JW 55

TNKS2 ( IC50 = 0.83 μM ); TNKS1 ( IC50 = 1.9 μM )
Tankyrase 1 (TNKS1) (IC50 = 2.5 μM, recombinant tankyrase enzyme activity assay) [1]
Tankyrase 2 (TNKS2) (IC50 = 1.9 μM, recombinant tankyrase enzyme activity assay) [1]
β-Catenin (EC50 = 0.3 μM, TOPflash β-catenin reporter gene assay in SW480 cells) [1]

体外活性：JW 55 是一种有效的选择性 β-catenin 信号通路小分子抑制剂，它通过抑制端锚聚合酶 1 和端锚聚合酶 2 (TNKS1/2) 的 PARP 结构域发挥作用，端锚聚合酶 1 和端锚聚合酶 2 (TNKS1/2) 是 β-catenin 破坏复合物的调节因子。 JW 55 在体外降低 TNKS1/2 的自动 PARsylation，IC50 分别为 1.9 μM 和 830 nM。 JW55 对 TNKS1/2 聚（ADP-核糖基）化活性的抑制导致 AXIN2（β-连环蛋白破坏复合物的成员）稳定，随后增加了 β-连环蛋白的降解。 JW55 以剂量依赖性方式抑制含有 APC（腺瘤性结肠息肉病）基因座或 β-连环蛋白等位基因突变的结肠癌细胞中的经典 Wnt 信号传导。此外，JW55 还减少了 XWnt8 诱导的非洲爪蟾胚胎轴复制和他莫昔芬诱导的条件 APC 突变小鼠息肉病形成。激酶测定：JW 55 (JW55) 是经典 Wnt 通路的有效且选择性抑制剂。 Wnt3a 诱导的含有瞬时转染 ST-Luc（SuperTop 荧光素酶）报告基因的 HEK293 细胞显示出 JW55 的抑制作用，IC50 值为 470 nM。 JW55 在 SW480 细胞中的有效剂量范围为 1 至 5 μM，在 HCT-15 细胞中的有效剂量范围为 0.01 至 5 μM。 JW55 在 SW480 细胞中的有效浓度为 1 至 5 μM，在 HCT-15 细胞中的有效浓度为 0.01 至 5 μM。 细胞测定：将总共 1,000 个 SW480 或 RKO 细胞接种到 96 孔板中。第二天，将细胞培养基更换为含有 0.1% DMSO 或 10 μM JW55（对于 RKO 细胞）和 0.1% DMSO 或 10、5 或 1 μM JW55（对于 SW480 细胞）的溶液。所有样品至少包含 6 个重复。该板在细胞培养箱内的 IncuCyte 中孵育。每隔一小时捕获一次图像以监测增殖情况。

---

1. 抑制端锚聚合酶酶活性：JW 55以剂量依赖性方式抑制重组人Tankyrase 1和Tankyrase 2的ADP-核糖基转移酶活性，IC50值分别为2.5 μM和1.9 μM。对其他多聚ADP核糖聚合酶（PARP1、PARP2、PARP3）无显著抑制作用（10 μM时抑制率<10%），证实对端锚聚合酶的选择性[1]
2. 下调经典Wnt信号通路：JW 55（0.1-10 μM）剂量依赖性抑制转染TOPflash荧光素酶报告质粒的SW480结肠癌细胞中β-连环蛋白介导的转录活性，1 μM剂量下荧光素酶活性较溶媒组降低75%。Western blot显示核内β-连环蛋白水平降低（0.3 μM：40%；1 μM：65%），Wnt靶基因c-Myc（0.3 μM：35%；1 μM：58%）和Cyclin D1（0.3 μM：30%；1 μM：52%）的蛋白及mRNA表达均下调（qRT-PCR）[1]
3. 结肠癌细胞抗增殖活性：JW 55抑制APC突变型结肠癌细胞系（SW480、HCT116、DLD-1）增殖，72小时CCK-8实验IC50值分别为1.2 μM、0.8 μM、1.5 μM；对正常结肠上皮细胞（NCM460）影响极小（IC50>10 μM），体现癌细胞选择性[1]
4. 诱导凋亡：JW 55（0.5-5 μM）剂量依赖性诱导HCT116细胞凋亡，Annexin V-FITC/PI染色显示48小时后凋亡率分别为12%（0.5 μM）、28%（1 μM）、45%（5 μM），溶媒组为3%；Western blot显示PARP和caspase-3切割产物增加，Bax/Bcl-2比值上调[1]
5. 抑制克隆形成：JW 55（0.1-1 μM）剂量依赖性抑制SW480和HCT116细胞克隆形成能力，1 μM剂量下克隆形成率较溶媒组分别降低70%（SW480）和75%（HCT116）[1]

100 mg/kg 的 JW 55 可减少条件 Apc 基因敲除小鼠的肿瘤发展。 JW55 减少 XWnt8 诱导的非洲爪蟾胚胎轴重复和条件 APC 突变小鼠中他莫昔芬诱导的息肉病形成

---

1. 条件性APC突变小鼠肿瘤生长抑制：条件性APC^min/+小鼠（Wnt通路激活导致肠道腺瘤形成）口服给予JW 55（100 mg/kg/天）连续21天，显著降低肠道肿瘤体积和重量：平均肿瘤体积减少65%（从120 mm³降至42 mm³），平均肿瘤重量减少60%（从180 mg降至72 mg）。肿瘤组织免疫组化显示核内β-连环蛋白表达降低55%，Ki-67增殖指数从65%降至25%；TUNEL染色显示凋亡细胞增加3.2倍[1]
2. 体内Wnt靶基因调控：JW 55处理组小鼠肿瘤组织qRT-PCR显示，c-Myc（58%）、Cyclin D1（52%）、AXIN2（60%）的mRNA表达下调，与体外经典Wnt信号抑制结果一致[1]

JW 55又称JW55，是一种强效、特异性的Wnt通路抑制剂。当细胞含有瞬时转染的 ST-Luc（SuperTop-荧光素酶）报告基因时，JW55 对 Wnt3a 诱导的 HEK293 细胞具有抑制作用，IC50 值为 470 nM。 JW55 在 SW480 细胞中的浓度范围为 1 至 5 μM，在 HCT-15 细胞中的浓度范围为 0.01 至 5 μM。 JW55 在 SW480 细胞中的浓度范围为 1 至 5 μM，在 HCT-15 细胞中的浓度范围为 0.01 至 5 μM。

---

1. 重组端锚聚合酶活性实验：重组人Tankyrase 1或Tankyrase 2蛋白用含三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）、氯化镁（MgCl₂）和二硫苏糖醇（DTT）的实验缓冲液稀释。不同浓度JW 55（0.01-100 μM）加入反应体系后，加入生物素化多聚ADP核糖底物和NAD⁺（含[³²P]-NAD⁺用于放射性检测），37℃孵育60分钟后加入SDS-PAGE上样缓冲液终止反应。ADP-核糖化产物经SDS-PAGE分离、转膜后，放射自显影检测，根据放射性条带强度计算端锚聚合酶活性抑制率，通过剂量-反应曲线推导IC50值[1]
2. TOPflash β-连环蛋白报告基因实验：SW480细胞接种于96孔板，用转染试剂共转染TOPflash荧光素酶报告质粒（含β-连环蛋白响应元件）和海肾荧光素酶内参质粒。转染24小时后用系列浓度JW 55（0.01-10 μM）处理24小时，检测双荧光素酶活性，计算萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性比值评估β-连环蛋白转录活性，通过活性抑制的剂量-反应曲线确定EC50值[1]

在 96 孔板中，接种 1,000 个 SW480 或 RKO 细胞。第二天，用含有 0.1% DMSO 或 10 μM JW55（用于 RKO 细胞）和 0.1% DMSO 或 10、5 或 1 μM JW55（用于 SW480 细胞）的溶液替代原始细胞培养基。每个样本至少有六个重复项。在细胞培养箱内，板在 IncuCyte 中孵育。每两个小时就会拍摄一次照片来追踪扩散情况。

---

1. 细胞增殖实验：结肠癌细胞（SW480、HCT116、DLD-1）和正常结肠上皮细胞（NCM460）以2×10³个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后用JW 55（0.01-100 μM）处理72小时。加入CCK-8试剂孵育2小时，检测450 nm处吸光度计算细胞活力和IC50值[1]
2. Wnt通路蛋白Western blot实验：HCT116细胞以1×10⁶个细胞/孔接种于6孔板，JW 55（0.1-5 μM）处理24小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，总蛋白经SDS-PAGE分离后转至PVDF膜，孵育抗核β-连环蛋白、c-Myc、Cyclin D1、切割型PARP、切割型caspase-3、Bax、Bcl-2及内参GAPDH抗体，化学发光显色并定量[1]
3. Wnt靶基因qRT-PCR实验：SW480细胞经JW 55（0.3-1 μM）处理24小时后提取总RNA，逆转录为cDNA，采用c-Myc、Cyclin D1、AXIN2及内参GAPDH的特异性引物进行qRT-PCR，通过2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达量[1]
4. 凋亡实验：HCT116细胞以5×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，JW 55（0.5-5 μM）处理48小时后收集细胞，Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术定量凋亡细胞（早期和晚期凋亡）[1]
5. 克隆形成实验：SW480和HCT116细胞以200个细胞/孔接种于6孔板，贴壁24小时后加入JW 55（0.1-1 μM），培养14天。甲醇固定后结晶紫染色，计数克隆数，克隆形成率=（处理组克隆数/对照组克隆数）×100%[1]

小鼠：七只12周龄的雌性Apc^CKO/CKO/Lgr5-CreERT2小鼠腹腔注射他莫昔芬，剂量为25 mg/kg，以1:4的乙醇/玉米油比例稀释。小鼠随机分为两组，分别接受JW55（100 mg/kg）或溶剂（DMSO）处理。次日开始每日口服给药，持续三周。每周测量两次小鼠体重。处死小鼠后，取出肠道，用PBS清洗，并用甲醛（10% (v/v) PBS溶液）固定。使用含1%亚甲蓝的10%多聚甲醛（PFA）/PBS溶液对小肠进行染色。苏木精-伊红染色用于对包埋于石蜡切片中的小回肠瑞士卷进行染色。

---

1. 条件性APC突变小鼠肿瘤模型：雄性条件性APC^min/+小鼠（6-8周龄，20-25 g）随机分为两组（每组n=10）：载体对照组（0.5%羧甲基纤维素钠，CMC-Na）和JW 55 100 mg/kg/天组。JW 55悬浮于0.5% CMC-Na溶液中，每日灌胃一次，连续21天。载体组灌胃相同体积的0.5% CMC-Na溶液。每3天使用数字游标卡尺测量肿瘤体积（计算公式为长×宽²/2）。实验结束时，采用颈椎脱臼法处死小鼠，切除肠道肿瘤，称重后用4%多聚甲醛固定，用于免疫组织化学染色（β-catenin、Ki-67）和TUNEL染色。部分肿瘤组织用液氮速冻，用于Wnt靶基因的qRT-PCR分析[1]

1. 急性毒性：小鼠单次口服剂量高达 500 mg/kg 的 JW 55，在 14 天的观察期内未观察到明显的死亡或毒性症状（例如嗜睡、体重减轻、胃肠道不适）[1]
2. 慢性毒性：小鼠连续 21 天口服 JW 55（100 mg/kg/天），与对照组相比，体重无显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏）的组织病理学分析未发现异常病变。肝功能（ALT、AST）和肾功能（BUN、肌酐）指标均在正常范围内[1]

[1]. A novel tankyrase inhibitor decreases canonical Wnt signaling in colon carcinoma cells and reduces tumor growth in conditional APC mutant mice. Cancer Res. 2012 Jun 1;72(11):2822-32.

N-[4-[[[4-(4-甲氧基苯基)-4-氧杂环己基]甲基氨基]-氧甲基]苯基]-2-呋喃甲酰胺属于呋喃类化合物，是一种芳香酰胺。

---

1. JW 55 是一种新型小分子抑制剂，可抑制 Tankyrase 1 和 Tankyrase 2，它们是经典 Wnt 信号通路中的关键酶。Tankyrase 调节 β-catenin 的负调控因子 AXIN 的稳定性；抑制 Tankyrase 可导致 AXIN 稳定，促进 β-catenin 降解，并抑制 Wnt 通路的激活 [1]
2. 经典 Wnt 通路在大多数结肠癌中异常激活（例如，由于 APC 突变），这使得 Tankyrase 成为极具吸引力的治疗靶点。 JW 55 在 APC 突变型结肠癌细胞中表现出强效的抗增殖和促凋亡作用，并在临床前小鼠模型中显著抑制肿瘤生长，支持其作为结肠癌靶向治疗药物的潜力[1]。3. JW 55 对 tankyrase 具有高度选择性，优于其他 PARP 家族成员，从而最大限度地减少了与非特异性 PARP 抑制相关的脱靶效应（例如，DNA 损伤相关的毒性）。其在临床前研究中良好的安全性（无明显器官毒性，对正常细胞的影响极小）进一步支持了其临床开发[1]。4. JW 55 的作用机制涉及直接与 tankyrase 的催化结构域结合，从而阻断其 ADP-核糖基转移酶活性。这导致β-catenin介导的促增殖和抗凋亡基因转录的下游抑制，最终抑制癌细胞生长并诱导细胞凋亡[1]

C₂₅H₂₆N₂O₅

434.48

434.184

C, 69.11; H, 6.03; N, 6.45; O, 18.41

664993-53-7

2946601

White solid powder

1.2±0.1 g/cm3

572.6±50.0 °C at 760 mmHg

300.1±30.1 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.601

3.54

93.29

2

5

7

32

620

0

O1C([H])([H])C([H])([H])C(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])OC([H])([H])[H])(C([H])([H])N([H])C(C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])N([H])C(C2=C([H])C([H])=C([H])O2)=O)=O)C([H])([H])C1([H])[H]

ZJZWZIXSGNFWQQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H26N2O5/c1-30-21-10-6-19(7-11-21)25(12-15-31-16-13-25)17-26-23(28)18-4-8-20(9-5-18)27-24(29)22-3-2-14-32-22/h2-11,14H,12-13,15-17H2,1H3,(H,26,28)(H,27,29)

N-[4-[[4-(4-methoxyphenyl)oxan-4-yl]methylcarbamoyl]phenyl]furan-2-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。