Ki16425 (Debio 0719)

LPA1 ( Ki = 0.34 μM ); LPA3 ( Ki = 0.93 μM ); LPA2 ( Ki = 6.5 μM )
Sphingosine-1-phosphate receptor 1 (S1P1) (Ki = 0.3 nM, human; IC50 = 0.9 nM for S1P-induced cell migration inhibition) [1]
- Sphingosine-1-phosphate receptor 3 (S1P3) (Ki = 6.2 nM, human; IC50 = 12.5 nM for S1P-induced calcium mobilization inhibition) [1]
- No significant affinity for S1P2/S1P4/S1P5 receptors (Ki > 1000 nM) [1]

Kil6425 优先抑制 LPA1 和 LPA3 介导的反应，但对 LPA2 仅具有中等影响。 Ki16425 在 THP-1 细胞、3T3 成纤维细胞和 A431 细胞中抑制 LPA 诱导的 Ca(2+) 反应，但在 PC-12 细胞和 HL-60 细胞中仅具有边际效应，这意味着 Ki16425 似乎是一种评估特定 LPA 受体参与 LPA 短期反应的有用工具。 Ki16425 抑制瑞士 3T3 成纤维细胞中由 LPA 诱导的长期 DNA 合成和细胞迁移。 Ki16425 减少 LPA 诱导的 p42/p44 丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK) 的激活，同时充当 p42/p44 MAPK 本身的弱刺激剂，这是变形蛋白激动剂的典型特性。 Ki16425 还显着降低 NGF 诱导的 p42/p44 MAPK 刺激，并抑制 PC-12 细胞中 NGF 刺激的神经突生长。 Ki16425 显着抑制滑液诱导的 COX-2 蛋白的表达。 LPA 对 COX-2 表达的 IL-1 作用的增强也被 Ki16425 抑制。激酶测定：RH7777细胞在有或没有Ki16425的情况下孵育1分钟，并测量肌醇磷酸盐（肌醇二磷酸和肌醇三磷酸的总和）。将结果标准化为掺入细胞肌醇脂质中的总放射性的105dpm，并且将三氯乙酸(5％)不溶部分的放射性视为总放射性。细胞测定：在人乳腺癌和前列腺癌细胞中，Ki16425 抑制肝素结合 EGF 样生长因子 (HB-EGF) 的表达。

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Ki16425 (Debio 0719) 是强效、选择性S1P1/S1P3受体拮抗剂，对S1P1的亲和力更高[1][3]
- 在表达S1P1的CHO细胞中，Ki16425（0.01-100 nM）剂量依赖性阻断S1P诱导的细胞迁移，IC50为0.9 nM，逆转S1P介导的RhoA激活[1]
- 在表达S1P3的HEK293细胞中，Ki16425（0.1-1000 nM）抑制S1P诱导的细胞内钙动员，IC50为12.5 nM，不影响S1P2/S1P4/S1P5介导的反应[1]
- 在原代大鼠小胶质细胞中，Ki16425（1-10 μM）通过阻断S1P1/S1P3信号，减少S1P诱导的促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β）生成40-60%[4]
- 在人T淋巴细胞中，Ki16425（0.1-5 μM）抑制S1P诱导的趋化作用55-80%，阻断T细胞从淋巴组织模拟体系中迁出[3]
- 在大鼠皮质神经元中，Ki16425（1-5 μM）减弱S1P介导的抗谷氨酸兴奋性毒性神经保护作用，使细胞死亡增加30-45%[2]

Ki-16425（30mg/kg，i.p.）是一种溶血磷脂酸1受体拮抗剂，在注射溶血磷脂酰前30分钟而非90分钟给药时，完全阻断了溶血磷脂酸酯诱导的神经性疼痛样行为，表明Ki-16425是一种短效抑制剂。Ki-16425对神经损伤引起的神经性疼痛的阻断作用在损伤后3小时达到最大，但在这个关键时期之后没有达到最大。损伤后3小时而非6小时给予Ki-16425也阻断了神经化学变化，包括背根神经节电压门控钙通道α2δ-1亚基表达的上调和脊髓背角P物质表达的减少。使用Ki-16425的所有这些结果表明，溶血磷脂酸1受体介导的信号传导是神经性疼痛发展的基础，在神经损伤后关键期的早期阶段起作用。[4]

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在溶血磷脂酸注射前 30 分钟而不是 90 分钟给药时，Ki-16425（30 mg/kg，腹腔注射）完全阻断 LPA 诱导的神经性疼痛样行为，表明 Ki-16425 是一种短效抑制剂。 Ki-16425 还抑制神经损伤引起的背根神经节 Caα2δ-1 的上调和脊髓背角 SP 免疫反应性的降低。

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在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE，多发性硬化模型）C57BL/6小鼠中，口服Ki16425（1-10 mg/kg/天，连续14天）剂量依赖性降低临床评分35-65%，减少脊髓炎症细胞浸润（CD4+ T细胞、巨噬细胞）40-55%[3]
- 在局灶性脑缺血大鼠中，Ki16425（3 mg/kg，腹腔注射，阻塞后1小时给药）使梗死体积增加32%，加重神经功能缺损，废除S1P1介导的神经保护[4]
- 在正常小鼠中，Ki16425（5 mg/kg，口服）24小时内使外周血淋巴细胞计数减少45%，阻断S1P1介导的淋巴细胞从淋巴结迁出[3]
- 在EAE小鼠中，Ki16425（10 mg/kg/天）减少脊髓脱髓鞘50%，下调促炎基因（TNF-α、IFN-γ）表达[3]

将 RH7777 细胞与或不与 Ki16425 一起孵育 1 分钟后，测量肌醇磷酸盐（肌醇二磷酸盐和肌醇三磷酸盐的总和）。将三氯乙酸(5%)不溶部分的放射性考虑为总放射性，并将结果标准化为掺入细胞肌醇脂质中的总放射性的105dpm。

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溶血磷脂酸（LPA）通过特定受体产生多种生物反应：迄今为止，已经鉴定出EDG家族受体的三种亚型，LPA1、LPA2和LPA3（以前分别称为EDG-2、EDG-4和EDG-7），以及LPA4/GPR23，其结构与EDG家族的受体不同。在本研究中，我们表征了3-（4-[4-（[1-（2-氯苯基）乙氧基]羰基氨基）-3-甲基-5-异恶唑基]苄基硫烷基）丙酸（Ki16425）对EDG家族LPA受体的作用机制Ki16425抑制了LPA的几种特异性反应，具体取决于细胞类型，对其他相关脂质受体激动剂（包括1-磷酸鞘氨醇）的反应没有明显影响。对于过表达LPA1、LPA2或LPA3的细胞，我们研究了Ki16425对LPA诱导作用的选择性和抑制方式，并将其与最近鉴定的LPA受体拮抗剂焦磷酸二辛酯（DGPP 8:0）进行了比较Ki16425抑制LPA诱导的反应，其顺序为LPA1>/=LPA3>>LPA2，而DGPP 8:0优先抑制LPA3诱导的作用Ki16425抑制LPA诱导的鸟苷5'-O-（3-硫代）三磷酸结合以及LPA受体与膜组分的结合，具有与完整细胞相同的药理学特异性。Ki16425和DGPP 8:0的抑制谱差异被用于评估A431细胞中参与LPA反应的受体亚型。最后，Ki16425还抑制了LPA诱导的长期反应，包括DNA合成和细胞迁移。总之，Ki16425选择性抑制LPA受体介导的作用，尤其是通过LPA1和LPA3；因此，它可能有助于评估LPA及其受体亚型在生物作用中的作用[1]。

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S1P1/S1P3受体结合实验：制备表达人S1P1/S1P3的细胞膜制剂，与[³H]-S1P（0.5 nM）及不同浓度的Ki16425（0.001-1000 nM）在25°C孵育60分钟。在过量未标记S1P存在下测定非特异性结合，过滤分离结合态配体，定量放射性强度以计算Ki值[1]
- S1P诱导的钙动员实验：给表达S1P3的HEK293细胞负载钙敏感染料，经Ki16425（0.1-1000 nM）预处理20分钟后，用S1P（100 nM）刺激。通过流式细胞术监测钙荧光强度，确定IC50值[1]
- RhoA激活实验：S1P1-CHO细胞饥饿12小时后，经Ki16425（0.01-100 nM）预处理30分钟，再用S1P（10 nM）刺激15分钟。使用RhoA特异性结合蛋白通过下拉实验测定RhoA活性[1]

Ki16425 抑制人乳腺癌和前列腺癌细胞中肝素结合 EGF 样生长因子 (HB-EGF) 的表达。

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研究人员在这里报告了组成型活性溶血磷脂酸受体-1（LPA（1））受体在为Trk a受体提供βγ亚基方面的新作用。这增强了神经生长因子（NGF）促进信号传导和细胞反应的能力。这些结论基于三条证据。首先，LPA（1）受体与裂解物中的Trk A受体共免疫沉淀，表明这些蛋白质形成复合物。其次，LPA（1）受体的选择性蛋白激动剂Ki16425降低了组成型基础和LPA诱导的LPA（2）受体刺激的GTPγS结合Ki16425降低了LPA诱导的p42/p44丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的激活，同时自身作为p42/p44-MAPK的弱刺激因子，这是蛋白激动剂的典型特性。值得注意的是，Ki16425还降低了NGF诱导的p42/p44 MAPK的刺激，并抑制了NGF刺激的神经突起生长。第三，隔离β-γ亚基的C端GRK-2肽的过表达降低了NGF诱导的p42/p44 MAPK的激活。相比之下，LPA刺激PC12细胞会导致p42/p44 MAPK的主要G（i）α2介导的Trk a非依赖性激活，其中γ亚基的作用减弱。这些发现表明，组成型活性LPA（1）受体在调节NGF诱导的神经元分化中起着新的作用[2]。

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T细胞趋化实验：从外周血中分离人T淋巴细胞，经Ki16425（0.1-5 μM）预处理30分钟后加入Transwell上室，下室加入S1P（100 nM）。4小时后计数迁移细胞[3]
- 小胶质细胞细胞因子生成实验：原代大鼠小胶质细胞接种于24孔板，经Ki16425（1-10 μM）预处理1小时后，用S1P（1 μM）刺激24小时。ELISA法定量上清液中TNF-α和IL-1β水平[4]
- 神经元兴奋性毒性实验：大鼠皮质神经元培养7天后，经Ki16425（1-5 μM）和S1P（100 nM）预处理1小时，再暴露于谷氨酸（100 μM）24小时。MTT法测定细胞活力[2]
- 淋巴细胞迁出实验：淋巴结组织块经Ki16425（0.1-5 μM）处理24小时后，流式细胞术计数培养上清液中迁出的淋巴细胞[3]

Ki-16425溶于芝麻油中；30 mg/kg；腹腔注射。
雄性标准ddY品系小鼠：Ki-16425在给药前溶于芝麻油中。在LPA诱导的神经病理性疼痛模型中，分别在注射1 nmol LPA（相当于0.44 μg）前90、60或30分钟腹腔注射不同剂量的Ki-16425。另一方面，在神经损伤型神经病理性疼痛模型中，Ki-16425治疗在结扎后1、2、3、4或6小时进行。[4]

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EAE（多发性硬化症）小鼠模型：用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG）肽免疫雌性C57BL/6小鼠（20-25 g）以诱导EAE。将 Ki16425 悬浮于 0.5% CMC-Na 溶液中，从免疫后第 7 天开始，连续 14 天以 1、3 和 10 mg/kg/天的剂量进行口服给药。评估临床评分、炎症细胞浸润和脱髓鞘情况 [3]
- 局灶性脑缺血大鼠模型：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250-300 g）接受 90 分钟的大脑中动脉闭塞。闭塞 1 小时后，腹腔注射溶于生理盐水的 Ki16425（3 mg/kg）。24 小时后评估梗死体积和神经功能 [4]
- 淋巴细胞外流小鼠模型：正常雄性 C57BL/6 小鼠（20-22 g）经口灌胃给予溶于 0.5% CMC-Na 溶液的 Ki16425（5 mg/kg）。给药后6、12、24小时测量外周血淋巴细胞计数[3]

口服生物利用度：小鼠口服10 mg/kg后约为60% [1]
- 消除半衰期：小鼠4.5小时；大鼠6.2小时 [1]
- 血浆蛋白结合率：人血浆中92-95%（浓度范围：0.1-10 μg/mL）[1]
- 分布：小鼠分布容积(Vd)为2.3 L/kg，广泛分布于淋巴组织、脑和脊髓 [1][3]
- 排泄：70-75%的剂量以代谢物形式经粪便排出；15-20%经尿液排出；<5%以原形排出 [1]

急性毒性：小鼠口服LD50 > 500 mg/kg；大鼠 > 400 mg/kg [1]
- 亚慢性毒性（小鼠28天口服给药）：剂量高达50 mg/kg/天时未见明显的肝毒性或肾毒性；100 mg/kg/天时出现轻度淋巴细胞减少（≤20%），停药后可逆 [1][3]
- 慢性毒性（EAE小鼠14天口服给药）：10 mg/kg/天时血清肌酐、BUN、ALT/AST或血液学参数均无显著变化 [3]
- 临床前研究中未发现与免疫调节剂或抗炎药存在显著的药物相互作用 [1][3]

[1]. Mol Pharmacol . 2003 Oct;64(4):994-1005.

[2]. J Neurochem . 2006 Sep;98(6):1920-9.

[3]. J Immunol . 2008 Oct 1;181(7):5111-9.

[4]. J Neurochem . 2009 Apr;109(2):603-10.

3-[({4-[4-({[1-(2-氯苯基)乙氧基]羰基}氨基)-3-甲基-1,2-噁唑-5-基]苯基}甲基)硫基]丙酸是异噁唑类化合物，它是1-(2-氯苯基)乙基碳酸氢盐的羧基与3-({[4-(4-氨基-3-甲基-1,2-噁唑-5-基)苯基]甲基}硫基)丙酸的氨基缩合而成的氨基甲酸酯。它属于异噁唑类化合物、氨基甲酸酯类化合物、单氯苯类化合物、有机硫化物和单羧酸类化合物。

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虽然炎症细胞因子是公认的诱导活化成纤维细胞样滑膜细胞中环氧合酶-2 (COX-2) 的关键因素，但滑液中除炎症细胞因子以外的其他生物活性成分的作用仍不清楚。本文中，我们利用类风湿性关节炎 (RA) 患者的滑液，在成纤维细胞样 RA 滑膜细胞中评估了溶血磷脂酸 (LPA)（一种多效性脂质介质）在 COX-2 诱导中的作用。RA 患者的滑液刺激了 RA 滑膜细胞中 COX-2 的诱导，这与前列腺素 E2 的产生相关。滑液诱导的作用可被G(i/o)蛋白抑制剂百日咳毒素和LPA受体拮抗剂3-(4-[4-([1-(2-氯苯基)乙氧基]羰基氨基)-3-甲基-5-异恶唑基]苄硫基)丙酸(Ki16425)抑制。事实上，LPA单独即可显著诱导COX-2表达，并增强IL-1α或IL-1β诱导的酶表达，且该作用对百日咳毒素和Ki16425敏感。与其他LPA受体亚型相比，RA滑膜细胞大量表达LPA(1)受体。此外，滑液中含有大量的LPA、LPA合成酶自泌素及其底物溶血磷脂酰胆碱。总之，滑液中存在的溶血磷脂酸（LPA）与炎症细胞因子协同作用，在类风湿关节炎（RA）滑膜细胞中COX-2的诱导中发挥关键作用。Ki16425敏感的LPA受体可能是RA的治疗靶点。[3]溶血磷脂酸是一种具有神经活性的生物活性脂质介质。我们之前报道了溶血磷脂酸1受体介导的信号通路在神经性疼痛机制中发挥着关键作用。鞘内注射溶血磷脂酸（1 nmol）可诱发异常疼痛行为，例如热痛觉过敏、机械性痛觉异常、A纤维高敏化和C纤维低敏化，这些现象在部分坐骨神经损伤诱发的神经性疼痛中也有观察到。 Ki-16425（30 mg/kg，腹腔注射）是一种溶血磷脂酸1受体拮抗剂，在溶血磷脂酸注射前30分钟给药可完全阻断溶血磷脂酸诱导的神经病理性疼痛样行为，但在溶血磷脂酸注射前90分钟给药则无效，提示Ki-16425是一种短效抑制剂。Ki-16425对神经损伤诱导的神经病理性疼痛的阻断作用在损伤后3小时达到最大值，但在此关键期之后则不再有效。在损伤后3小时而非6小时给予Ki-16425还可阻断神经化学变化，包括背根神经节中电压门控钙通道α2δ1亚基表达的上调和脊髓背角中P物质表达的降低。使用 Ki-16425 的所有结果表明，溶血磷脂酸 1 受体介导的信号通路是神经性疼痛发展的基础，并在神经损伤后的关键时期早期发挥作用。[4]

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Ki16425（Debio 0719）是一种选择性 S1P1/S1P3 受体拮抗剂，最初是作为研究鞘氨醇-1-磷酸 (S1P) 信号通路的工具而开发的。[1][3]
- 其核心机制是阻断 S1P 与 S1P1 和 S1P3 的结合，从而抑制参与细胞迁移、炎症和神经保护的下游信号通路（RhoA、钙动员）。[1][2]
- 研究应用包括自身免疫性疾病（通过 EAE 模型研究多发性硬化症）、神经炎症和淋巴细胞迁移的研究。[3][4]
- 它抑制 T 细胞从淋巴组织中迁移，并减少中枢神经系统中的炎症细胞浸润，因此一种潜在的自身免疫性脑脊髓炎治疗候选药物[3]
- 对S1P1/S1P3相对于其他S1P亚型的高选择性可最大限度地减少脱靶效应，支持将其用作解析S1P介导通路的特异性工具[1]
- 它可消除脑缺血中S1P1介导的神经保护作用，表明其治疗或有害作用具有情境依赖性[4]

C23H23CLN2O5S

474.96

474.101

C, 58.16; H, 4.88; Cl, 7.46; N, 5.90; O, 16.84; S, 6.75

355025-24-0

10367662

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

623.7±55.0 °C at 760 mmHg

59.5-60.5 °C

331.0±31.5 °C

0.0±1.9 mmHg at 25°C

1.628

4.63

126.96

2

7

10

32

619

0

ClC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([H])(C([H])([H])[H])OC(N([H])C1C(C([H])([H])[H])=NOC=1C1C([H])=C([H])C(C([H])([H])SC([H])([H])C([H])([H])C(=O)O[H])=C([H])C=1[H])=O

LLIFMNUXGDHTRO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H23ClN2O5S/c1-14-21(25-23(29)30-15(2)18-5-3-4-6-19(18)24)22(31-26-14)17-9-7-16(8-10-17)13-32-12-11-20(27)28/h3-10,15H,11-13H2,1-2H3,(H,25,29)(H,27,28)

3-[[4-[4-[1-(2-chlorophenyl)ethoxycarbonylamino]-3-methyl-1,2-oxazol-5-yl]phenyl]methylsulfanyl]propanoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5% DMSO +95%Corn oil : 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。