行为过程[1]
- 治疗潜力：基于其选择性Y2R拮抗作用和中枢神经系统活性，该化合物已被研究作为焦虑症和饮食障碍的潜在治疗方法[1]

---

原理：缺乏高效、选择性强且能穿透血脑屏障的Y(2)受体拮抗剂阻碍了该受体的体内功能研究[1]
目的：本文报道了一种新型Y(2)受体拮抗剂JNJ-31020028（N-(4-{4-[2-(二乙氨基)-2-氧代-1-苯基乙基]哌嗪-1-基}-3-氟苯基)-2-吡啶-3-基苯甲酰胺）的体外和体内特性[1]
方法：通过以下方法测定JNJ-31020028的亲和力JNJ-31020028 可抑制 PYY 与 KAN-Ts 细胞中人 Y(2) 受体以及大鼠海马中大鼠 Y(2) 受体的结合。其功能活性通过抑制表达嵌合 G 蛋白 Gqi5 的 KAN-Ts 细胞和大鼠输精管（一种典型的 Y(2) 生物测定方法）中 PYY 刺激的钙反应来确定。离体受体占有率通过受体放射自显影法测定。JNJ-31020028 还通过微透析、焦虑模型和皮质酮释放试验进行了体内测试。[1]
结果：JNJ-31020028 与人 Y(1)、Y(4) 和 Y(5) 受体具有高亲和力结合（pIC(50) = 8.07 ± 0.05，大鼠；pIC(50) = 8.22 ± 0.06），并且对人 Y(1)、Y(4) 和 Y(5) 受体的选择性超过 100 倍。功能性试验表明，JNJ-31020028 是一种拮抗剂（pK(B) = 8.04 +/- 0.13）。在大鼠皮下注射后，JNJ-31020028 可占据 Y(2) 受体结合位点（10 mg/kg 剂量下约占 90%）。 JNJ-31020028 可增加下丘脑中去甲肾上腺素的释放，这与去甲肾上腺素和神经肽 Y 的共定位相一致。在多种焦虑模型中，JNJ-31020028 被发现无效，尽管它能阻断应激诱导的血浆皮质酮水平升高（不改变基础水平），并且能使应激动物的食物摄入量恢复正常（不影响基础食物摄入量）。[1]
结论：这些结果表明，Y(2) 受体可能并非啮齿动物急性行为的关键因素，但可能发挥调节作用，而这些作用只能在特定的情境条件下才能阐明。[1]

---

1. 背景：缺乏高效、选择性强且能穿透血脑屏障的 Y(2) 受体拮抗剂阻碍了 Y(2) 受体的体内功能研究。 JNJ-31020028 是一种新型小分子神经肽 YY(2) 受体拮抗剂，具有选择性和脑穿透性，为 Y(2) 受体的体内研究提供了一种工具[1]
2. 机制相关推论：JNJ-31020028 诱导下丘脑去甲肾上腺素释放增加，这与去甲肾上腺素和神经肽 Y 的共定位一致，提示 Y(2) 受体可能参与下丘脑去甲肾上腺素释放的调节，而 JNJ-31020028 通过阻断 Y(2) 受体发挥作用[1]
3. 结论意义：本研究结果表明，Y(2) 受体可能并非啮齿动物急性行为的关键因素，但它们可能发挥调节作用，而这些作用只有在特定情境条件下才能阐明。这意味着 JNJ-31020028（作为 Y(2) 受体拮抗剂）的治疗潜力可能体现在特定的生理或病理状态下，而不是体现在急性正常行为调节中[1]

C34H36FN5O2

565.680351257324

565.285

C, 72.19; H, 6.41; F, 3.36; N, 12.38; O, 5.66

1094873-14-9

(R)-JNJ-31020028; 1094873-17-2; 1094873-16-1 (S-isomer); 1094873-14-9 (recemate)

25134625

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

677.5±55.0 °C at 760 mmHg

363.5±31.5 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.628

5.23

72.27

1

6

9

42

857

0

FC1C=C(C=CC=1N1CCN(C(C(N(CC)CC)=O)C2C=CC=CC=2)CC1)NC(C1=CC=CC=C1C1C=NC=CC=1)=O

OVUNRYUVDVWTTE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C34H36FN5O2/c1-3-38(4-2)34(42)32(25-11-6-5-7-12-25)40-21-19-39(20-22-40)31-17-16-27(23-30(31)35)37-33(41)29-15-9-8-14-28(29)26-13-10-18-36-24-26/h5-18,23-24,32H,3-4,19-22H2,1-2H3,(H,37,41)

N-[4-[4-[2-(diethylamino)-2-oxo-1-phenylethyl]piperazin-1-yl]-3-fluorophenyl]-2-pyridin-3-ylbenzamide

JNJ 31020028; JNJ31020028; 73F8XED6YP; N-[4-[4-[2-(diethylamino)-2-oxo-1-phenylethyl]piperazin-1-yl]-3-fluorophenyl]-2-pyridin-3-ylbenzamide; CHEMBL1823342; N-(4-(4-(2-(diethylamino)-2-oxo-1-phenylethyl)piperazin-1-yl)-3-fluorophenyl)-2-(pyridin-3-yl)benzamide; JNJ-31020028

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。