KN-62

P2X7 Receptor; CaMK II (Ki = 0.9 μM)
P2Z receptor (now designated as P2X7 receptor) (Ki = 0.7 μM for antagonism of ATP-induced responses in human lymphocytes) [1]
- Calcium/calmodulin-dependent protein kinase II (CaMKII) (IC50 = 0.9 μM for inhibition of purified CaMKII) [2]

KN-62可有效抑制 ATP 刺激的 Ba2+ 流入载有 fura-2 的人淋巴细胞，IC50 为 12.7 nM，总通量抑制为 500 nM[1]。 KN-62 不抑制自磷酸化 Ca2+/CaM 激酶 II 的活性。在存在或不存在外源底物的情况下，KN-62 剂量依赖性地抑制 Ca2+/CaM 激酶 II 的 α (50 kDa) 和 β (60 kDa) 亚基的 Ca2+/钙调蛋白依赖性自磷酸化[2]。在人白血病 B 淋巴细胞中，KN-62 降低了 Bz-ATP 诱导的对较大渗透阳离子（如乙锭）的渗透性增加速率，IC50 为 13.1 nM[4]。

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1.细胞外腺苷5'-三磷酸（ATP）是人淋巴细胞上P2Z受体的激动剂，它介导阳离子选择性离子通道的打开、磷脂酶D的激活和粘附分子L-选择素从细胞表面的脱落。异喹啉磺酰胺，KN-62，（1-[N，O-双（5-异喹啉磺酰基）-N-甲基-L-酪氨酸]-4-苯基胡椒碱），钙/钙调素依赖性蛋白激酶II（CaMKII）的选择性拮抗剂，和KN-04，（N-[1-[N-甲基-p-（5-异喹啉磺酰基）苄基]-2-（4-苯基哌嗪）乙基]-5-异喹啉磺酰），一种非活性类似物，用于研究CaMKII在细胞外ATP的这些不同作用中的可能作用。2.KN-62能有效拮抗ATP刺激的Ba2+流入fura-2负载的人淋巴细胞，IC50为12.7+/-1.5 nM（n=3），在500 nM的浓度下完全抑制通量。同样，KN-62抑制了ATP刺激的乙锭+摄取，通过时间分辨流式细胞术测量，IC50为13.1+/-2.6 nM（n=4），在500 nM时完全抑制了通量。3.KN-04拮抗ATP刺激的Ba2+内流，IC50为17.3+/-2.7 nM（n=3）。同样，KN-04抑制ATP刺激的乙锭+摄取，IC50为37.2+/-8.9 nM（n=4）。在500 nM KN-04下，两种通量都被完全抑制。4.通过转磷脂酰化反应在[3H]-油酸标记的淋巴细胞中测量的ATP刺激的磷脂酶D活性被KN-62和KN-04拮抗，分别在5.9+/-1.2和9.7+/-2.8 nM（n=3）时抑制50%。通过流式细胞术分析细胞表面L-选择素，KN-62和KN-04均抑制ATP刺激的L-选择素脱落，IC50值分别为31.5+/-4.5和78.7+/-10.8 nM（n=3）。异喹啉磺酰胺（500 nM）均未抑制佛波酯或离子霉素刺激的磷脂酶D活性或佛波酯诱导的L-选择素脱落。5.KN-62或KN-04对P2Z介导的反应的抑制作用起效缓慢（5分钟），仅通过洗涤细胞部分逆转。6.KN-62和KN-04（500 nM）对携带fura-2的人中性粒细胞中尿苷5'-三磷酸（UTP）刺激的Ca2+瞬变没有影响，这是一种由P2Y2受体介导的反应。7.因此，KN-62和KN-04是P2Z受体的强效拮抗剂，在纳摩尔浓度下抑制人类淋巴细胞P2Z受体介导的所有已知反应。相比之下，KN-62和KN-04对中性粒细胞P2Y2受体介导的反应没有影响。此外，由于KN-62和KN-04几乎是等价的，P2Z介导的反应不涉及CaMKII，但表明异喹啉磺酰胺是P2Z受体的强效直接抑制剂[1]。

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P2Z受体拮抗作用：KN-62能强效拮抗人外周血淋巴细胞中ATP诱导的多种反应，包括ATP介导的51Cr释放（细胞毒性）、细胞内Ca2+升高和膜去极化，Ki值为0.7 μM，该拮抗作用具有可逆性和ATP竞争性[1]
- CaMKII抑制作用：KN-62以剂量依赖性方式抑制纯化的兔脑CaMKII活性，IC50为0.9 μM，在浓度高达10 μM时，对其他激酶（包括PKA、PKC、MAPK）无显著抑制作用[2]
- P2Z受体选择性：在浓度高达10 μM时，KN-62对人细胞中其他P2嘌呤能受体（P2X1、P2X2、P2Y1、P2Y2）无显著拮抗活性[1]
- 抑制ATP诱导的白细胞介素-1β（IL-1β）释放：人单核细胞经KN-62（1-5 μM）处理后，ATP诱导的IL-1β分泌呈剂量依赖性降低，5 μM剂量下最大抑制率达78%[1]

植入 TAMR-MCF-7 细胞的五周龄 BALB/c 无胸腺裸鼠在接受KN-62（5?mg/kg/天；腹膜内；每周 3 次，持续六周）后显示肝转移肿瘤负荷显着降低）[3]。 ?ZnCl2 (10 mg/kg, po) 不表现出抗抑郁样行为，KN-62 (1 µg/位点, icv) 也不表现出抗抑郁样行为[5]。

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如图1C所示，CAMKII抑制剂KN-62（1μg/位点，i.c.v.）可预防ZnCl2（10mg/kg，口服）的抗抑郁样行为（p<0.01）。双因素方差分析显示，KN-62处理对不动时间有显著的主效应[F（1,28）=27.47，p<0.01]，ZnCl2处理没有主效应[F（1.28）=0.84，p>0.05]，而KN-62×ZnCl2处理相互作用[F（1,28）=22.57，p<0.01）有显著影响。事后分析表明，用KN-62处理动物可以完全阻止ZnCl2的抗固定作用。在旷场试验中没有观察到对运动活动的影响（图1D）：（KN-62处理[F（1,24）=1.97，p>0.05]，ZnCl2处理[F，1,24=3.99，p>0.05]和KN-62×ZnCl2处理相互作用[F（1.24）=0.61，p>0.05]）[5]。

磷脂酶D测定[1]
淋巴细胞（1x10~7/ml）与[3 H]-油酸（2±5 mCi ml71，speci®c活性10 Ci mmol71）在RPMI-1640培养基中培养20±24小时，该培养基补充了庆大霉素（40 mg ml71）、10%热灭活胎牛血清（FCS），温度为378C，用于标记膜磷脂。标记的细胞在HEPES缓冲盐水中洗涤两次，然后在HEPES补充盐水或含有HEPES 10 mM、pH 7.4、牛血清白蛋白（BSA）1 g l71和D-葡萄糖5 mM和CaCl2 1 mM的150 mM KCl培养基中进行®nal洗涤。将含有1.16107 ml71淋巴细胞的3 ml等分试样加热至378C，与或不与KN-62或KN-04（1 nM±500 nM）一起孵育5分钟，然后将900 ml等分试样加入100 ml丁醇（®nal浓度30 mM）中再孵育5 min，并在持续存在的情况下用1 mM ATP刺激15 min。抑制剂或稀释剂。通过加入1ml 20mM MgCl2，然后离心并加入1ml冰冷的甲醇来终止磷脂酶D反应。如前所述（Gargett等人，1996），在48℃的氮气下将膜脂质提取到氯仿/HCl中，并在饱和条件下用硅胶薄层色谱法（t.l.c.）用乙酸乙酯/异辛烷/乙酸/水（13:2:3:10，v/v）溶剂系统进行分离。通过放射自显影定位样品斑点，并通过真实标准鉴定[3H]-磷脂酰丁醇（[3H]-PBut）斑点。将[3H]-PBut和[3H]-磷脂斑点刮入闪烁液（甲苯中的PPO，4 g l71）中，并在液体闪烁计数器中计数。[3H]-PBut的量以3H-标记的细胞1484总量的百分比表示。C.E.Gargett和J.S.WileyKN-62是一种强效的P2Z受体拮抗剂磷脂。磷脂酶D测定一式三份，数据表示为平均值+标准误差平均值。

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CaMKII活性实验：将纯化的CaMKII与含ATP、MgCl2、钙调蛋白和合成肽底物（源自糖原合酶激酶3）的反应缓冲液在KN-62系列稀释液存在下共同孵育。30°C孵育20分钟后加入终止液终止反应，采用激酶实验检测系统测定肽底物的磷酸化水平，从剂量-效应曲线计算IC50值[2]
- 激酶选择性实验：在浓度高达10 μM时检测KN-62对纯化重组激酶（PKA、PKC、MAPK、CDK1）的抑制作用。每种激酶在最佳反应条件下与相应特异性底物、ATP和KN-62共同孵育，通过测定底物磷酸化水平确定激酶活性，计算相对于溶媒对照组的抑制率[2]

流式细胞术测定乙锭浓度[1]
将淋巴细胞（1x10~8/ml）在1ml含有HEPES 10mM、pH 7.4、BSA 1g l71和D-葡萄糖5mM的150mM KCl培养基中稀释至1x10~6/ml。细胞悬浮液在378C下与或不与KN-62或KN-04（1nM±1mM）一起孵育5分钟，然后加入ATP（500mM），再孵育2分钟，然后添加乙锭（25mM）。在抑制剂或稀释剂的持续存在下，在添加乙锭前30秒和添加乙锭后5分钟内，从搅拌和温度控制（378C）的样品中收集荧光信号。使用库尔特Elite流式细胞仪，在488 nm的氩激光激发下，在连续6 s的间隔内收集淋巴细胞相关荧光信号的直方图（256个通道）。使用590 nm长通滤光片收集荧光发射。然后计算连续6秒间隔收集的每个直方图的荧光强度平均通道，并绘制时间图。

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ATP诱导的51Cr释放实验（淋巴细胞毒性）：人外周血淋巴细胞在37°C下负载51Cr 90分钟，洗涤后重悬于培养基中。加入KN-62系列稀释液，随后加入ATP（1 mM）作为P2Z受体激动剂。37°C孵育4小时后收集上清液，γ计数器测定放射性强度，计算51Cr释放百分比（反映细胞毒性），并从浓度-效应曲线推导Ki值[1]
- 细胞内Ca2+检测：人淋巴细胞在37°C下负载荧光Ca2+指示剂30分钟，洗涤后与KN-62（0.1-10 μM）孵育15分钟。加入ATP（1 mM），荧光计记录荧光强度变化（反映细胞内Ca2+升高），确定抑制50% ATP诱导荧光反应的KN-62浓度[1]
- IL-1β释放实验：从外周血中分离人单核细胞，接种到24孔板中。用脂多糖（LPS）预处理细胞24小时，随后加入KN-62（1-5 μM）孵育30分钟，再加入ATP（5 mM）。孵育2小时后收集上清液，采用免疫测定法检测IL-1β浓度[1]

溶于 0.5 mM KN-62/50% DMSO；2 pmol；脑室内 (ICV) 注射 Sprague Dawley 大鼠。考虑到调节脑内 BDNF 的细胞内信号通路与抗抑郁反应有关，本研究探讨了 BDNF 上游信号通路抑制剂是否会影响锌（一种已被证明具有抗抑郁特性的金属）的抗抑郁样作用。为此，本研究探讨了脑室内注射H-89（1μg/位点，PKA抑制剂）、KN-62（1μg/位点，CAMKII抑制剂）、chelerythrine（1μg/位点，PKC抑制剂）、PD98059（5μg/位点，MEK1/2抑制剂）、U0126（5μg/位点，MEK1/2抑制剂）和LY294002（10nmol/位点，PI3K抑制剂）对氯化锌（ZnCl2，10mg/kg，口服）诱导的悬尾试验（TST）中不动时间减少的影响。此外，还评估了亚有效剂量氯化锌（1mg/kg，口服）与AR-A014418（0.001μg/位点，GSK-3β抑制剂）联合用药的效果。本研究还探讨了氯化锌（ZnCl2）处理后小鼠海马和前额叶皮层中CREB磷酸化水平和BDNF免疫含量的变化。在强迫游泳试验（TST）中，PKA、PKC、CAMKII、MEK1/2或PI3K抑制剂均可阻断ZnCl2的抗不动作用。此外，ZnCl2与AR-A014418联合使用在TST中表现出协同抗不动作用。所有处理均未改变小鼠的运动活性。ZnCl2处理未引起CREB磷酸化水平和BDNF免疫含量的改变。这些结果拓展了关于锌抗抑郁样作用机制的文献报道，表明其抗抑郁样作用可能依赖于PKA、CAMKII、PKC、ERK和PI3K/GSK-3β信号通路的激活。然而，锌不能迅速增加海马和前额叶皮层中的脑源性神经营养因子（BDNF）水平。[5]

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雌性瑞士小鼠（45-55日龄，体重30-45克）饲养于20-22℃，自由摄食饮水，光照周期为12:12小时（上午7:00开灯）。小鼠以15只为一组，饲养于41×34×16厘米的笼子中。所有行为学测试均在上午9:00至下午4:00之间进行。测试前，小鼠在实验室中适应至少12小时。 [5]
使用的药物如下：氯化锌 (ZnCl2)（1 或 10 mg/kg）、N-[2-(对溴肉桂酰氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺 — H-89（1 μg/位点，PKA 抑制剂）、4-[2-[(5-异喹啉基磺酰基)甲基氨基]-3-氧代-3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙基]苯酯 — KN-62（1 μg/位点，CAMKII 抑制剂）、chelerythrine（1 μg/位点，PKC 抑制剂）、PD98059（5 μg/位点，丝裂原活化蛋白激酶激酶 (MAPKK/MEK 1/2) 抑制剂）、U0126（5 μg/位点，MEK1/2 抑制剂）、LY294002（10 nmol/位点（PI3K抑制剂），AR-A014418（0.001 μg/位点，选择性GSK-3β抑制剂）。氯化锌溶于蒸馏水中，经口（po）给药。H-89、KN-62、chelerythrine、PD98059、U0126、LY294002和AR-A014418溶于生理盐水（0.9% NaCl）中，最终二甲基亚砜（DMSO）浓度为1%，经脑室内（icv）给药。药物在给药前新鲜配制，给药剂量为10 ml/kg体重（po）或5 μl/位点（icv）。对照组动物接受了相应的溶剂。[5]
为了验证锌的抗抑郁样作用是否依赖于细胞内信号通路的激活，小鼠预先接受了有效剂量的氯化锌（ZnCl2，10 mg/kg，口服），30分钟后，分别接受了亚有效剂量的H-89、KN-62、PD98059、U0126、chelerythrine或LY294002。30分钟后（锌给药后60分钟），对动物进行行为学测试。此外，为了研究锌与GSK-3β抑制剂之间可能存在的协同作用，动物接受了（口服）溶剂或亚有效剂量的氯化锌（1 mg/kg）。30分钟后，它们接受了（脑室内注射）亚有效剂量的AR-A014418或溶剂。最后一次给药结束后30分钟，进行行为学测试。[5]
所用氯化锌（ZnCl2）剂量是根据我们实验室先前进行的实验（Cunha等人，2008）选择的。H-89、KN-62、chelerythrine、PD98059、U0126、LY294002和AR-A014418的剂量是根据我们实验室或其他研究小组先前进行的实验（Almeida等人，2006；Budni等人，2011；Cunha等人，2014；Moretti等人，2014；Zeni等人，2012）选择的。每组用于行为学测试的动物数量为7-8只。

[1]. The isoquinoline derivative KN-62 a potent antagonist of the P2Z-receptor of human lymphocytes. Br J Pharmacol. 1997 Apr;120(8):1483-90.

[2]. Pharmacology of protein kinase inhibitors. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1992;32:377-97.

[3]. Involvement of the P2X7 receptor in the migration and metastasis of tamoxifen-resistant breast cancer: effects on small extracellular vesicles production. Sci Rep. 2019 Aug 12;9(1):11587.

[4]. Potent P2X7 Receptor Antagonists: Tyrosyl Derivatives Synthesized Using a Sequential Parallel Synthetic Approach. Drug Dev Res. 2001 Oct;54(2):75-87.

[5]. Antidepressant-like effect of zinc is dependent on signaling pathways implicated in BDNF modulation. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2015 Jun 3;59:59-67.

5-异喹啉磺酸[4-[(2S)-2-[5-异喹啉磺酰基(甲基)氨基]-3-氧代-3-(4-苯基-1-哌嗪基)丙基]苯基]酯是哌嗪类化合物。

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1. 细胞外腺苷5'-三磷酸(ATP)是人类淋巴细胞上P2Z受体的激动剂，可介导阳离子选择性离子通道的开放、磷脂酶D的激活以及粘附分子L-选择素从细胞表面脱落。异喹啉磺酰胺类化合物KN-62（1-[N, O-双(5-异喹啉磺酰基)-N-甲基-L-酪氨酰]-4-苯基哌嗪），一种选择性Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II (CaMKII) 拮抗剂，以及KN-04（N-[1-[N-甲基-对-(5-异喹啉磺酰基)苄基]-2-(4-苯基哌嗪)乙基]-5-异喹啉磺酰胺），一种无活性的类似物，被用于研究CaMKII在细胞外ATP的这些不同作用中的可能作用。 2. KN-62 能有效拮抗 ATP 刺激的 Ba2+ 流入负载 fura-2 的人淋巴细胞，IC50 值为 12.7 ± 1.5 nM (n = 3)，在 500 nM 浓度下可完全抑制该流入。同样，KN-62 也能抑制 ATP 刺激的溴化乙锭摄取（通过时间分辨流式细胞术测定），IC50 值为 13.1 ± 2.6 nM (n = 4)，在 500 nM 浓度下可完全抑制该流入。3. KN-04 能拮抗 ATP 刺激的 Ba2+ 流入，IC50 值为 17.3 ± 2.7 nM (n = 3)。同样，KN-04抑制ATP刺激的溴化乙锭摄取，IC50为37.2±8.9 nM（n=4）。在500 nM KN-04浓度下，两种摄取均被完全抑制。4. ATP刺激的磷脂酶D活性（通过[3H]-油酸标记的淋巴细胞中的转磷脂酰化反应测定）可被KN-62和KN-04拮抗，抑制浓度分别为5.9±1.2 nM和9.7±2.8 nM（n=3）。 KN-62 和 KN-04 均能抑制 ATP 刺激的 L-选择素脱落，该抑制作用通过流式细胞术分析细胞表面 L-选择素的表达来测定，其 IC50 值分别为 31.5 ± 4.5 nM 和 78.7 ± 10.8 nM (n = 3)。两种异喹啉磺酰胺类化合物 (500 nM) 均不抑制佛波酯或离子霉素刺激的磷脂酶 D 活性，也不抑制佛波酯诱导的 L-选择素脱落。5. KN-62 或 KN-04 对 P2Z 介导的反应的抑制作用起效缓慢（5 分钟），且洗涤细胞后仅部分逆转。 6. KN-62 和 KN-04（浓度均为 500 nM）均对尿苷三磷酸 (UTP) 刺激的、经 fura-2 负载的人中性粒细胞的 Ca2+ 瞬变无影响，而该反应是由 P2Y2 受体介导的。7. 因此，KN-62 和 KN-04 是 P2Z 受体的强效拮抗剂，在纳摩尔浓度下即可抑制所有已知的由人淋巴细胞 P2Z 受体介导的反应。相反，KN-62 和 KN-04 对中性粒细胞 P2Y2 受体介导的反应无影响。此外，由于KN-62和KN-04的效力几乎相同，P2Z介导的反应不涉及CaMKII，而是表明异喹啉磺酰胺类化合物是P2Z受体的强效直接抑制剂。[1] 合成了1-(N,O-双[5-异喹啉磺酰基]-N-甲基-L-酪氨酰基)-4-苯基哌嗪(KN-62,1)的新型类似物，并在功能性测定中发现其是强效拮抗剂，能够抑制表达重组人P2X7受体的HEK293细胞中ATP诱导的K+外流。同时观察到其对小鼠P2X7受体的拮抗作用。这些类似物由L-酪氨酸衍生物组成，其通式为R1-Tyr(OR2)-哌嗪基-R3，其中三个位置的结构通过简便的酰化反应进行了系统性改变。通过平行合成与生物学评价交替进行，依次优化了三个位置，最终鉴定并优化了高效的P2X7拮抗剂。R1位的最佳基团为大的疏水基团，通过氨基甲酸酯、酰胺或磺酰胺基团与α-氨基相连。苄氧羰基（Cbz）基团优于大多数磺酰胺和其他酰基，喹啉磺酰基除外。R2位的最佳基团为芳基磺酸酯，其效力顺序为：对甲苯基、对甲氧基苯基、苯基 > α-萘基、β-萘基。苯甲酸酯的效力居中。酪氨酰酚上的脂肪族酯和碳酸酯衍生物无活性，而酪氨酰O-苄基醚的活性相对较高。本研究中鉴定出的最有效的P2X7受体拮抗剂在R1位含有Cbz基团，R2位含有芳基磺酸酯基团，R3位含有各种酰基。在R3位，叔丁氧羰基和苯甲酰基是优选的。哌嗪环开环为乙二胺部分后，拮抗作用消失。在浓度-反应研究中，二异喹啉基Boc衍生物4（MRS2306）作为P2X7受体介导的离子流拮抗剂，其IC50值为40 nM，且效力高于参考化合物1。Nα-Cbz、Boc-哌嗪基衍生物11（MRS2317）、22（MRS2326）和41（MRS2409）的效力低于1，IC50值为200-300 nM。[4]

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考虑到调节脑内BDNF的细胞内信号通路与抗抑郁反应有关，本研究探讨了BDNF上游信号通路抑制剂是否会影响锌（一种已被证明具有抗抑郁特性的金属）的抗抑郁样作用。为此，本研究探讨了脑室内注射H-89（1μg/位点，PKA抑制剂）、KN-62（1μg/位点，CAMKII抑制剂）、chelerythrine（1μg/位点，PKC抑制剂）、PD98059（5μg/位点，MEK1/2抑制剂）、U0126（5μg/位点，MEK1/2抑制剂）和LY294002（10nmol/位点，PI3K抑制剂）对氯化锌（ZnCl2，10mg/kg，口服）诱导的悬尾试验（TST）中不动时间减少的影响。此外，还评估了亚有效剂量氯化锌（1mg/kg，口服）与AR-A014418（0.001μg/位点，GSK-3β抑制剂）联合用药的效果。本研究还探讨了氯化锌（ZnCl2）处理后小鼠海马和前额叶皮层中CREB磷酸化水平和BDNF免疫含量的变化。在强迫游泳试验（TST）中，PKA、PKC、CAMKII、MEK1/2或PI3K抑制剂均可阻断ZnCl2的抗不动作用。此外，ZnCl2与AR-A014418联合使用在TST中表现出协同抗不动作用。所有处理均未改变小鼠的运动活性。ZnCl2处理未引起CREB磷酸化水平和BDNF免疫含量的改变。这些结果拓展了关于锌抗抑郁样作用机制的文献报道，表明其抗抑郁样作用可能依赖于PKA、CAMKII、PKC、ERK和PI3K/GSK-3β信号通路的激活。然而，锌不能急性增加海马和前额叶皮层中的脑源性神经营养因子（BDNF）水平。[5]

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KN-62是一种异喹啉衍生物，最初被鉴定为P2Z受体（后被归类为P2X7受体）的选择性拮抗剂[1]
-它也是CaMKII的选择性抑制剂，对其他丝氨酸/苏氨酸激酶具有高度选择性[2]
-KN-62对P2Z受体的拮抗作用是通过与受体的ATP结合位点竞争性结合实现的，从而阻止ATP诱导的受体激活和随后的下游信号传导（例如，Ca2+内流、细胞毒性、细胞因子释放）[1]
-KN-62已被广泛用作研究P2X7受体和CaMKII在免疫细胞和其他细胞类型中的生理和病理作用的工具化合物。 [1][2]

C38H35N5O6S2

721.84

721.202

C, 63.23; H, 4.89; N, 9.70; O, 13.30; S, 8.88

127191-97-3

5312126

Light yellow to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

964.7±75.0 °C at 760 mmHg

92-94°C

537.3±37.1 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.686

5.23

146.84

0

10

10

51

1370

1

S(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C([H])=NC([H])=C([H])C1=2)(N(C([H])([H])[H])[C@@]([H])(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])OS(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C([H])=NC([H])=C([H])C1=2)(=O)=O)C(N1C([H])([H])C([H])([H])N(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)(=O)=O

RJVLFQBBRSMWHX-DHUJRADRSA-N

InChI=1S/C38H35N5O6S2/c1-41(50(45,46)36-11-5-7-29-26-39-19-17-33(29)36)35(38(44)43-23-21-42(22-24-43)31-9-3-2-4-10-31)25-28-13-15-32(16-14-28)49-51(47,48)37-12-6-8-30-27-40-20-18-34(30)37/h2-20,26-27,35H,21-25H2,1H3/t35-/m0/s1

(S)-4-(2-(N-methylisoquinoline-5-sulfonamido)-3-oxo-3-(4-phenylpiperazin-1-yl)propyl)phenyl isoquinoline-5-sulfonate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.46 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.46 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。