| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
H-Ras·GTP; Ras-Raf interaction ( Ki = 149 μM )
Target: Kobe-2602 targets the Ras-Raf interaction by competitively inhibiting the binding of H-Ras·GTP to the c-Raf-1 RBD (Ras-binding domain) with a Ki value of 149±55 μM. By disrupting this critical protein-protein interaction in the MAPK signaling pathway, it inhibits downstream Raf-MEK-ERK signaling. Kobe-2602 inhibits Ras·GTP but not Ras·GDP, indicating specificity for the active GTP-bound form of Ras. The compound inhibits cellular Ras-Raf binding with an IC50 value of approximately 10 μM. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
Kobe2602（2–20 μM；1 小时）在 NIH 3T3 细胞中显示出对 Ras-Raf 结合的抑制作用[1]。
Kobe2602 抑制细胞 Ras-Raf 结合的 IC50 值约为 10 μM[1]。 Kobe2602（20 μM）有效抑制瞬时表达 H-RasG12V 的 NIH 3T3 细胞中 Raf 下游激酶 MEK 和 ERK 的磷酸化[1]。 Kobe2602 抑制 Ras⋅GTP，但不抑制 Ras⋅GDP[1]。 Kobe2602（20 μM）阻止 H-RasG12V 转化细胞的锚定依赖性增殖[1]。 体外活性：Kobe-2602（2-20 μM；1 小时） Kobe-2602 (20 μM) 可抑制 NIH 3T3 细胞中 Ras-Raf 的结合。在 20 μM 浓度下，它能有效抑制瞬时表达 H-RasG12V 的 NIH 3T3 细胞中 Raf 下游激酶 MEK 和 ERK 的磷酸化。它抑制细胞 Ras-Raf 结合的 IC50 值约为 10 μM。Kobe-2602 (20 μM) 可阻止 H-RasG12V 转化细胞的锚定依赖性增殖。它能有效抑制 H-Ras(G12V) 转化的 NIH 3T3 细胞的锚定依赖性和非锚定依赖性生长，并诱导细胞凋亡。同时，下游分子（包括 MEK/ERK、Akt 和 RalA）以及上游分子 Son of Sevenless 的表达均下调。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Kobe2602（80 mg/kg；口服；每周连续五天；持续17天）对携带K-RasG12V突变的人结肠癌SW480细胞异种移植瘤具有抗肿瘤活性[1]。
体内活性：口服Kobe-2602（80 mg/kg；口服；每周连续五天；持续17天）对携带K-ras(G12V)基因的人结肠癌SW480细胞异种移植瘤具有抗肿瘤活性。该化合物通过干扰Ras-GTP效应蛋白的相互作用发挥抗肿瘤活性。Kobe-2602及其类似物Kobe0065在体内和体外均表现出对H-Ras·GTP-c-Raf-1结合的抑制活性。Kobe-2602可能作为构建更有效、更具选择性的Ras抑制剂的基础化合物。 |
| 酶活实验 |
生化分析[1]
H-Ras（氨基酸残基 1–166）和 GST-c-Raf-1-Ras 结合结构域 (RBD；氨基酸残基 50–131) 在大肠杆菌中表达，并按先前所述方法纯化。体外结合抑制实验中，预先负载 [γ35S]GTPγS 的 H-Ras(1–166) 与 GST-c-Raf-1-RBD(50–131) 在 25 °C 下孵育 30 分钟，并在化合物存在下进行反应。结合的 H-Ras 量通过谷胱甘肽-琼脂糖树脂下拉法测定放射性来定量。化合物的 Ki 值按图 S1 所示方法计算。对于体内试验，将 NIH 3T3 细胞转染 pEF-BOS-HA-H-RasG12V 或 pEF-BOS-HAK-RasG12V，在 10% (体积/体积) FBS 中培养 18 小时，然后在 2% (体积/体积) FBS 中与化合物孵育 1 小时。细胞在含有 50 mM Tris·HCl (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% Nonidet P-40、10% (v/v) 甘油、1 mM EDTA、1 mM DTT、磷酸酶抑制剂混合物和蛋白酶抑制剂混合物的裂解缓冲液中裂解，然后用抗 cRaf-1 抗体 (C-12) 通过 Western 印迹法检测与抗 H-Ras 抗体 (C-20) 共免疫沉淀的 c-Raf-1；用抗 pMEK1/2 (p217/p221) 和抗 ERK1/2 (p202/204) 抗体检测磷酸化 MEK 和 ERK；用抗 pAkt 抗体 (Ser473) 检测磷酸化 Akt；以及用固定在 GST-Sec5(1–99) 上的 GST-Sec5(1–99) 下拉 RalA·GTP。谷胱甘肽-琼脂糖树脂用抗RalA抗体进行检测。HA标签的H-RasG12V·GTP用抗HA抗体进行检测。重组c-Raf-1的激酶活性体外测定采用Raf-1激酶活性检测试剂盒进行。体外GDP-GTP交换实验通过将600 nM GST-H-Ras(1–166)·GDP固定在谷胱甘肽-琼脂糖树脂上，与11 μM [γ35S]GTPγS (1,500 cpm/pmol)在25 °C下孵育进行，同时加入纯化的6×His标签小鼠Son of sevenless (mSos)1(563–1,049)（每种180 nM）、野生型或W729E突变体(5)，缓冲液B [50 mM Tris·HCl (pH 7.4)、50 mM NaCl、5 mM MgCl2、1 mM DTT和20 mM咪唑]。充分洗涤后，用液体闪烁计数法定量树脂上残留的放射性。向反应混合物中加入不同浓度的化合物以观察其抑制作用。 体外酶/受体结合实验方案：在体外结合抑制实验中，将预先负载[γ-S]GTPγS的H-Ras(1-166)与GST-c-Raf-1-RBD(50-131)在25°C下与化合物孵育30分钟。通过谷胱甘肽-琼脂糖树脂下拉放射性来定量结合的H-Ras的量。使用不同浓度的Kobe-2602进行竞争性结合实验以确定Ki值。迁移实验在24孔、8 μm孔径的Transwell小室中进行。 |
| 细胞实验 |
细胞系：H-rasG12V转化的NIH 3T3细胞
浓度：20 μM 孵育时间：24小时、48小时、72小时 结果：以剂量依赖的方式有效抑制软琼脂中的克隆形成。 克隆形成实验。[1] 将10³至10⁴个细胞接种于2 mL含有10% (v/v) FBS、0.33% SeaPlaque琼脂糖和其中一种化合物的DMEM培养基中，然后将其覆盖在由4 mL含有10% (v/v) FBS、0.6% SeaPlaque琼脂糖和相同浓度化合物的DMEM培养基组成的底部琼脂上，置于六孔培养板中。在 37 °C 下培养 14–21 天后，在解剖显微镜下计数直径 >200 μm 的菌落数。 细胞增殖实验。[1] 将 2 × 10³ 个细胞接种于 96 孔板中，并在含有 2% (v/v) FBS 的 DMEM 培养基中培养，同时加入一种化合物。使用 Cell Counting Kit 8 通过甲臜形成法测定活细胞数量。使用原位细胞检测试剂盒通过标准 TUNEL 法检测凋亡细胞。 体外细胞实验方案：将瞬时表达 H-RasG12V 的 NIH 3T3 细胞用浓度为 2 至 20 μM 的 Kobe-2602 处理 1 小时。孵育后，裂解细胞，并使用针对磷酸化MEK和磷酸化ERK的抗体，通过Western blotting检测蛋白质磷酸化水平。采用锚定依赖性和非锚定依赖性生长实验测定细胞增殖。采用Annexin V/PI染色或caspase活性检测等标准方法评估细胞凋亡。 |
| 动物实验 |
雌性无胸腺裸鼠（6-8周龄），SW480细胞异种移植
80 mg/kg 口服给药，每周连续5天，持续17天 肿瘤异种移植。[1] 将细胞（5 × 10⁶）植入雌性无胸腺裸鼠（6-8周龄）的右侧腹部。当肿瘤平均体积达到约50 mm³时，将化合物（例如Kobe0065）悬浮于Cremophor:乙醇:水（1:1:6）混合溶液中，每周连续5天口服给药，持续17天。肿瘤体积（V）的计算公式为：V = A × B² / 2，其中A为最大直径，B为垂直直径。在连续17天给予80 mg/kg化合物后，解剖肿瘤组织，并用4%（w/v）多聚甲醛固定，石蜡包埋。使用HISTMOUSE-PLUS试剂盒，对肿瘤切片进行抗ERK1/2抗体或抗CD31抗体的免疫组织化学染色。采用TUNEL法检测凋亡细胞。组间比较（3个或3个以上）的统计学显著性采用单因素方差分析（ANOVA），并进行Tukey事后检验。体内动物实验方案：采用携带K-ras(G12V)基因的人结肠癌SW480细胞构建异种移植瘤模型。荷瘤小鼠每周连续5天，每天口服80 mg/kg Kobe-2602，持续17天。通过游标卡尺测量肿瘤生长抑制情况。同时监测小鼠体重和一般健康状况，以评估毒性反应。研究结束时，切除肿瘤进行组织学和药效学标志物分析。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
药代动力学：公开资料中尚未充分描述 Kobe-2602 的详细药代动力学特性。作为一种分子量为 419.31 的小分子，鉴于 80 mg/kg 的口服剂量已显示出抗肿瘤活性，预计其具有良好的口服生物利用度。该化合物在 DMSO 中的溶解度为 79 mg/mL (188.4 mM)。需要进一步的 ADME 研究以进行全面的药代动力学分析。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性：目前尚无公开的Kobe-2602详细毒性数据。在异种移植研究中，口服剂量为80 mg/kg时，未报告显著不良反应。由于该化合物为研究用化合物，并非用于人体，因此尚未广泛发表全面的毒理学分析。任何临床开发前均需进行标准的临床前安全性评估。该化合物仅供研究使用。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Ras癌基因产物（H-Ras、K-Ras和N-Ras）的突变激活在人类癌症中十分常见，使其成为极具潜力的抗癌药物靶点。然而，由于缺乏适合药物结合的明确表面口袋，目前尚无有效的Ras抑制剂开发策略。直到最近，人们才在具有独特构象的Ras·GTP晶体结构中发现了此类口袋。本文报道了通过计算机筛选成功开发出一种小分子Ras抑制剂，该抑制剂靶向M-Ras·GTP晶体结构中发现的、带有H-Ras型P40D取代的口袋。筛选得到的化合物Kobe0065及其类似物Kobe2602在体内和体外均表现出对H-Ras·GTP-c-Raf-1结合的抑制活性。它们能有效抑制H-ras(G12V)转化NIH 3T3细胞的锚定依赖性和非锚定依赖性生长，并诱导其凋亡，同时下调下游分子如MEK/ERK、Akt和RalA以及上游分子Son of sevenless的表达。此外，口服给药后，它们还显示出对携带K-ras(G12V)基因的人结肠癌SW480细胞异种移植瘤的抗肿瘤活性。该化合物及其与H-Ras⋅GTP(T35S)复合物的核磁共振结构表明，该化合物具有独特的构象，证实其插入到表面口袋之一，并为抑制其与多种Ras⋅GTP相互作用分子的结合提供了分子基础。本研究证明了我们基于结构的Ras⋅GTP药物设计策略的有效性，所得Kobe0065系列化合物可作为开发更高效力和特异性Ras抑制剂的骨架。 [1]
补充信息：Kobe-2602 的 CAS 编号为 454453-49-7，也称为 Kobe2602、2-[2,6-二硝基-4-(三氟甲基)苯基]-N-(4-氟苯基)肼基硫代甲酰胺和 CHEMBL5280849。它是 Kobe0065 的类似物，能有效抑制 H-Ras(G12V) 转化细胞的生长。该化合物是通过基于结构的药物设计发现的，是一种 Ras-Raf 相互作用抑制剂。它具有抗癌化疗活性。Kobe-2602 可作为构建更高效、更具选择性的 Ras 抑制剂的基础化合物。仅供研究使用，不得用于人体治疗。 |
| 分子式 |
C14H9N5O4F4S
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|---|---|
| 分子量 |
419.31096
|
| 精确质量 |
419.031
|
| 元素分析 |
C, 40.10; H, 2.16; F, 18.12; N, 16.70; O, 15.26; S, 7.65
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| CAS号 |
454453-49-7
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| PubChem CID |
3827738
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| 外观&性状 |
Light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.7±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
450.8±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
226.5±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.683
|
| LogP |
5.12
|
| tPSA |
160
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
568
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
FC(C1=CC([N+]([O-])=O)=C(NNC(NC2=CC=C(F)C=C2)=S)C([N+]([O-])=O)=C1)(F)F
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| InChi Key |
NNPBSITXCGPXJC-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C14H9F4N5O4S/c15-8-1-3-9(4-2-8)19-13(28)21-20-12-10(22(24)25)5-7(14(16,17)18)6-11(12)23(26)27/h1-6,20H,(H2,19,21,28)
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| 化学名 |
1-[2,6-dinitro-4-(trifluoromethyl)anilino]-3-(4-fluorophenyl)thiourea
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| 别名 |
Kobe 2602; Kobe2602; kobe2602; 454453-49-7; 2-[2,6-Dinitro-4-(trifluoromethyl)phenyl]-N-(4-fluorophenyl)hydrazinecarbothioamide; CHEMBL5280849; 1-[2,6-dinitro-4-(trifluoromethyl)anilino]-3-(4-fluorophenyl)thiourea; 3-{[2,6-dinitro-4-(trifluoromethyl)phenyl]amino}-1-(4-fluorophenyl)thiourea; 2-(2,6-dinitro-4-(trifluoromethyl)phenyl)-N-(4-fluorophenyl)hydrazinecarbothioamide; Kobe-2602
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 14.3~84 mg/mL (34.1~200.3 mM)
Ethanol: ~14 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3849 mL | 11.9244 mL | 23.8487 mL | |
| 5 mM | 0.4770 mL | 2.3849 mL | 4.7697 mL | |
| 10 mM | 0.2385 mL | 1.1924 mL | 2.3849 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Inhibition of various downstream targets of Ras by the Kobe0065-family compounds.
Molecular basis for the interaction of Ras⋅GTP with the Kobe0065-family compounds.Proc Natl Acad Sci U S A.2013 May 14;110(20):8182-7. |
|---|
 Inhibition of Sos by the Kobe0065-family compounds and effect of the Sos activity on the cellular RasG12V⋅GTP level.
Anti-proliferative activity of the Kobe0065-family compounds on a tumor xenograft.Proc Natl Acad Sci U S A.2013 May 14;110(20):8182-7. |
 Inhibition of proliferation of H-rasG12V–transformed cells by the Kobe0065-family compounds.Proc Natl Acad Sci U S A.2013 May 14;110(20):8182-7. |
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